石蜡包埋组织DNA快速提取法应用于分子病理检测价值评价

石蜡包埋组织DNA快速提取法应用于分子病理检测价值评价

摘要 目的 探讨分析石蜡包埋组织DNA快速提取法应用于分子病理检测的价值。方法 63份经石蜡包埋的组织， 随机分为实验组（32份）和对照组（31份）。实验组采用DNA快速提取法， 对照组采用试剂盒DNA提取法。分别对两组提取出的DNA进行对比分析。结果 实验组在小组织标本中提取DNA的浓度及纯度均低于对照组；实验组在大组织标本中提取DNA的浓度及纯度与对照组比较无显著差异。对照组中提取的DNA扩增后可达到500 bp以上， 实验组扩增产物则在400 bp以上。结论 分子病理检测中应用石蜡包埋组织DNA快速提取法， 可在保证质量的情况下， 大大缩短检测时间， 提高检测安全性， 临床上值得应用。

关键词 分子病理检测；石蜡包埋组织；DNA快速提取法；价值

近年来， 随着分子病理学的不断发展， 人们对肿瘤疾病的认识与研究不再局限于患者的器官、细胞， 而是延伸到了蛋白质、DNA等水平。分子病理学使病理诊断变得更加准确、客观， 而且在肿瘤的治疗及预后等方面也有着重要价值， 其中免疫检测、基因检测、流式细胞术等技术目前应用较为广范， 全面推动着医疗技术的发展[1]。提取DNA是分子病理检测的重要内容， 本研究通过对石蜡包埋组织进行DNA提取、分析， 旨在评价石蜡包埋组织DNA快速提取法应用于分子病理检测中的价值， 现报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料 选取2016年3～12月经石蜡包埋的组织63份， 将其随机分为实验组（32份）和对照组（31份）。所有标本均使用中性甲醛固定， 其中淋巴结、肿瘤、宫颈组织各21份。

1. 2 方法

1. 2. 1 实验组 采用DNA快速提取法， 对每例标本制作4张蜡片， 首先将蜡片置入离心管中并加入裂解液， 采用金属浴方法将石蜡溶解， 并将温度控制在95℃， 持续时间在10 min左右， 然后以14000 r/min对其进行离心操作， 离心过程持续5 min， 最后将蜡层下出现的清凉溶液置于-20℃环境下保存。

1. 2. 2 對照组 采用试剂盒DNA提取法， 与实验组相同方法制作4张蜡片， 将其置入离心管中并加入二甲苯1 ml， 14000 r/min对其进行离心操作， 3 min后抛除上层清亮液体， 重复操作1次；1 ml无水乙醇加入离心管中， 混匀后重复上述离心操作， 并再次进行乙醇去苯， 完成后开盖蒸发乙醇；将Buffer ALT及蛋白酶K混入离心管， 混匀后进行消化、孵育；使用离心柱9000 r/min对其进行离心， 2 min后将废液丢弃；加500 μl缓冲液AW1， 9000 r/min对其进行离心， 2 min后将废液丢弃；加500 μl缓冲液AW2， 9000 r/min对其进行离心， 2 min后将废液丢弃；加入ATE静置2 min， 再离心处理；处理完毕后管内剩余

液体置于-20℃环境下保存[2]。

1. 3 DNA产物评价

1. 3. 1 DNA浓度及纯度 利用紫外分光光度计评价提取物DNA浓度及其纯度。

1. 3. 2 PCR可行性 对提取出的DNA进行PCR扩增（实验组使用DNA原液， 对照组DNA浓度65 ng/μl）；反应温度：预变性95℃， 变性95℃， 退火60℃；反应时间：预变性7 min， 变性45 s， 退火45 s；经循环35次后对其进行电泳处理， 并经BIO-RAD系统对两组DNA质量进行分析。

2 结果

2. 1 提取物DNA浓度及纯度评价 实验组在小组织标本中提取DNA的浓度及纯度均低于对照组；实验组在大组织标本中提取DNA的浓度及纯度与对照组比较无显著差异。

2. 2 PCR可行性对比分析 对照组中提取的DNA扩增后可达到500 bP以上，实验组中不同组织提取的DNA扩增产物大小不同，其中宫颈组织可达300 bp，其余组织则在400 bp以上。见图1。

3 讨论

随着科学技术的持续发展及医疗水平的不断进步， 石蜡包埋组织因其具有便于运输储存、交叉污染少等优点， 被广泛应用于临床病理工作中[3-6]。在进行分子病理检测时提取DNA的方法中， 酚-氯仿法应用较早， 但因其操作过程复杂， 且对人体有损害等缺点， 目前已逐渐被离心柱法所代替[3]。离心柱法对操作者要求相对较低， 且得到的DNA质量较高， 但检测过程中因为需要对组织进行消化， 操作步骤较多， 所以检测所需时间较长， 且在操作过程中换管频繁， 增加了标本污染的可能性[4]。如何能够在保证DNA提取质量的情况下缩短操作时间， 成为了研究的热点问题之一。

石蜡包埋组织DNA快速提取法无需应用有毒试剂， 如二甲苯、氯仿等， 能够更好地保障检测人员的身体健康及生命安全[7-11]；采用离心管， 不但较通常所应用的PCR管方便许多， 而且可有效降低交叉污染的可能性， 从而提高DNA提取质量；将加热温度设置为95℃， 可有效避免过高的温度所造成的试管爆炸， 大大提高操作安全性[12-14]。石蜡包埋组织在处理过程当中， 会经过甲醛固定以及脱水等步骤， 在进行分子病理检测之前已放置了一定的時间， 所以DNA断裂情况较为常见。有研究结果表明， DNA快速提取法所得到的DNA完全可用于PCR扩增[5]。为进一步探讨分析石蜡包埋组织DNA快速提取法应用于分子病理检测价值， 本实验对石蜡包埋组织进行了分组实验研究。

本实验研究结果显示， 实验组在小组织标本中提取DNA的浓度及纯度均

低于对照组；实验组在大组织标本中提取DNA的浓度及纯度与对照组比较无显著差异。对照组中提取的DNA扩增后可达到500 bp以上， 实验组扩增产物则在400 bp以上。综上所述， 使用石蜡包埋组织DNA快速提取法所提取的DNA， 虽然在小组织中DNA浓度及纯度相对较低， 但完全可满足分子病理检测所需的条件， 而且该方法拥有方便、快速、经济等优点， 具有显著的优势， 可在临床上推荐与应用。

参考文献

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