创伤性脑组织匀浆对大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的影响

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中国组织工程研究与临床康复第』２孝　３筋　２００８一Ｏｌ—ｌ５出版　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＣｌｉｎｉｃａｌ　Ｒｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｖｅ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｊａｎｕａｒｙ　１５，２００８　Ｖｏ１．１２，Ｎｏ．３　；；：基础医学　创伤性脑组织匀浆对大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的影响☆　宋永周’，崔慧先　，吕　哲。，王新生　，王振显　，史正亮’　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｂｒａｉｎ　ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒａｔ　ｂｏｎｅ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎｔｏ　ｎｅｕｒｏｎ－ｌｉｋｅ　ｃｅｌｌｓ　ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ　ｔｒａｕｍａｔｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｉｎｊｕｒｙ　Ｓｏｎｇ　Ｙｏｎｇ．ｚｈｏｕ’Ｃｕｉ　Ｈｕｉ．ｘｉａｎ　，Ｌｕ　Ｚｈｅ。Ｗａｎｇ　Ｘｉｎ－ｓｈｅｎｇ　，Ｗａｎｇ　Ｚｈｅｎ－ｘｉａｎ　，Ｓｈｉ　Ｚｈｅｎｇ．１ｉａｎｇ’　，，Ａｂｓｔｒａｃｔ　ＡＤ　：Ｔｈｅ　ｂｏｎｅ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｃａｎ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍ　ｉｎｔｏ　ｎｅｕｒｏｎ．１ｉｋｅ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｂｒａｉｎ　ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅ．Ｔｈｅｒｅ　ａｒｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｓｅｃｒｅｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ａｎｄ　ｂｏｎｅ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｕｌｔｕｒａｌ　ｌｉｑｕｉｄｓ，ｗｈｉｃｈ　ｃａｎ　ｉｎｄｕｃｅ　ｔｈｅ　ｂｏｎｅ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎｔｏ　ｎｅｕｒｏｎ．１ｉｋｅ　ｃｅｌｌｓ．Ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ，ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｒａｕｍａｔｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ａｎｄ　ｎｏｒｍａｌ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｎ　ｈｔｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒａｔ　ｂｏｎｅ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ．　Ｍ　ＴＨｏＤＳ：Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｎｄｕｃｔｄｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｃｅｌｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ａｎａｔｏｍｙ　ｏｆ　Ｈｅｂｅｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｒｆｏｍ　Ｍａｒｃｈ　ｔｏ　Ａｕｇｕｓｔ　ｉｎ　２００７．