青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞系HFL—I细胞增殖、凋亡的影响及机制

山东医药２０１０年第５Ｏ卷第３期　青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞系ＨＦＬ—Ｉ　细胞增殖、凋亡的影响及机制　王昌明，张孝飞‘，谭宁，黄岚珍，林云，徐青　（桂林医学院附属医院，广西桂林５４１００１）　摘要：目的进一步探讨青蒿琥酯的抗纤维化作用及机制。方法取对数生长期人胚肺成纤维细胞（ＨＥＬＦ）　系ＨＦＬ．Ｉ细胞株，随机分为观察Ｉ一４组及对照组，观察ｌ一４组分别加入质量浓度为４、８、１６、３２　ｍｇ／Ｌ的青蒿琥酯，　对照组加入等体积培养液后继续培养。用ＣＣＫ－８法检测细胞增殖情况（Ａ值），流式细胞仪检测细胞周期及凋亡　率，ＲＴ－ＰＣＲ法测定Ｓｕｒｖｉｖｉｎ　Ａ表达。结果观察ｌ一４组Ｇ０＋Ｇ　期细胞所占比例及细胞凋亡率均显著高于对　青蒿琥　照组，细胞Ａ值及Ｓｕｒｖｉｖｉｎ　ｍＲＮＡ表达均显著低于对照组，且各观察组间亦有显著差异（Ｐ＜０．０５）。结论酯具有抗肺纤维化作用，可能机制为通过下调Ｓｕｒｖｉｖｉｎ　ｍＲＮＡ表达抑制ＨＦＬ－Ｉ细胞增殖、促进ＨＦＬ－Ｉ细胞凋亡。　关键词：青蒿琥酯；人胚肺成纤维细胞；增殖；细胞凋亡　中图分类号：Ｒ２８５．５　文献标志码：Ａ　文章编号：１００２－２６６Ｘ（２０１０）０３－００３３－０３　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ａｎｄ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ａ￣ｅｓｕｎａｔｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｅｌＩ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｊｎ　ｈｕｍａｎ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　Ｉｕｎｇ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ　ｃｅｌｌＪｉｎｅ　ＨＦＬ－Ｉ　ＷＡＮＧ　Ｃｈａｎｇ—ｍｉｇ。ｎｚＨＡ　Ｇ　Ｘｉａｏ　ｉ，ＴＡＮ　Ｎｉｎｇ，ＨＵＡＮＧ　Ｌａｎ－ｚｈｅｎ，ＨＮ　Ｙｕｎ，ＸＵ　Ｑｉｇ　ｎ（　Ａ．ｆｆｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｇｕｉｌｉｎ　Ｍｅｄｉａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｇｕｉｌｉｎ　５４１００１，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａ￣：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｔｉｂｒｅｔｉｃ　ａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ａｒｔｅｓｕｎａｔｃ　ｆｕｒｔｈｅｒｌｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｈｕｍａｎ　ｅｍｂｒｙｏ　ｃ　ｌｕｎｇ　ｉｆｂｒｏｂｌａｓｔｓ（ＨＥＬＦ）ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ　ＨＦＬ—１　ｗｅｒｅ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｔｏ　ｌｏｇ　ｐｈａｓｅ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｄ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　４　