1株白木香内生真菌中抗肿瘤活性成分的分离纯化和结构鉴定

微生物学杂志　２０１０年１１月第３０卷第６期ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹ　Ｎｏｖ．２０１０　Ｖｏ１．３０　Ｎｏ．６　１株白木香内生真菌中抗肿瘤　活性成分的分离纯化和结构鉴定　李冬利　，陈玉婵　，李义勇‘　，陶美华　，章卫民ｈ　（１．广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室，广东广州５１００７０　２．三峡大学化学与生命科学学院湖北省天然产物研究与利用重点实验室，湖北宜昌４４３００２）　摘　要　采用活性追踪的方法对白木香内生真菌螺旋木霉Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｓｐｉｒａｌｅ　Ａ１７的抗肿瘤活性代谢产物进　行了分离纯化和结构鉴定。通过凝胶柱层析和反相硅胶柱层析。从其发酵液的活性组分中分离到２个无色针　晶化合物，质谱和核磁共振的鉴定结果表明化合物１是一个八氢萘衍生物，命名为木霉酸（Ｔｒｉｅｈｏｄｅｒｍｉｅ　ａｃｉｄ），　化合物２是酪醇（Ｔｙｒｏｓｏ１）。活性实验显示化合物ｌ对ＳＦ・２６８、ＭＣＦ－７和ＮＣＩ—Ｈ４６０　３种肿瘤细胞株都具有显著　的增殖抑制活性，而化合物２对这３种肿瘤细胞株只有微弱的增殖抑制活性。　关键词　白木香；内生真茵；螺旋木霉；抗肿瘤；活性追踪　中图分类号Ｒ７３—３；Ｒ２８４　文献标识码Ａ　文章编号１００５—７０２１（２０１０）０６—０００１—０５　Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｎｔｉ．Ｔｕｍｏｒ　Ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｆｒｏｍ　ａｎ　Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　Ｆｕｎｇｕｓ　ｏｆ　Ｂａｉｍｕｘｉａｎｇ（Ａｑｕｉｌａｒｉａ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ）　ＬＩ　Ｄｏｎｇ—ｌｉ　，ＣＨＥＮ　Ｙｕ—ｃｈａｎ　，ＬＩ　Ｙｉ．ｙｏｎｇ　・　，ＴＡＯ　Ｍｅｉ—ｈｕａ　，ＺＨＡＮＧ　Ｗｅｉ．ｍｉｎ　（１．Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖ．Ｏｐｅｎ　Ｌａｂ．ｏｆＡｐｐ１．Ｍｉｃｒｏｂｉｏ１．，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖ．Ｋｅｙ　Ｌａｂ．ｏｆＭｉｃｒｏｂ．Ｃｕｌｔ．Ｃｏｌｌｅｃｔ．ａｎｄ　Ａｐｐ１．，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｉｎｓｔ．ｏｆ　Ｍｉｅｒｏｂｉｏ１．，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５　１００７０；　２．Ｈｕｂｅｉ　Ｋｅｙ　Ｌａｂ．ｏｆＮａｔ．Ｐｒｏｄ．Ｒｅｓ．＆Ｄｅｖｅ１．，Ｃｏｌ１．ｏｆＣｈｅｍ．ａｎｄ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ．，Ｃｈｉｎａ　Ｔｈｒｅｅ　Ｇｏｒｇｅｓ　Ｕｎｉ．，Ｙｉｃｈａｎｇ　４４３００２）　Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ａｄｏｐｔｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｔｒａｉｌｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ，ａｎｔｉ—ｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｅ　ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｕｓ　Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｓｐｉｒａｌｅ　Ａ１７　ｉｎ　ｏｆｆｉｅｉｎａｌ　ｂａｉｍｕｘｉａｎｇ（Ａｑｕｉｌａｒｉａ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ）ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ．Ｃｏｌｕｍｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｏｎ　Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ－２０　ａｎｄ　Ｃ１８　ｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ，ａｎｄ　ｔｗｏ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｃｏｌｏｒｌｅｓｓ　ｎｅｅｄｌｅ　ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚｅｄ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｅ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔ　ｏｆ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｂｒｏｔｈ．Ｄａｔａ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ　ａｎｄ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｍａｇｎｅｔｉｃ　ｒｅｓｏｎａｎｅｅ，　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　１　ｗａｓ　ａｎ　ｏｃｔｏ—ｈｙｄｒｏｇｅｎ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ　ｏｆ　ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅ　ａｎｄ　ｎａｍｅｄ　ａｓ　ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍｉｅ　ａｃｉｄ，ａｎｄ　ｅｏｍ—　ｐｏｕｎｄ　２　ｗａｓ　ｔｙｒｏｓｏ１．Ｃｏｍｐｏｕｎｄ　１　ｓｈｏｗｅｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ａｇａｉｎｓｔ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ＳＦ一２６８，ＭＣＦ－７，ａｎｄ　ＮＣＩ—Ｈ４６０，ｗｈｉｌｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　２　ｄｉｓｐｌａｙｅｄ　ｏｎｌｙ　ｗｅａｋ　ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ａｇａｉｎｓｔ　ｔｈｅｓｅ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ．　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　Ａｑｕｉｌａｒｉａ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ；ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ；Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｓｐｉｒａｌｅ；ａｎｔｉｔｕｍｏｒ；ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｔｒａｉｌｉｎｇ　植物内生真菌能产生结构丰富多样的次级代　价值的次生代谢产物，并且容易从中发现新颖结　谢产物，这些代谢产物的结构有些与宿主的某些　构的化合物，已成为发现新天然活性物质的重要　代谢产物相同或相似，有些是其他具有潜在药用　资源。