①Ｏｎｅ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｃｌａｅｎ　ＳＤ　ｒａｔ　ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ　ｌ００一ｌ５０　ｇ　ａｇｅｄ　４—６　ｗｅｅｋｓ　ｗａｓ　ｐｒｏｖｉｄｅｄ　ｂｙ　Ａｎｉｍａｌ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆ　Ｈｅｂｅｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ　ｗｅｒｅ　ａｃｃｏｒｄｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　Ａｎｉｍａｌ　Ｅｔｈｉｃａｌ　Ｓｔａｎｄａｒｄｓ．（２］Ｏｎｅ　ＳＤ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ａｎａｅｓｔｈｅｔｉｚｅｄ　ａｎｄ　ｔｉｂｉａｓ　ａｎｄ　ｆｅｍｕｒｓ　ｗｅｒｅ　ｄｉｓｓｅｃｔｄｅ　ｏｕｔ，ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｂｏｎｅ　ＩＴＩａｌＴＯＷ　ｗａｓ　ｆｌｕｓｈｅｄ　ｏｕｔ　ｗｉｍ　Ｌ．ＤＭＥＭ．Ａｆｔｅｒ　ｉｔ　ｗａｓ　ｃｅｎｔｉｒｆｕｇｅｄ．ｔｈｅ　ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ　ｗａｓ　ｄｉｓｃａｒｄｅｄ．Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｒｅｓｕｓｐｅｎｄｅｄ　ａｎｄ　ｓｅｅｄｅｄ　ｉｎ　Ｌ－ＤＭＥＭ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ　ｗｉｍ　ｆｅｔａｌ　ｂｏｖｉｎｅ　ｓｅｒｕｍ　ｏｆ　０．１０　ｖｏｌｕｍｅ　ｒｆａｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｂｏｎｅ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｅｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｕｎｄｅｒ　ａｎ　ｉｎｖｅｒｔｅｄ　ｐｈａｓｅ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｒａｔ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ｍｏｄｅｒａｔｅ　ｂｒａｉｎ　ｉｎｊｕｒｙ　ｗｅｒｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｂｙ　Ｍｏｄｉｉｆｄｅ　Ｇｒｕｎｃｒ　Ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ　ｔｒａｕｍａｔｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ａｃｑｕｉｒｅｄ　ｏｎ　ｈｔｅ　ｐｏｉｎｔ　ａｂｏｕｔ　２４　ｈｏｕｒｓ　ａｆｔｒｅ　ｈｔｅ　ｉｎｊｒｕｙ　ｎａｄ　ｎｏｒｌＢａｌ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｉｎｄｕｃｅ　３　ｐａｓｓａｇｅ　ｏｆ　ｂｏｎｅ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｆｎ　ｖｉｔｒｏ．（　Ｔｈｅ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｉｎｖｅｒｔｄｅ　ｐｈａｓｅ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｎｅｕｒｏｎ—ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｅｎｏｌａｓｅ　ｗａｓ　ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄ　ｂｙ　ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｒａｕｍａｔｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ａｎｄ　ｎｏｒｍａｌ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｏｎｅ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ．　