糖醛酸含量测定

糖醛酸含量测定——硫酸-咔唑（523 nm）

1实验材料

1.1药品：半乳糖醛酸、四硼酸钠、浓硫酸、无水乙醇、咔唑、漩涡混合器、具塞试管

1.2对照品溶液的配制

精密称取干燥至恒质量的半乳糖醛酸10mg, 用适量的蒸馏水溶解, 并定容于100mL 容量瓶中, 配 成100μg/mL 的对照品溶液。 1.3供试品溶液的配制

精密称取多糖10mg, 加入蒸馏水溶解, 并定容于10mL 容量瓶中, 配制成浓度为1mg/mL 溶液。 1.4四硼酸钠- 硫酸溶液的配制

精密称取0.478g 四硼酸钠溶解于100mL 浓硫酸中备用[3]。 1.5咔唑溶液的配制

精密称取咔唑75mg, 溶解于50mL 无水乙醇中,配制成0.15%的咔唑溶液备用。 2实验方法

2.1测定波长的选择

分别吸取对照品溶液、供试品溶液1mL, 置于10mL 具塞试管中, 在冰水浴中分别加入四硼酸钠- 硫酸溶液5mL, 用漩涡混合器混匀, 于沸水浴中加热20min, 取出后立即冷却至室温, 加0.15%咔唑溶液0.2mL, 摇匀, 在室温下保持2h, 另取1mL 蒸馏水同法操作作参比, 在波长400～800nm 扫描, 2.2标准曲线的制作

分别精密吸取对照品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0mL 于10mL 具塞试 管中, 各管加水至1mL, 分别在冰水浴中加入四硼酸钠- 硫酸溶液5mL,取出后立即冷却至室温, 加0.15%咔唑溶液0.2mL, 摇匀, 在室温下保持2h, 在最佳测定波长下测定其吸光度。

编号 100μg/mL半乳糖醛酸溶液（ml） 四硼浓度蒸馏水酸钠- （ml） （μg/mL） 硫酸溶液 0 1 标1 标2 0．1 0．9 标3 0．2 0．8 标4 0．3 0．7 标5 0．4 0．6 标6 0．5 0．5 标7 0．6 0．4 标8 0．7 0．3 标9 0．8 0．2 标0．9 0．1 10 标0 1．0 11

2.3样品糖醛酸含量的测定

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 用漩涡混合器混匀, 于沸水浴 中加热20min, 0.15%咔唑溶液(ml) OD1 OD2 OD3 平均值 0．2 0．2 0．2 0．2 0．2 0．2 0．2 0．2 0．2 0．2 0．2 取供试品溶液各1 mL，同时做三个重复, 以空白试剂为参比, 按上述标准曲线的测定法, 分别测定其吸光度值, 计算样品中蛋白质的含量。

1

蕨麻多糖（1 mg/ml）

编号 OD1 OD2 OD3 平均值 浓度（mg/ml） 蛋白含量% 硒多糖 PAP 1-1 1-2 1-3 2-1 2-2 3 4 5 6 7 ASP 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 粗糖 1-1 1-2 1-3 1 mg/ml 0．5mg/ml 精糖 200 400 800 1200 7000 ASPJ ASPC 300 600 900 1300 5000 白沙蒿 ASPJ ASPc S-2（7.4） 5（6.992） 10（6.7） W-2（6.4） 正9（5.9） 黑沙蒿 粗糖 精糖 19（9.9） 30（8.4） 25（7.9） 13（7.3） WH1（5.9） 瓜尔豆胶 ＧＯ Ｇｊ G31（7.1） G32（6.7） G25(6) G26(5.7) 2

3.1 稳定性实验

取同一供试品溶液1 mL, 按下列时间梯度 测定3 次,观测其稳定性, 结果见表。

稳定性实验结果 时间（min ） OD1 OD2 OD3 平均值 10 20 30 40 50 60 70 80 90 120 150 静置时间过长？ 3.2 精密度实验

精密吸取100 μg/mL标准溶液0.5 mL 进行精密度试验, 连续进行6 次测定其吸光度, 时间（min ） OD 1 2 2 3 4 5 6 3.3重现性实验

精密吸取来自同一批原料的试样, 按样品测定方法, 分别测定其吸光度, 检验该测定方法的重现性, 表明重复性较好, 样品号 OD1 OD2 OD3 平均值 1 2 3 4 5 6 平均值 3.4回收率实验

精密吸取1mg/mL 供试品溶液0.1mL, 分别加入0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL 的对照品溶液, 按样品测 定方法, 分别测定其吸光度, 计算回收率 样品号 OD1 OD2 OD3 平均值 0.10 0.2 0.3 0.4 0.5 结果 标样量mL 吸光值 OD1 OD2 OD3 平均值 0.10 0.2 0.3 0.4 0.5

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