ｏｂｓｅｒｖｄ　ｇｒｅｏｕｐｓ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ｆｏｒｍｅｒ４　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｔ｝ｌ　ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ　ａｔ　ｔｈｅ　ｍａｓｓ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ４，８，１６，３２　ｍｇ／Ｌ，ｔｈｅ　ｃｏｎ－　ｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ＇ＷＣＩ￣￣ｉｖｅｎ　ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ　ＤＭＥＭ．Ｔｈｅ　ｃｅｌｌ　ｐｒｏｌｆｉｅｒａｔｉｏｎ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＣＣＫ－８　ａｓｓａｙ．ｔｈｅ　ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｒａｔｉｏ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｌｆｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ（ＦＣＭ），ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｕｒｖｉｖｉｎ　ｍＲＮＡ　Ｗａｓ　ｄｅｔｃｔｅｅｄ　ｂｙ　ＲＴ－ＰＣＲ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　Ｇｏ＋Ｇ１　ｓｔａｇｅ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｒａｔｉｏ　ｉｎ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ，Ａ　ｖａｌｕｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｕｒｖｉｖｉｎ　ｍＲＮＡ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｓｉｇｎｉｉｃａｎｔｆｌｙ，ａｎｄ　ｒｅｍａｒｋａｂｌｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｗｅｒｅ　ａｌｓｏ　ｓｃｎ　ｅａｍｏｎｇ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ　Ｃａｎ　ｒｅｓｉｓｔ　ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ，ｎｄ　ａｐｒｏｂａｂｌｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｒｅｌａｔｅ’ｖｉｔｌｌ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＨＦＬ・Ｉ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｕｒｖｉｖｉｎ　ｍＲＮＡ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ａｒｔｅｓｕｎａｔｃ；ｈｕｍａｎ　ｅｍｂ￣ｏｍｃ　ｌｕｎｇ　ｆｉｂｍｂｌａｓｔｓ；ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　肺纤维化是多种病因引起的一种慢性炎性间质　性肺疾病，患者平均生存时问仅为２．５—３　ａ，目前尚　无有效治疗方法。近年研究发现，青蒿素类药物除　可抗疟疾外，亦具有抗肿瘤、抗感染及抗纤维化等作　用。