ＲＥＳＵＬＴＳ：　Ａｆｔｅｒ　２４．ｈｏｕｒｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｔｒａｕｍａｔｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ，ｔｈｅ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｂｏｄｉｅｓ　ｃｈａｎｇｅｄ　ｌｒａｇｅ，３６　ｈｏｕｒｓ　ｌａｔｅｒ，　ｐａｒｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｏｎｅ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｂｏｄＹ　ｃｏｎｔｒａｃｔｅｄ　ｉｎｔｏ　ｒｏｕｎｄ　ｏｒ　ｓｐｉｎｄｌｅ　ｓｈａｐｅ．４８　ｈｏｕｒｓ　ｌａｔｅｒ．ｎｅｕｒｏｎ—ｌｉｋｅ　ｃｅｌｌｓ　ｗｉｍ　ｔｗｏ　ｏｒ　ｍｏｒｅ　ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｓｅｅｎ．Ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｍｅｔｈｏｄ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｎｅｕｒｏｎ—ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｅｎｏｌａｓｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ　ｗａｓ　ｒ５４－２８±６．０３）％．Ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｂｏｎｅ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｗｉｔｈ　ｎｏｒｍａｌ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｗａｓ　ｌｏｗｅｒ．ａｎｄ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｎｅｕｒｏｎ．ｓｐｅｃｉｉｆｃ　ｅｎｏｌａｓｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ　ｗａｓ（３２．７６±３．２５）％．　ＣｏＮＣＬＵＳＩｏＮ：Ｂｏｎｅ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｃａｎ　ｂｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇ　ｉｎｔｏ　ｎｅｕｒｏｎ—ｌｉｋｅ　ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｒａｕｍａｔｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｉｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｗｉｔｈ　ｎｏｒｌＴｌａｌ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ．　Ｓｏｎｇ　ＹＺ，Ｃｕｉ　ＨＸ，ＬＵ　Ｚ，Ｗａｎｇ　ＸＳ，Ｗａｎｇ　ＺＸ，Ｓｈｉ　ＺＬ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｂｒａｉｎ　ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒａｔ　ｂｏｎｅ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎｔｏ　ｎｅｕｒｏｎ－ｌｉｋｅ　ｃｅｌｌｓ　ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ　ｔｒａｕｍａｔｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｉｎｊｕｒｙ．Ｚｈｏｎｇｇｕｏ　Ｚｕｚｈｉ　Ｇｏｎｇｃｈｅｎｇ　Ｙａｎｊｉｕ　ｙｕ　Ｌｉｎｃｈｕａｎｇ　Ｋａｎｇｆｕ　２００８；１２（３）：４６１—４６４（Ｃｈｉｎａ）　【ＷＷＷ．ｚｇｌｃｋｆ．ｃｏｍ／ｚｇｌｃｋｆ／ｅｊｏｕｒｎａｌ／ｕｐｆｉｌｅｓ／０８－３／３ｋ－４６１（ｐｓ）．ｐｄｆ］　摘要　目的：骨髓间充质干细胞在脑组织匀浆诱导环境下可以转化为神经元样细胞，损伤脑组织匀浆的骨髓间充质　细胞培养液　中，不仅有脑组织中提取的生长因子，而且有骨髓间充质千细胞分泌的多种生长因子，共同刺激骨髓间充质于细胞向神经　元样细胞的分化。实验观察了创伤后２４　ｈ和正常脑组织匀浆诱导大鼠骨髓间充质下细胞向神经元样细胞分化的差别。　方法：实验于２００７—０３／０８在河北医科大学解剖教研室细胞培养中心完成。①实验材料：体质量１００－１５０ｇ的健康ＳＤ大鼠由　河北医科大学实验动物中心提供，４－６周龄，清洁级。实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：取１只ＳＤ　大鼠，麻醉后分离股骨和胫骨，用培养基冲洗骨髓腔，离心弃上清液，加入含体积分数为０．１０胎牛血清的Ｌ－ＤＭＥＭ培养基　重悬，接种于培养瓶培养并传代，于倒置显微镜下观察细胞形态。采用Ｇｒｕｎｃｒ改良法制作中度脑损伤大鼠模型，取伤后　２４　ｈ和正常大鼠脑组织匀浆，对体外培养的第３代骨髓间充质干细胞进行诱导。③实验评估：在倒置显微镜下观察细胞形　态学变化，并应用免疫细胞化学技术检测细胞内神经元特异性烯醇化酶的表达，比较创伤后和正常脑组织匀浆两组诱导率　差别。　结果：骨髓间充质干细胞经创伤性脑组织匀浆培养基诱导２４　ｈ后，细胞的胞体变大，３６　ｈ后部分细胞分化，回缩成圆形或　梭形，４８　ｈ后部分细胞可见两个或多个突起伸出，类似神经元。免疫细胞化学技术检测显示，创伤性脑组织匀浆培养基诱　导组神经元特异性烯醇化酶阳性表达为（５４．２８４－６．０３）％，正常脑组织匀浆诱导分化率较前者低，神经元特异性烯醇化酶阳　性表达为（３２．７６４－３．２５）％，细胞生长状态略差。　结论：脑组织匀浆可诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化，创伤性脑组织匀浆可明显促进其分化。　关键词：脑组织匀浆；骨髓间充质干细胞：神经元样细胞　宋永周，崔慧先，吕哲，王新生，王振显，史正亮．创伤性脑组织匀浆对大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的影响　【ＪＪ．中国组织工程研究与临床康复，２００８，１２（３）：４６１—４６４　［ｗｗｗ．ｚｇｌｃｋｆ．ｃｏｍ／ｚｇｌｃｋ婀ｏｕｒｎａｌ／ｕｐｆｉｌｅｓ／０８—３／３ｋ一４６１（ｐｓ）．ｐｄｑ　ｌｓｓＮ　ｌ６７３巷２２５　ＣＮ２１．１５３９／Ｒ　ＣＯＤＥＮ：ＺＬＫＨＡＨ　‘Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ，Ｓｅｃｏｎｄ　Ｈｏｓｐｉｔａ１．Ｈｅｂｅｉ　ＭｅｄｉｃａＩ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．　Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ　０５Ｏ【ｘ】０．Ｈｅｂｅｉ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，　Ｃｈｉｎａ；　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ａｎａｔｏｍｙ．Ｈｅｂｅｌ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．　Ｓｈ￣ｉａｚｈｕａｎｇ　０５【ｘ】Ｉ７．Ｈｅｂｅｉ　ｒＰｏｖｉｎｃｅ，　Ｃｈｉｎａ；　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｏｔｏｒｈｉｎｏｌａｒｙｎｇｏｌｏｇｙ．　Ｓｅｃｏｎｄ　Ｈｏｓｐｉｔａ１．　Ｈｅｂｅｌ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．　Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ　０５Ｏ０ｏ０．Ｈｅｂｅｉ　ｒＰｏｖｉｎｃｅ，　Ｃｈｉｎａ；　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ａｎａｔｏｍｙ．　ＢｅｌＯｎｇ　ＭｅｄｉｃａＩ　Ｃｏｌｌｅｇｅ．　