近年来在植物内生真菌中发现的活性产物　基金项目：国家自然科学基金（２０９０２０１４）；广东省自然科学基金（９４５１００７００２００３０７４）；　广州市科技计划项目（０９Ｂ３４０６１４４６）；广东省科学院优秀青年科技人才基金　作者简介：李冬利女，助理研究员，博士。研究方向为微生物活性代谢产物。　Ｔｅｌ：Ｏ２Ｏ－８７６８８６ｌ２。Ｅ・ｍａｉｌ：ｙｉｅｈｅｎ８０２００３＠ｙａｈｏｏ．ｅｏｍ．ｅｎ　｝通讯作者。Ｔｅｌ：Ｏ２０—３７６５６３２１，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｍｚｈａｎｇ５８＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｏ　收稿日期：２０１０－０９・１９；修回日期：２０１０－１１－２２　２　微生物学杂志　３０卷　的结构类型主要有萜类、生物碱类、醌类、黄酮类、　异香豆素类、内酯类、木脂素类、酚类、多肽类、甾　体化合物等…，报道的生物活性有抗肿瘤、抗菌、　抗氧化、抗疟、抗病毒、杀虫、酶抑制剂、调节植物　生长等　，在医药、农业和工业等各个领域都展　现出良好的应用前景。利用植物内生真菌生产活　ＭＳ／ＭＳ，ＭＤＳ　ＳＣＩＥＸ公司；ＰＺ１０００Ｂ旋转式大容　量普通摇床，武汉瑞华仪器设备有限公司；ＲＥ．　２０００型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；ＳＨＺ．Ｄ　（Ⅲ）型循环水式真空泵，巩义市英峪予华仪器　厂；ＤＬＳＢ一５／１０低温冷却液循环泵，郑州长城科工　贸有限公司；Ｈａｎｇｐｉｎｇ　ＦＡ２００４电子分析天平，上　海天平仪器厂；超净工作台，上海恒益科技有限公　性物质的一个显著优势在于资源的可持续利用，　对自然资源破坏极少，能够解决自然资源不足的　问题，这一点对于某些珍贵濒危的药用植物来说　显得更加重要。白木香（Ａｑｕｉｌａｒｉａ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌｏｕｒ．）　Ｇｉｌｇ．）别名土沉香、女儿香、莞香，为瑞香科　（Ｔｈｙｍｅｌａｅａｃｅａｅ）沉香属（Ａｑｕｉｌａｒｉａ）植物，是一种　热带及亚热带常绿乔木，为我国华南地区特有的　珍贵药用植物，也是我国生产中药沉香的唯一的　资源植物。《广东珍稀濒危植物》报告　】，广东省　的野生大型白木香由于砍伐过度，已经十分稀有，　濒临绝种。因此，对白木香内生真菌及其活性代　谢产物的研究，具有重要的生态学意义和经济价　值。王磊等　从采自广东省不同组织年龄的白　木香根、茎、叶以及天然结香部位分离获得了５Ｏ　株内生真菌，对其代谢产物进行了抗肿瘤抗菌活　性筛选，得到了几株具有较好生物活性的目标菌　株　。螺旋木霉Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｓｐｉｒａｌｅ　Ａ１７是其中１　株具有较好抗肿瘤和抗菌活性的菌株。本研究采　用活性追踪的方法对其抗肿瘤活性代谢产物进行　分离纯化和结构鉴定，为寻找抗肿瘤药物或药物　先导化合物提供物质基础，为开发利用白木香内　生真菌资源提供理论依据。　１　材料与方法　１．１　材料　１．１．１　菌种来源　白木香内生真菌Ａ１７为本实　验室从广东省信宜市南屯野生白木香（约３０　ａ树　龄）的根部分离得到　，保存于广东省微生物研　究所。经形态学鉴定和分子鉴定，该菌株为螺旋　木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｓｐｉｒａｌｅ）。　１．１．２　细胞株来源　神经胶质瘤细胞ＳＦ．２６８、　乳腺癌细胞ＭＣＦ．７和大细胞肺癌细胞ＮＣＩ．　Ｈ４６０，均由江苏省药用植物生物技术重点实验室　蒋继宏教授提供。　１．Ｉ．３仪器和试剂①主要仪器：核磁共振波谱　仪５００ＭＨｚ，Ｂｒｕｋｅｒ公司；质谱仪ＡＰＩ　２０００　ＬＣ／　司；②主要试剂：柱层析硅胶（１００～２００目，２００—　３００目）、ＧＦ：　高效薄层硅胶板，青岛海洋化工厂；　Ｃｌ８反相硅胶（４Ｏ～７５　ｔｘｍ），ｒ＇ｕｊｉ　Ｓｉｌｙｓｉａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｌｔｄ．；凝胶Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ－２０（１８～ｌ１０　ｍ），Ａｍｅｒ．　ｓｈａｍ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；石油醚（分析纯），天津市瑞金　特化学品有限公司；乙酸乙酯（分析纯），天津富　宇精细化工有限公司；三氯甲烷（分析纯），广州　化学试剂厂；甲醇（分析纯）天津市瑞金特化学品　有限公司。　１．２方法　１．２．１　乙酸乙酯粗提物的制备从保藏菌株的　试管斜面挑取少许菌丝分别接种到马铃薯葡萄糖　琼脂培养基（ＰＤＡ）平板上活化３　ｄ，然后将活化　的菌丝接种于装有２５０　ｍＬ马铃薯葡萄糖液体培　养基的５００　ｍＬ的三角瓶中，２８℃，１２０　ｒ／ｍｉｎ培　养３　ｄ，作为种子液。大量发酵同样采用马铃薯葡　萄糖液体培养基，每只５００　ｍＬ摇瓶装２５０　ｍＬ的　培养基，共培养１２０瓶。２８℃，１２０　ｒ／ｍｉｎ培养７　ｄ，发酵结束后过滤得发酵液，用乙酸乙酯萃取４　次，合并乙酸乙酯相于４０℃下减压浓缩至膏状，　得乙酸乙酯相粗提物（约１．９　ｇ）。　１．２．２粗提物的初步分离　乙酸乙酯相粗提物　通过正相硅胶柱进行初步分离。干法上样，以石　油醚一乙酸乙酯和氯仿－甲醇洗脱系统进行梯度洗　脱，分段收集。用薄层层析（ＴＬＣ）检测（显色剂为　茴香醛一浓硫酸试剂），合并相似组分，浓缩干燥得　ｌ２个粗组分（Ｆ１一Ｆｌ２）。　１．２．３粗组分的抗肿瘤活性测定　供试肿瘤细　胞株为ＳＦ．２６８，参考李浩华等　。　采用ＭＴＴ法测定　各粗组分的抗肿瘤活性以确定活性组分。　１．２．４活性组分中化合物的分离纯化采用凝　胶柱层析和反相硅胶柱层析对活性组分进行化学　成分的分离纯化。　１．２．５　纯化合物的结构鉴定　通过核磁共振　（ＮＭＲ）和质谱（ＭＳ）技术对所得纯化合物的结构　６期　李冬利等：ｌ株白木香内生真菌中抗肿瘤活性成分的分离纯化和结构鉴定　进行鉴定。　１．２．６纯化合物的抗肿瘤活性测定法测定所得纯化合物的抗肿瘤活性。　供试肿瘤　细胞株为ＳＦ－２６８、ＭＣＦ－７和ＮＣＩ—Ｈ４６０，采用ＭＴＴ　次甲基相连。高场区还有一些饱和氢信号。”ｃ—　ＮＭＲ（表２）和无畸变极化转移增强（ＤＥＰＴ）图谱　上可以看到１９个碳信号，包括２个季碳，１２个次　甲基，１个亚甲基和４个甲基。综合质谱、核磁数　２　结　果　２．１粗组分的抗肿瘤活性　据确定该化合物分子式为ｃ，。Ｈ　。Ｏ，。通过同核化　学位移相关谱、异核单量子相干谱和异核远程化　学位移相关谱（　Ｈ．Ｈ　ＣＯＳＹ、ＨＳＱＣ和ＨＭＢＣ）等　二维核磁共振（２Ｄ．ＮＭＲ）数据，鉴定１的结构如　在１００　Ｉ￣ｇ／ｍＬ的作用浓度时，各粗组分对　ＳＦ．２６８细胞增殖的抑制率见表１。组分Ｆ２表现　出最强的抑制活性，ＴＬＣ检测显示其含有２个主　要化学成分。因此选择Ｆ２组分进行进一步的分　离纯化。　表１粗组分对ＳＦ－２６８细胞增殖的抑制率【　±Ｓ．ｎ＝３）　Ｔａｂｌｅ　１　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ｒｏｕｇｈ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ＳＦ－２６８（×±Ｓ．ｎ＝３）　编号　抑制率／％　编号　抑制率／％　Ｆｌ　２７．６±６．９　Ｆ７　２５．Ｏ±６．６　Ｆ２　８３．