２００９年５—９月，我们观察了青蒿素衍生物青　蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞（Ｈｕｍａｎ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｌｕｎｇ　ＺＡ０８０２０３），ＣＣＫ－８试剂，二甲基亚砜（ＤＭＳＯ），碘化　丙啶（ＰＩ），Ｄ—ＭＥＭ／Ｆ一１２培养基，ＦＢＳ，胰酶；ＲＮＡ提　取试剂Ｔｒｉｚｏｌ，反转录试剂盒ＰｒｉｍｅＳｅｒｉｐｔＭ　ＲＴ　ｒｅａ—Ｔ　ｇｅｎｔ　Ｋｉｔ，ＰＣＲ试剂盒Ｐｒｅｍｉｘ　ＰｒｉｍｅＳＴＡＲ　ＨＳ，引物由　上海赛百盛生物工程有限公司合成。　ｉｆｂｒｏｂｌａｓｔ，ＨＥＬＦ）系ＨＦＬ．Ｉ细胞增殖、凋亡的影响及　１．２　ＨＦＬ—Ｉ细胞培养取ＨＦＬ—Ｉ细胞株，用含１０％　ＦＢＳ、ｌ　ｘ　１０　Ｕ／Ｌ青霉素及１００　ｍｇ／Ｌ链霉素的Ｄ－　ＭＥＭ／Ｆ一１２培养液培养，３７℃、５％ＣＯ２培养箱培养，　机制，旨在为临床治疗肺纤维化提供理论依据。　１材料与方法　１．１材料ＨＦＬ—Ｉ细胞株（中科院细胞库），青蒿琥　３　ｄ换液１次、５～６　ｄ传代１次。取４代以上细胞用　于下列实验。　１．３青蒿琥酯处理及ＨＦＬ—Ｉ细胞增殖情况测定　采用ＣＣＫ．８法。取对数生长期ＨＦＬ．Ｉ细胞接种于　９６孔培养板中，每孔５　０００个，２４　ｈ后随机分为观察　酯（分析纯，纯度＞９９％，广西桂林南药公司，批号　基金项目：广西壮族自治区研究生科研创新项目（９９１６０）。　・通讯作者　１～４组及对照组，前四组分别加入质量浓度为４、８、　３３　山东医药２０１０年第５０卷第３期　１６、３２　ｍｖ＇Ｌ的青蒿琥酯，对照组加人等体积培养　测定。　液，每组设３个复孔，３７℃、５％ＣＯ２饱和湿度下培　１．５　青蒿琥酯处理及ＨＦＬ—Ｉ细胞Ｓｕｒｖｉｖｉｎ　ｍＲＮＡ　养１～４　ｄ，期间吸去培养液，ＰＢＳ洗涤１次，加入含　表达测定取ＨＦＬ—Ｉ细胞接种于６　ａｍ板。细胞贴壁　１０％ＣＣＫ－８溶液１００　的无血清培养基，继续培养　并长至８０％丰度后同上分组及处理，继续培养２４　ｈ　２　ｈ后于４５０　ｎｌｎ处测定吸光度（Ａ值）以反应细胞　后用Ｔｒｉｚｏｌ试剂提取高质量的ＲＮＡ。按照反转录试　增殖情况。　剂盒说明合成ｃＤＮＡ。Ｓｕｒｖｉｖｉｎ及内参Ｂ．ａｃｔｉｎ扩增　１．４青蒿琥酯处理及ＨＦＬ—Ｉ细胞周期、凋亡率检测　产物长度分别为１３１、２２０　ｂｐ。ＰＣＲ反应条件：９４　取对数生长期ＨＦＬ—Ｉ细胞，用含１０％ＦＢＳ的　ｑＣ　３　ｍｉｎ，９４　ｏＣ　３０　ｓ，６４℃２０　Ｓ，７２　ｏＣ　３０　ｓ，共４０个　Ｄ—ＭＥＭ／Ｆ一１２培养液调整细胞至１×１０　／ｍｌ，接种于　循环，４℃保存。采用半定量ＲＴ－ＰＣＲ法测定Ｓｕｒ－　２５　ｃｍ　的培养瓶中，５％ＣＯ　、３７℃培养箱中培养ｌ２　ｖｉｖｉｎ　ｍＲＮＡ表达情况。　ｈ至贴壁，用含０．５％ＦＢＳ的Ｄ．ＭＥＭ／Ｆ．１２培养液　１．６统计学方法采用ＳＰＳＳ　１０．０统计软件。计　培养２４　ｈ，使细胞周期同步化。同上分组及处理，作　量资料以　±ｓ表示，采用方差分析及ｔ检验，率的比　用２４　ｈ后收集贴壁细胞，制成单细胞悬液，７０％乙　较行　检验，Ｐ≤ｏ．０５为差异有显著性。　醇固定，４℃保存过夜，一２Ｏ℃保存（有效期为１　２结果　周）。检测前用ＰＢＳ洗去固定液，加入２０　五组不同时间点ＨＦＬ．Ｉ细胞增殖情况见表１，　ＲｎａｓｅＡ，３７℃孵育３０　ｍｉｎ，暗处加ＰＩ染液，冰浴３Ｏ　细胞周期及凋亡率见表２；Ｓｕｒｖｉｖｉｎ　ｍＲＮＡ表达观察　ｍｉｎ，染色后以３００目筛网过滤。调整细胞浓度为１　４组＜观察３组＜观察２组＜观察１组＜对照组，Ｐ　×１０　～１０　／ｍｌ后采用流式细胞仪，在波长４８８　ｎｍ　均＜０．０５，见图１。　下用Ｍｕｌｔｉｃｙｃｌｅ　ＤＮＡ分析软件行细胞周期与凋亡率　３讨论　表１五组不同时间点细胞增殖情况比较（Ａ值。ｉ－ｌ－Ｓ）　注：与对照组比较，’Ｐ（Ｏ．０５；观察１－４组间两两比较，　Ｐ＜０．０５；与前一时间点比较，ｗｐ＜Ｏ．