Ｚｈａｎ【ｇＪｉａｋｏｕ　０７５（ｘＭ１．Ｈｅｂｅｉ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，　Ｃｈｉｎａ；　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｕｒｏｌｏｇｙ．Ｈｅｂｅｉ　ｒＰｏｖｉｎｃｉａＩ　Ｐｅｏｐｌｅ’ｓ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，　Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ　０５Ｏ０ｏ０．Ｈｅｂｅｉ　ｒＰｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ　Ｓｏｎｇ　Ｙｏｎｇ—ｚｈｏｕ☆．　Ｓｔｕｄｙｉｎｇ　ｆｏｒ　ｄｏｃｔｏｒａｔｅ，Ａｔｔｅｎｄｉｎｇ　ｐｎｙｓｌｃｌａｎ，　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｏｒ山ｏｐａｅｄｉｃｓ，Ｓｅｃｏｎｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｈｅｂｅｉ　ＭｅｄｉｃａＩ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．　Ｓｈ￣ｉａｚｈｕａｎｇ　０５Ｏ０ｏ０．Ｈｅｂｅｉ　ｒＰｏｖｉｎｃｅ．Ｃｈｉｎａ　ｙｏｎｇｚｈｏｕｓｏｎｇ＠Ｉ２６　ｃｏｍ　Ｒｅｃｅｉｖｅｄ：２【ｘ】７一１０一１０　Ａｃｃｅｐｔｅｄ：２００７—・Ｉ　Ｉ・・０７　４６ｌ　维普资讯 http://www.cqvip.com 一　宋永蜀　等　钠伤性脑组织匀浆对大鼠骨髓闻充菝干细胞分化为神经元样细胞的彰响　河北医科大学第　二医院骨科，河北　省石家庄市　０５Ｏ０ｏＯ：　河北医　＞＞本文导读＜＜　科大学解剖教研　梁盾　孝景：骨髓间充质干细胞在化学　应用要篇：本实验比较　相　缝攫：骨髓问充质干细胞具有多向　室，河北省石家庄　市ｏ５００ｌ７：　河　北医科大学第二　医院耳鼻喉科，河　北省石家庄市　０５Ｏ０ｏＯ：　北方医　学院解剖教研室，　河北省张家口市　０７５０００；　河北省　人民医院泌尿外　科，河北省石家庄　币０５Ｏ０ｏＯ　宋永周☆，男，　１９７３年生，河北　省深泽县人，汉　族，河北医科大学　在读博士，主治医　师，主要从事干细　胞与神经再生方　面的研究。　ｙｏｎｇｚｈｏｕｓｏｎｇ＠　ｌ２６．ｃｏｒｎ　中图分类号：Ｒ３９４　２　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７３—８２２５　（２００８）０３—００４６１—０４　４６２　诱导、中药诱导、脑组织匀浆诱导等特　了创伤后２４　ｈ和正常脑组　分化潜能，来源广泛，取材方便，危险性低，　定诱导环境下可分化为神经细胞，将其　织匀浆诱导骨髓问充质干　无免疫排斥反应，是基因移植及携带的优良　移植入损伤的脑中可以存活并分化为神　细胞分化为神经元样细胞　种子细胞，目前已成为研究的热点。目前尚　经样细胞，但其分化机制尚不明确。脑　的差别，发现脑组织匀浆可　不清楚的是由其分化而采的神经元样细胞　组织损伤后分泌的各种生长因子表达增　诱导大鼠骨髓间充质干细　能否发挥神经元的功能，撤除诱导因素后是　加，可以促进神经组织再生，保护神经　胞向神经元样细胞分化，创　否重新逆向分化，目前各种诱导方法只能使　功能，但对于骨髓间充质干细胞向神经　伤性脑组织匀浆可明显促　其部分分化，如何提高其分化率以及分化后　细胞分化有无促进作用，目前研究尚少。　进其分化。　的功能维持是需要继续研究的课题。　１００　Ｕ／ｍＬ链霉素的Ｌ—ＤＭＥＭ培养基重悬。将　０　引言　细胞接种于培养瓶中，置于３７℃、体积分数　为０．０５的ＣＯ，培养箱中培养。３　ｄ后进行半量换　神经创伤及神经退行性变所导致的神经　液，５　ｄ后全量换液，以后每隔３　ｄ换液１次。倒　元损伤后的再生问题是困扰医学界并急需解　置显微镜下观察，待细胞生长已铺满瓶底的　决的难题之一。骨髓间充质干细胞（ｂｏｎｅ　９５％以上时用０．１２５％胰蛋白酶．０．０２％的ＥＤＴＡ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ，ＢＭＳＣｓ）具有多向分　混合消化液消化传代。　化潜能，来源广泛，取材方便，危险性低，　创伤性和正常脑组织匀浆的提取：大鼠称　无免疫排斥反应，而且不存在伦理问题，并　重，麻醉后固定于特制手术台上，显露颅顶骨，　且具有良好的组织相容性，是基因移植及携　使用ＯＨＢＩＳＩＫ打击器，按Ｇｒｕｎｃｒ改良法制作中　带的优良的种子细胞。