７±８．６　Ｆ８　６６．０±１．９　Ｆ３　２８．９±３．９　Ｆ９　５７．５±９．０　Ｆ４　４６．４±６．６　Ｅｌ０　３０．９±２．２　Ｆ５　３９．７±３．３　Ｆｌｌ　３４．８±３．６　Ｆ６　３６．９±５．１　Ｆｌ２　３Ｏ．７±２．９　注：阳性对照为顺铂水溶液，作用浓度为ｌ０“ｇ／ｍＬ，抑制翠为　（９３．０±２．０）％　２．２活性物质的分离纯化　活性组分Ｆ２（９０．４　ｍｇ）先通过凝胶柱层析　（Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ一２０，甲醇洗脱）分为Ｆ２—１（４６．２　ｍｇ）　和Ｆ２－２（１０．３　ｍｇ）。Ｆ２－１和Ｆ２－２再分别通过ｃ。。　反相硅胶柱层析（ＯＤＳ－Ａ，甲醇洗脱）得到纯化合　物１（无色针晶，２２．６　ｍｇ）和纯化合物２（无色针　晶，９．０　ｍｇ）。　２．３结构鉴定　２．３．１　化合物１的结构鉴定　化合物１进行电　喷雾电离质谱（ＥＳＩ．ＭＳ）分析，结果显示：阴离子　模式出现ｍ／ｚ：３０３［Ｍ－Ｈ］一、６０７［２Ｍ—Ｈ］一２个峰，　阳离子模式出现ｍ／ｚ：３０５［Ｍ＋Ｈ］　、３２７［Ｍ＋　Ｎａ］　、６０９［２Ｍ＋Ｈ］　、６３１［２Ｍ＋Ｎａ］　几个主要　峰，因此初步推断化合物的分子量为３０４。化合　物１的　Ｈ—ＮＭＲ图谱上（表２）低场区显示有５个　不饱和氢信号，根据偶合常数（　）可以判断其中　有３个为互相连接的反式双键氢（Ｊ＝１４．９、１１．２　Ｈｚ），另２个为一对顺式双键氢（Ｊ＝９．５　Ｈｚ）。　高场区显示４个甲基信号，其中１个单峰表示与　不饱和季碳相连，另外３个均为双重峰，均与饱和　图１所示，该化合物属于八氢萘衍生物。其相对　构型通过核Ｏｖｅｒｈａｕｓｅｒ效应谱（ＮＯＥＳＹ）确定，Ｈ．　１、Ｈ－３、Ｈ一５、Ｈ一８、Ｈ－９等有相关峰，显示它们处于　分子的同一侧，Ｈ一２、Ｈ－４ａ、Ｈ一１０有相关峰，显示它　们同处于分子的另一侧。由文献［７］可知，该化　合物为已知化合物，化学名为（２Ｅ，４Ｅ）－５．（（１Ｓ，　２Ｓ，４ａＲ，６Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，８ａＳ）－７－ｈｙｄｒｏｘｙ－２，６，８－ｔｒｉｍｅｔｈ—　ｙｌ・１，２，４ａ，５，６，７，８，８ａ—ｏｅｔａｈｙｄｒｏｎａｐｈｔｈａｌｅｎ一１一ｙ１）一　２－ｍｅｔｈｙｌｐｅｎｔａ－２，４一ｄｉｅｎｏｉｃ　ａｃｉｄ。此前，只有Ｙａｍａ—　ｄａ报道从１株未定种的木霉属真菌中分离得到　过该化合物，本研究的核磁数据与其一致，本文将　该化合物命名为木霉酸（Ｔｒｉｅｈｏｄｅｒｍｉｅ　ａｃｉｄ）。　表２化合物１的氢谱碳谱核磁数据　（溶剂为氘代甲醇。单位为ｘ１０　）　Ｔａｂｌｅ　２’Ｈ—ａｎｄ　Ｃ－ＮＭＲ　ｓｐｅｃｔｒａｌ　ｄａｔａ　ｏｆ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｌ（ＣＤ３ＯＤ．×ｉ０一　）　４　微生物学杂志　２．４纯化合物的抗肿瘤活性　Ｈ　在２０｝ｚｇ／ｍＬ的作用浓度时，２个纯化合物对　ＳＦ．２６８、ＭＣＦ一７和ＮＣＩ．Ｈ４６０肿瘤细胞的增殖抑制　活性表现出明显差异（表３）。化合物１对３种细　Ｈ　ｌ　１Ｈ－１Ｈ　ＣＯＳＹ　ＨＭＢＣ　图１化合物１的结构式和主要的　Ｈ．　Ｈ　ＣＯＳＹ（粗线）、ＨＭＢＣ（箭头）相关关系　Ｆｉｇ．１　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｋｅｙ　Ｈ．　Ｈ　ＣＯＳＹ　ｆ　ｂｏｌｄ　ｌｉｎｅ）　ａｎｄ　ＨＭＢＣ（ａｒｒｏｗ）ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　１　２．３．２　化合物２的结构鉴定　化合物２的　Ｈ－　ＮＭＲ谱上低场区显示２个双峰（８　：７．０５和　６．７４），每个峰代表２个氢，从它们之间的偶合常　数８．１　Ｈｚ可以判断是位于苯环邻位的两组氢，由　此可以判断一个对位取代苯环的存在。另外高场　区显示有２个三重峰信号（８　：３．６９和２．