广州中医药大学黄柏药材的薄层鉴别

黄柏药材的薄层鉴别

实验目的 了解薄层色谱在药物分析中的应用；了解荧光薄层色谱的原理及应用。

实验原理 黄柏主要有效成分为异喹啉生物碱，此外还有酰胺类化合物 、柠檬

苦素类化合物等，其主要成分在荧光薄层板上形成暗斑，用对照品进行对照，可起到鉴别黄柏的作用。

材料、仪器与试剂

材料

黄柏药材 对照品：(1)盐酸小檗碱对照品 (2)巴马汀对照品 仪器

电子天平，HH-S恒温水浴锅,SHZ-D循环水多用真空泵，DGX-9003鼓风干燥箱，KQ3200DE型医用数控超声仪，电热恒温孤峰干燥箱8FG-01B，旋转蒸发器RE-52-05，111粉碎机，WPH-203B 三用紫外分析仪,硅胶G薄层自制板（10×10cm），双槽层析缸。 试剂

甲醇、丙酮、苯，正丁醇、乙醇、冰乙酸，盐酸、浓硫酸，以上试药均为分析纯；香兰素；G薄层层析硅胶为化学纯；羧甲基纤维素钠

实验方法与结果

(1)薄层板制备：以0.5%羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G板（按1：3比例）制成，105℃活化30min，置干燥器备用，规格10x10cm。

(2)显色剂的制备：(1)10%硫酸乙醇溶液：5mL浓硫酸加乙醇到50mL。(2)8%香草醛无水乙醇溶液与硫酸溶液(7-10)：0.4g香兰素加无水乙醇到5mL，35mL浓硫酸加水到50mL，再将两者混合。

(3)供试品及对照品溶液制备

取本品药材粉末0.1g，细，加甲醇5mL，超声处理10min，滤过，滤液加甲醇至5mL，即得供试品溶液；另取盐酸小檗碱标准品，加适量甲醇制成1mL含0.5mg的对照品溶液；另取巴马汀标准品，加适量甲醇制成1mL含0.5mg的对照品溶液。 (4)点样、展开、显色

照薄层色谱法（中国药典2000版一部附录VIB）试验，各吸取对照品和供试品溶液1~2µL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7：1：2）作为展开剂，展开8cm，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检测，显相同荧光斑点。 (5)实验结果

供试品色谱中，在与巴马汀对照品和盐酸小檗碱对照品色谱相应的位置上，显示一个相同的主斑点，结果见图

365nm紫外光灯下

白光下

左起第1点为巴马汀对照品，第2点为盐酸小檗碱对照品，第3-7点为5批不同来源的川黄柏，第8-12点依次为5批不同来源关黄柏。结果显示盐酸小檗碱在川黄柏中的含量较高，在关黄柏中含量较低；巴马汀在川黄柏中含量极少，而在关黄柏中有较高含量。

讨论

薄层色谱法（thin layer chromatography，TLC）是中药质量控制中应用最为广泛的一种鉴别方法，它是利用中草药成分在薄层上层析后产生分离及分离后各组分相对位移值的不同而进行分离分析。薄层色谱法具有直观、特征性强、取样量小、经济、快速、简便的特点，得到了迅速发展，已成为目前药物分析中应用广泛的色谱方法之一，尤其在中药材的鉴别研究中更为常用。本实验采用薄层色谱法对黄柏中的有效成分巴马汀及盐酸小檗碱进行了定性鉴别，取得了较好的效果。