这为临床上神经元再　度脑损伤模型（将４０　ｇ砝码于１００　ｃｍ高处通过　生的研究提供了新的方向和思路。　导向管坠落，撞击置于人字缝与矢状缝之间的　圆锥上，致中度脑损伤）Ｉｌｊ。伤后２４　ｈ取出损　１材料和方法　伤脑组织置于冰上，称取湿重，按１５０　ｇ／ＬＬＬ例　加入培养基，再用匀浆器将脑组织匀浆，离心　设计：细胞对照观察。　（２　５００　ｒ／ｍｉｎ，５　ｍｉｎ）后吸取上清液。用０．２２　ｕ　ｍ微　单位：河北医科大学解剖教研室。　孔滤膜过滤后储存－２００℃备用。正常脑组织　材料：实验于２００７—０３／０８在河北医科大　匀浆的制备为直接取大鼠脑组织，其余方法同　学解剖教研室细胞培养中心完成。４～６周龄，　上。　体质量１００～１５０　ｇ健康ＳＤ大鼠１只购自河北医　脑组织匀浆诱导ＢＭＳＣｓ分化：将制备的脑　科大学实验动物中心（动物质量合格证号：　组织匀浆（创伤性和正常脑组织匀浆２组）与　ＳＣＸＫ（冀）２００３．１．００３），清洁级，实验过　培养基按等体积混匀，作为诱导分化的培养　程中对动物处置符合动物伦理学标准。　液。将培养的第３代ＢＭｓｃｓ制成单细胞悬液，　设计、实施、评估者：实验设计为第一、　滴加于６孔板中，孔内预先铺有经多聚赖氨酸　二作者，实施和评估由全体作者共同完成，　处理的载玻片，待细胞贴壁伸展后加入诱导　均经过系统科研培训。　液，并以正常培养的细胞作对照。倒置显微镜　方法：　下观察细胞形态变化，诱导后３　ｄ，取出载玻片，　ＢＭＳＣｓ的分离培养：选取４～６周龄，体　ＰＢＳ冲洗，４％多聚甲醛中固定３０　ｍｉｎ，ＰＢＳ冲　质量１００～１５０　ｇ健康ＳＤ大鼠，麻醉后无菌条件　洗后按ＳＡＢＣ免疫组织化学说明书进行染色鉴　下立即取下双侧下肢股骨、胫骨。剪断股骨、　定ＮＳＥ的表达。　胫骨两端，暴露骨髓腔，用培养基（含有青　分化细胞的鉴定：吸弃６孔板内的培养液，　霉素１００　Ｕ／ｍＬ、链霉素１００　Ｕ／ｍＬ＋１０％ＦＢＳ　ＰＢＳ冲洗；４％多聚甲醛固定至少３０　ｍｉｎＰＢＳ冲　的Ｌ．ＤＭＥＭ）冲出骨髓于离心管中，吹打制　洗；３％Ｈ２０，甲醇溶液浸泡１５　ｒａｉｎ，以灭活内源　成单细胞悬液。１　０００　ｒ／ｍｉｎ，离心５　ｍｉｎ，弃　性过氧化物酶，ＰＢＳ冲洗２　ｍｉｎ×３次：滴加正常　上清液。用含１０％ＦＢＳ、１００　Ｕ／ｍＬ青霉素、　山羊血清封闭液，室温１０　ｎ血；滴加１：１００稀　Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ　１２００，Ｓｈｅｎｙａｎｇ　１１０００４　ｋｆ２３３８５０８３＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ　维普资讯 http://www.cqvip.com 宋永碗等铋岛性瞌组织匀浆对大鼠骨髓阃充曩干缅泡分化为神经元样细咆甑影响@2尼2．释的兔抗大鼠NSE，37℃孵育60min，PBS冲洗2min神经细胞。突起不断延长，有的呈简单的双极，有的×3次；滴加生物素化山羊抗兔IgG，37℃10min，呈现复杂的多极细胞。有些细胞突起甚至长出2～3级分PBs冲洗2minx3次三抗10m。；滴加，37℃in，PBs支，类似于树突结构。3d后分化率基本无变化，见图3冲洗2min×3次；DAB显色，蒸馏水冲洗，脱水透明封正常脑组织匀浆培养基雳导的BMSCs分化率较前者固对照组采用PBS代替一。抗。低，细胞生长状态略差。而正常培养的细胞未见细胞主要观察指标：①大鼠骨髓间充质干细胞生K情形态变化。况和形态变化。②诱导后细胞生长情况和形态变化。③分化后细胞内神经元特异性烯醇化酶的表达情况。统计学方法：每组细胞在显微镜卜随机选取10个非重叠的视野进行计数，计算出诱导的百分率，阳性率一阳性细胞数／(阳性细胞数+阴性细胞数)，结果以j±5表示。2结果2．1间充质干细胞生长情况原代培养的骨髓细胞成分复杂一，二大开始有少量细胞贴壁，形状不规则，有长梭形、多角形等。半量换液后，克隆生长的细胞团块开始迅速增殖，以集落形式生长为主。7～9d细胞可长满培养瓶底，达95％以上融合，主要呈纺锤形，其rfl散在少量折光性强的小圆形细胞。细胞整体排列更趋于规律性，呈漩涡状，辐射状或鱼群样排列。传代后的细胞贴壁及生长更加迅速，2h后部分细胞即开始贴壁，24h内即可完全贴壁，六七天可铺满培养瓶底。细胞形态更均一，纺锤形生长，整体旱现漩涡状，辐射状或鱼群样排列见图1一，。苏木精伊红染色示胞体以纺锤形居多，有突起。细胞核大、居中深染，嗜碱性，核仁明显；胞质着色浅，呈弱嗜酸性，见图2。2．3免疫细胞化学法检测BMscs分化的神经细胞的表面标志物部分细胞呈NsE阳性表达，见图4。