７１），每　个峰代表２个氢，偶合常数都为７．１　Ｈｚ，可见为２　个互相连接的亚甲基，并且其中一个亚甲基与含　氧基团相连，另一个亚甲基与不饱和基团相连。　”Ｃ．ＮＭＲ和ＤＥＰＴ图谱上可以看到６个碳信号，　６　：１１６．０～１５６．６之间的４个信号应该是一个苯　环，包括２个季碳信号，其中８　：１５６．６处的季碳　连接含氧基团，另包括２个次甲基信号，分别代表　苯环上未被取代的２个次甲基；此外，”Ｃ—ＮＭＲ图　谱上另２个为亚甲基信号（６　：６４．３和３９．５），其　中８　：６４．３处亚甲基应与含氧基团相连。因此，　结合核磁共振氢谱和碳谱数据，确定该化合物为　酪醇（Ｔｙｒｏｓｏ１），谱图数据与文献［８］报道一致。　０Ｈ　２　图２化合物２的结构式　Ｆｉｇ．２　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　２　胞株都表现出较强的抗肿瘤活性，抑制率均在　５０％以上；而化合物２对３种细胞株的抑制作用　都较弱。　表３化合物１和２对３种细胞株增殖的抑制率（％）　（ｘ±Ｓ．ｎ＝３）　Ｔａｂｌｅ　３　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　Ｉ　ａｎｄ　２　ｏｎ　ｔｈｒｅｅ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ（％）｛　±Ｓ，ｎ＝３）　注：阳性对照为顺铂水溶液，作用浓度为１０　ｓ／ｍＬ　３　讨　论　本研究通过活性追踪的方法从白木香内生真　菌螺旋木霉Ａ１７发酵液的乙酸乙酯相粗提物中　得到了具有抗肿瘤活性的八氢萘衍生物一木霉　酸。该化合物尽管为已知化合物，但迄今只有　Ｙａｍａｄａ　曾经分离得到。本研究首次从螺旋木　霉中得到该化合物，并首次发现其对ＳＦ－２６８、　ＭＣＦ－７和ＮＣＩ－Ｈ４６０　３种肿瘤细胞株具有明显的　增殖抑制活性。　细胞黏附分子（Ｃｅｌｌ　ａｄｈｅｓｉｏｎ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，　ＣＡＭｓ）是由细胞产生的介导细胞与细胞间或细胞　与细胞外基质之间相互作用的一类膜表面糖蛋白　分子。它参与细胞的信号传导与活化，细胞的伸　展和移动，细胞的生长及分化，炎症、血栓形成，肿　瘤转移及创伤愈合等一系列重要的生理和病理过　程。细胞间黏附分子１（ＩＣＡＭ一１）属于ＣＡＭｓ中的　免疫球蛋白超家族成员之一，是一种细胞表面的　跨膜糖蛋白。已证实ＩＣＡＭ－１与免疫应答、炎症　反应、淋巴细胞归巢和再循环、肿瘤以及动脉粥样　硬化等相关。Ｙａｍａｄａ　发现，木霉酸及其通过化　学反应生成的衍生物能够抑制ＩＣＡＭ．１的表达，　其中有一个衍生物具有很好的治疗炎症性疾病和　类风湿性关节炎的作用，并且对Ａ５４９、ＰＣ－３、Ａｓ—　ＰＣ．１和ＨＴ１０８０等肿瘤细胞的增殖抑制活性远远　好于对Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ、ＮＨＤＦ和ＢＡＥ等正常细胞的　６期　李冬利等：ｌ株白木香内生真菌中抗肿瘤活性成分的分离纯化和结构鉴定　活性。因此以木霉酸及其衍生物作为ＩＣＡＭ－１表　达抑制剂、炎症性疾病治疗剂、类风湿性关节炎治　参考文献：　［Ｉ］Ｔａｎ　ＲＸ，Ｚｏｕ　ＷＸ．Ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ：ａ　ｒｉｃｈ　ｓｏｕｒｃｅ　ｏｆ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｍｅ．　疗剂、免疫抑制剂和细胞增殖抑制剂申请了专利。　本研究发现木霉酸对ＳＦ．２６８、ＭＣＦ一７和ＮＣＩ—Ｈ４６０　３种肿瘤细胞株也具有显著的增殖抑制活性，说　ｔａｂｏｌｉｔｅｓ［Ｊ］．Ｎａｔ　Ｐｒｏｄ　Ｒｅｐ，２００１，１８（４）：４４８－４５９．　［２］　Ｇｕｎａｔｉｌａｋａ　ＡＡＬ．Ｎａｔｕｒａｌ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｆｒｏｍ　ｐｌａｎｔ．ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｍｉｃｒｏ－　ｏｒｇａｎｉｓｍｓ：ｄｉｓｔｉｂｕｔｒｉｏｎ，ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ，ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ，ａｎｄ　ｉｍ—　明它可能具有较广谱的抗肿瘤活性，其抗肿瘤活　ｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅｉｒ　ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ［Ｊ］．Ｊ　Ｎａｔ　Ｐｒｏｄ。２００６，６９（３）：　５０９－５２６．　性是否可能与其对ＩＣＡＭ．１的表达抑制活性相关　值得进一步探讨。另一方面，本研究从内生真菌　［３］彭少麟，陈万成．广东珍稀濒危植物［Ｍ］．北京：科学出版　社。２００３：Ｉ１２．　螺旋木霉中发现了木霉酸，为木霉酸的来源提供　了一种新资源，为利用木霉酸生产药用衍生物提　供了新的资源基础。　从ＳｃｉＦｉｎｄｅｒ　Ｓｃｈｏｌａｒ数据库发现，与木霉酸结　［４］王磊，章卫民，潘清灵，等．白木香内生真菌的分离及分子鉴　定［Ｊ］．菌物研究，２００９，７（１）：３７－４２．　［５］　李冬利，张庆波，陈玉婵，等．白木香内生真菌抗肿瘤抗菌活　性的筛选研究［Ｊ］．微生物学杂志，２００９，２９（５）：２６－２９．　［６］　李浩华，陈玉婵。陶美华。等．毛蜂窝菌提取物体外抗肿瘤活　性的研究［Ｊ】．食用菌学报，２００９，１６（３）：８－ＩＩ．　［７］　Ｙａｍａｄａ　Ｎ．Ｏｃｔａｈｙｄｒｏｎａｐｈｔｌａｅｎｅ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ［Ｐ］．　ＰＣＴ　ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，２００５，ＷＯ　２００５０７０８５６　Ａ１．　构最类似的化合物为ｃｏｐｒｏｐｈｉｌｉｎ，区别只在于侧　链上甲基位置的不同。ｃｏｐｒｏｐｈｉｌｉｎ具有抗鸡球虫　（Ｅｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａ）的作用　，而鸡球虫病是一种寄　生虫病，在世界上普遍发生，是造成集约化养鸡业　生产经济损失的主要因素之一¨引。因此可以利　用螺旋木霉生产木霉酸，然后通过化学反应获得　一［８］吴少雄，郭亚东，郭祀远，等．大花红景天乙醇提取物的化学　成分研究［Ｊ］．现代食品科技，２００８，２４（４）：３２２￣２３，３２６．　［９］Ｏｎｄｅｙｋａ　ＪＧ，Ｇｉａｃｏｂｈｅ　ＲＡ，Ｂｉｌｌｓ　ＧＦ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｐｒｏｐｈｉｌｉｎ：ａｎ　ａｎ－　ｔｉｃｏｅｃｌｄｌａｌ　ａｇｅｎｔ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ａ　ｄｕｎｇ　ｉｎｈａｂｉｔｉｎｇ　ｆｕｎｇｕｓ　ｆ　Ｊ】．　Ｂｉｏｏｒｇ　Ｍｅｄ　Ｃｈｅｍ　Ｌｅｔｔ，１９９８，８（２４）：３４３９￣４４２．　系列衍生物，并测试木霉酸及其衍生物的抗球　虫活性，也许可以从中发现有效的抗球虫药物，从　［１０］刘元元，薛飞群．鸡抗球虫药的体外筛选综述［Ｊ］．中国兽医　寄生虫病，２００５，１３（３）：３４－３７．　而产生良好的经济效益。　本刊声明　为适应信息化建设需要，实现科技期刊编辑、出版发行工作的电子化，推进科技信息　交流的网络化进程，扩大广大作者学术交流桑道，《微生物学杂志》已加入＜中国学术期刊　（光盘版）》并入网“万方数据一数字化期刊群”。凡被本刊录用的文章均统一纳入“万方　数据一数字化期刊群”，进入因特网提供信息服务。如作者不同意转让光盘版和网络版，　请另投他刊。本刊所付稿酬包含刊物内容上冈服务报酬，不再另付。