０５　表２五组Ｉ－ＩＹＬ－Ｉ细胞周期比例及凋亡率（％）　主要成分之一胶原即来自于活化的成纤维细胞。由　于肺成纤维细胞异常增殖及胶原分泌增加在肺纤维　化过程中起重要作用…，抑制肺纤维细胞过度增生　和促进其凋亡成为防治肺纤维化的一种有效手段。　青蒿素是１９７２年我国科研人员首次从菊科植物黄　花蒿中分离得到抗疟疾的有效单体，其衍生物包括　注：与对照组比较，’Ｐ＜Ｏ．０５；观察ｌ一４组间两两比较，　Ｐ＜　二氢青蒿素、蒿甲醚、蒿乙醚和青蒿琥酯，均含有过　氧桥结构，属于新型倍半萜内酯化合物。除青蒿琥　酯在碱性条件下可溶外，其他青蒿素衍生物均难溶　２５０ｂｐ　于水【２】。目前，青蒿素类药物因毒性低、抗疟疾作　２Ｚ００ｂｐ　用强已被ＷＴＯ批准为在世界范围内治疗脑型疟疾　幅０五ｐ　和恶性疟疾的首选药物。近年研究显示，青蒿素类　１００ｂｐ　５ａｂｐ　药物尚有多种其他药理作用。Ｘｕ等　研究发现，青　Ｍ　１　２　３　４　５　蒿素能够呈剂量依赖性的降低ＴＮＦ—　和ＩＬ—ｌ　ｐ在人　图１五组ＨＦＬ－Ｉ细胞Ｓ．ｒｄｖ１．ｍ瑚　表达　类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞中的分泌。　注：Ｍ为Ｍａｒｋｅｒ。１为对照组，２—５分别为观察１－４组　本资料显示，观察１—４组细胞Ａ值均显著低于对　肺纤维化是多种原因所致慢性肺疾病发展到晚　照组、Ｇ。＋Ｇ　期细胞所占比例及细胞凋亡率均显著　期的共同病理变化，其集中表现为成纤维细胞异常　高于对照组，且各观察组间亦有显著差异。提示青　增殖和细胞外基质过度沉积，而肺部细胞外基质的　蒿琥酯能明显抑制ＨＦＬ—Ｉ细胞增殖，且呈时间和剂　３４　山东医药２０１０年第５Ｏ卷第３期　量依赖性。　机制为通过下调Ｓｕｒｖｉｖｉｎ　ｍＲＮＡ表达抑制ＨＦＬ—Ｉ细　Ｓｕｒｖｉｖｉｎ是最近发现的凋亡抑制蛋白（ＩＡｐ）家　胞增殖、促进ＨＦＬ—Ｉ细胞凋亡。　族的新成员，具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分　参考文献：　裂的双重功能，是联系细胞周期和细胞凋亡的重要　［１］赵洪文．肺成纤维细胞在肺纤维化中的作用［Ｊ］．国外医学：呼　因子。人类Ｓｕｒｖｉｖｉｎ基因位于染色体１７ｑ２５，长度在　吸系统分册，１９９６，１６（３）：１１６—１１７．　７５—１３０　ｋｂ，含４个外显子及３个内含子　Ｊ。Ｓｕｒ－　［２］ｕ　Ｙ，ｗｕ　ＹＬ．Ａｎ　ｏｖｅｒ　ｆｏｕｒ　ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ　ｓｔｏｒｙ　ｂｅｈｉｎｄ　ｑｉｎｇｈａｏｓｕ（ａｒｔｅ－　ｍｉｓｉｎｉｎ）－丑ｆａｎｔａｓｔｉｃ　ａｎｔｉｍａｌａｒｉａｌ　ｄｒｕｇ　ｆｒｏｍ　ａ　ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｈｅｒｂ　ｖｉｖｉｎ可通过多种调控机制发挥其强大抗凋亡及促　【Ｊ］．Ｃｕｒｒ　Ｍｅｄ　Ｃｈｅｍ，２００３，ｌＯ（２１）：２１９７－２２２３．　进细胞增殖作用　Ｊ。Ｓｕｒｖｉｖｉｎ抗凋亡机制之一是直　［３］Ｘｕ　ＨＳ，Ｌｉｕ　Ｐ，Ｙｅ　ＹＪ，ｅｌ　ａ１．Ａｎｔｉｍａｌａｒｉａｌ　ａｇｅｎｔ　ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　接抑制Ｃａｓｐａｓｅ家族成员蛋白水解酶级联反应过程　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｎｆ－ｌａｐｈａ　ａｎｄ　ｉｌ－１　ｂｅｔａ　ｖｉａ　ｉｎｈｉｂｉｉｔｏｎ　ｏｆ　ｋ印ｐａｂ　ｐａｔｈ・　中位于下游的Ｃａｓｐａｓｅ－３、Ｃａｓｐａｓｅ－７活性。李哲等　ｗａｙ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　ｉｆｂｒｏｂｌａｓｔ・ｌｉｋｅ　ｓｙｎｏｉｖｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．　