创伤性腑组织匀浆培养基诱导组分化率为(54．28±6．03)％，正常脑组织匀浆培养基诱导组分化率为(32．76±3一。．25)％抗为PBS的对照组则无阳性表达。2BMSCs经．2脑组织匀浆诱导BMSCs后的形态变化创伤性脑组织匀浆培养基诱导24h后，细胞的胞体变大态变化不大，36h后部分细胞分化，，细胞形l泉来宽火扁平的细胞胞质逐渐向中央的细胞核收缩，回缩成圆形或梭形核，旱典型的核质体形态，，胞质紧贴胞致密呖折光性强，并随着时问的延长此现象更加趋于明显。48h后部分细胞可见两个或多个突起伸出，类似lssN1673．8225CN21．1539fRCoDEN：ZLKHAH463维普资讯 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７　ｗｗ￣．ｚｇｌｃ　ｃｏｍ　宋永嗣．等．蜘伤性眩组织匀浆对大鼠骨髓闻充囊干细瞻分ｈｔ为神经元详细瞻的影响　３讨论　ＢＭｓＣｓ是存在于骨髓中的一类具有自我更新和增　殖能力的干细胞，可以在体内和体外特定条件下转化　为神经细胞　捌、成骨细胞　、软骨细胞㈣、心肌细胞　等【ｌｌ】。早在２０００年，Ｗｏｏｄｂｕｒｙ等　应用１３一ＭＥ、ＤＭＳＯ　和ｂＦＧＦ以及Ｓａｎｃｈｅｚ－Ｒａｒｎｏｓ等【１　应用ＡＴＲＡ和ＢＤＮＦ等诱　导因子分别在体外成功诱导骨髓间充质细胞转化成神经　元，并表达ＮＳＥ，阳性率Ｊ￣７８％。国内相继有不同学者分　别应用不同中药对ＢＭＳＣｓ进行向神经元的诱导ｌ】　，也分　别取得了不错的结果。本课题组前期应用黄芪诱导ＢＭＳＣｓ　向神经干细胞分化成功【２】。神经元的诱导分化至少有两方　面的意义：一方面，揭示细胞的基因机制具有可塑性，外　环境的变化能够激发出细胞的多能性，从而超越起源胚层　的固有限制，分化为携带本胚层及其他胚层标志物的　细胞；另一方面，作为产生移植用神经元的新途径，　为临床治疗提供机会。　许多学者应用组织匀浆诱导干细胞向特定方向分　化，即为干细胞营造类似体内生长的局部微环境来促　进细胞生长、诱导其向特定方向分化［１％１９】。牛朝诗等　】　应用大鼠闭合性颅脑损伤后２４　ｈ脑组织匀浆诱导　ＢＭＳＣｓ，诱导２４～３６　ｈ后开始出现形态学变化，诱导三　四天后ＮＳＥ表达率为（２３．２％±６．０９）％，ＧＦＡＰ表达率　为（１４．３％±３．２７）％。　关于脑组织匀浆液诱导分化机制，牛朝诗等ｌ２ｕ　认　为可能是脑组织细胞通过分泌的生长因子如神经生长　因子、脑源性神经牛长因子、胶质源性神经营养因子　等生长因子，刺激间充质干细胞向神经细胞分化。损　伤脑组织匀浆之所以能诱导骨髓间充质干细胞分化，　原因是神经组织在受到损伤后，产生相应的反应，随　后出现一系列相应的变化。部分神经元因损伤而死亡，　还有神经元随后出现凋亡。同时，神经组织在损伤后各　种神经生长因子的分泌明显增加。这些生长因子能够促　进神经组织增生，保护神经功能。有学者认为损伤脑组　织匀浆的间充质干细胞的培养液中，不仅有脑组织中提　取的生长因子，而且有间充质干细胞分泌的多种生长因　子，共同刺激间充质干细胞向神经元样细胞的分化。有　报道，双侧皮质挫伤时，在伤后１２　ｈ即有神经生长因子　ｍＲＮＡ升高，伤后２４　ｈ与对照组相比可以增Ｊ３［１６倍；至伤　后３６　ｈ，尽管神经生长因子ｍＲＮＡ￣平有所下降，但仍为　对照组的３倍，而且损伤与非损伤部位无明显差异。损伤　后１２　ｈ之前或１２　ｈ就有脑源性神经生长因子ｍＲＮＡ瞬时　上调，到伤后２４　ｈ，虽然有所下降，但仍明显高于对照　组；脑源性神经生长因子比神经生长因子有更快的应　答，但￣１１３６　ｈ两者都回到基线水平。因此，在本实验中　４６４　选择脑创伤后２４　ｈ的组织匀浆来进行诱导。　４参考文献　Ｍａ　Ｗ，Ｎｉｕ　ＹＰ，Ｚｈａｎｇ　Ｈ．Ｚｈｏｎｇｇｕｏ　Ｚｕｚｈｉ　Ｇｏｎｇｃｈｅｎｇ　Ｙａｎｊｉｕ　Ｙｕ　Ｌｉｎｃｈｕａｎｇ　Ｋａｎｇｆｕ　２００６：ｌ０（４２）：８８—９ｌ　马维，牛彦平，张华．合并脑损伤大鼠骨折愈合过程中转化生长因子　１３　１血清含量及在骨折位点的表达【Ｊ１．中国组织工程研究与临床　康复，２００６，ｌ０（４２）：８８—９ｌ　２　Ｗａｎｇ　ＸＳ．Ｃｕｉ　ＨＸ，Ｌｊｕ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｚｈｏｎｇｇｕｏ　Ｚｕｚｈｉ　Ｇｏｎｇｃｈｅｎｇ　Ｙａｎｊｉｕ　Ｙｕ　Ｌｉｎｃｈｕａｎｇ　Ｋａｎｇｆｕ　２００７：Ｉｌ（４２）：８４６９—８４７２　王新生，崔慧先，刘华，等．黄芪诱导骨髓间充质干细胞分化进程　中细胞内钙离子浓度的动态变化【Ｊ１．中国组织工程研究与临床康　复，２００７，Ｉｌ（４２）：８４６９—８４７２　Ｄｏｎｇ　ＸＸ，Ｌｅｎｇ　ＳＬ，１．