研究显示，Ａ５４９细胞经青蒿琥酯处理后Ｓｕｒｖｉｖｉｎ　Ａｎｎ　Ｒｈｅｕｍ　Ｄｉｓ，２００７，６６（２）：４５２．　［４］Ｃｈａｎｔａｌａｔ　Ｉ　，Ｓｋｏｕｆｉａｓ　ＤＡ，Ｋｈｍａｎ　ｊＰ，ｅｔ　ａ１．Ｃｒｙｓｔａｌ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｈｕ—　ｍＲＮＡ和蛋白表达坶降低，即可间接增强肿瘤细胞　ｍａｌｌ　ｓｕｒｖｉｖｉｎｇ　ｒｅｖｅａｌｓ　ａ　ｂｏｗ　ｆｉｅ—ｓｈ８ｐｅｄ　ｄｉｍｍｅｒ　ｗｉｔｈ　ｔｗｏ　ｕｎｕｓｕａｌ　ａｌ—　内Ｃａｓｐａｓｅ蛋白酶家族成员的活性（尤其是Ｃａｓｐａｓｅ一　ｐｈａ—ｈｅｌｉｃａｌ　ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｃｅｌｌ，２０００，６（１）：１８３－１８９．　３），使肿瘤细胞更容易发生凋亡。Ｓｕｒｖｉｖｉｎ的组织　［５］蒲小勇，陈一戎，王志平，等．膀胱癌患者尿脱落细胞中Ｓｕｒｖｉｖｉｎ　分布具有明显的细胞选择性，在成人分化组织多不　基因的检测［Ｊ］．中国临床康复，２００３，７（８）：１２７６－１２７７．　表达，但在多种肿瘤组织中表达　ｊ。本研究显示，　［６］李哲，袁守军，聂丽平，等．青蒿琥酯诱导肿瘤细胞凋亡与抑制存　观察１—４组Ｓｕｒｖｉｖｉｎ　ｍＲＮＡ表达均显著低于对照　活蛋白表达有关［Ｊ］．中国临床药理学与治疗学。２００４．９（６）：　６０７　Ｉ１．　组，且有逐渐减弱的趋势。提示青蒿琥酯能抑制　［７］Ａｍｂｒｏｓｉｎｉ　Ｇ，Ａｄｉｄａ　ｃ，Ａｌｔｉｅｒｔ　Ｄ．Ａ　ｎｏｖｅｌ　ａｎｔｉ—ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｇｅｎｅ，ｓｕｒｖｉ—　Ｓｕｒｖｉｖｉｎ　ｍＲＮＡ在ＨＦＬ．Ｉ细胞中的表达，且呈剂量依　ｖｉｎｇ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｉｎ　ｅａｎｃ，ｅｒ　ａｎｄ　ｌｙｍｐｈｏｍａ［Ｊ］．Ｎａｔ　Ｍｅｄ．１９９７，３（８）：　赖性，此可能为其诱导细胞凋亡、对抗肺纤维化的机　９１７－９２１．　制之一。　（收稿日期：２００９一ｌ１－０１）　综上所述，青蒿琥酯具有抗肺纤维化作用，可能　・经验交流・　硫酸镁联合土豆泥外敷治疗预防接种后　局部硬结、肿胀７８例　张卫东。姜晓省　（滨城区滨北社区卫生服务中心，山东滨州２５６６５２）　２００６年１Ｏ月～２００９年ｌ０月，我们采用硫酸镁联合土　例，总有效率为１００％。　豆泥外敷治疗预防接种后出现局部硬结、肿胀患者７８例，疗　讨论：疫苗对人体属于异物且具有一定毒性，其酸碱度、　效显著。现报告如下。　渗透压及所含的防腐剂等均可对机体产生刺激而引起不同　临床资料：本组７８例预防接种后出现局部硬结、肿胀患　程度的炎性反应，多表现为局部肿胀、硬结、疼痛等无菌性炎　者，男３８例，女４０例；年龄３个月一６岁，平均２．５岁。注射　性反应，重者出现红肿、热、痛等化脓性炎性反应。本组７８　疫苗至出现硬结、肿胀时间为１～２　ｄ，部位均为上臂三角肌，　例治疗后有效率为１００％，可能机制：①土豆含有胆碱烷衍　直径为１．５—３．５　Ｃｎｌ；预防接种药物为百白破三联疫苗６９　生物茄碱，可促进血液循环，并有活血化瘀、止痛作用；含有　例，乙肝疫苗４例，麻疹疫苗２例。狂犬疫苗２例，流腮疫苗１　大量淀粉．具有高渗透压作用。②硫酸镁外敷可使神经肌肉　例。均予硫酸镁联合土豆泥外敷：将新鲜去皮土豆块及硫酸　传导发生阻断而使周围血管平滑肌松弛，促进血管扩张及炎　镁粉适量捣碎至糊状，取适量外敷至硬结、肿胀部位（厚度２　性外渗液吸收。　～３　ｍｍ），其外贴敷一塑料膜，３—６　ｈ后取下拭净皮肤。间隔　总之，硫酸镁联合土豆泥外敷对消除预防接种所致局部　５—６　ｈ重复１次，每日２次，连用３　ｄ。结果治愈（肿胀、硬结　硬结、肿胀有协同作用，且原材料来源广泛、价格低廉，方法　ｒ厶－ｔ＂　￣ｐ消失）６５例，显效（局部硬结、肿胀直径缩小≥８０％）１３　简便。　（收稿日期：２００９－１１－０３）　３５