，ｉｕ　ＪＢ．Ｚｈｏｎｇｇｕｏ　Ｚｕｚｈｉ　Ｇｏｎｇｃｈｅｎｇ　Ｙａｎｊｉｕ　Ｙｕ　Ｋａｎｇｆｕ　２００６：ｌ０（２Ｉ１：卜３　董晓先，冷水龙，刘金保．黄芪诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为　神经样细胞的基因表达谱【Ｊ１．中国组织工程研究与临床康　复，２００６，ｌ０（２１）：ｌ一３　４　Ｇｕｏ　ＬＹｉｎ　Ｍｅｎｇ　ＨＱ，ｅｔ　ａ１．Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎｔｏ　ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ　ｎｅｕｒｏｎ—ｌｉｋｅ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．Ｂｉｏｍｅｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎ　Ｓｃｉ　２００５；ｌ８（１）：３６－４２　５　Ｄｅｚａｗａ　Ｍ，Ｋａｎｎｏ　Ｈ．Ｈｏｓｈｉｎｏ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｓｐｅｃｉｉｆｃ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｅｕｒｏｎ　ｃｅｌｌｓ　ｆｒｏｍ　ｂｏｎｅ　ｉｎａｒｒｏｗ　ｓｔｒｏｍａｌ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ　【ｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｊｏｎ．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｉｎｖｅｓｔ　２００４；Ｉｌ３（１２）：ｌ７０Ｉ－ｌ７ｌＯ　６　Ｄｅｎｇ　Ｗ，Ｏｂｒｏｃｋａ　Ｍ，Ｆｉｓｈｃｈｅｒ　Ｉ．ｅｒ　ａ１．Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｍａｒｒｏｗ　ｓｔｒｏｍａｌ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎｔｏ　ｅａｒｌｙ　ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ　ｏｆ　ｎｅｕｒａｌ　ｃｅｌｌｓ　ｂｙ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｔｈａｔ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｃｙｃｌｉｃ　ＡＭＥＢｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏｍｍｕｎ　２００ｌ；２８２（１１：１４８一ｌ５２　７　Ｌｏｎｇ　Ｘ，Ｏ１ｓｚｅｗｓｋｉ　Ｍ，Ｈｕａｎｇ　Ｗ，ｅｔ　ａ１．Ｎｅｕｒａｌ　ｃｅｌｌ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｏ　ｉｎ　ｖｉｒｔｏ　ｆｒｏｍ　ａｄｕｌｔ　ｈｕｍａｎ　ｂｏｎｅ　ＩＴＩａｌＴＯＷ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ．Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌｓ　Ｄｅｖ　２００５：１４（１）：６５—６９　８　Ｋｉｍ　ＢＪ．Ｓｅｏ　Ｊｌ－ｌ，Ｂｕｂｉｅａ　ＪＫ，ｅｔ　ａ１．Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆａｄｕｌｔ　ｂｏｎｅⅡ妇ｎＵｗ　ｓｔｅｉｎ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎｔｏｎｅ＝ｑａｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｖｉ觇ＬＮｅＩＩｒｅ咖２０　：ｌ３（９）：ｌｌ８５－ｌｌ８８　９　Ｚｈｕ　Ｗ，Ｓｕｎ　ＪＹ，Ｃｅｎ　ＪＬ，ｅｔ　ａ１．ｓｈｉｙｏｎｇ　ｙｉｘｕｅ　ｚａｚｈｉ　２００７；２３（１８）：２８２２—　２８２５　朱伟，孙俊英，岑建龙，等．成人骨髓间充质干细胞向成骨细胞定向　诱导分化的实验研究【Ｊ１．实用医学杂志，２００７，２３（１８）Ｉ　２８２２．２８２５　Ｈｕｏ　ＣＹ，Ｚｈａｎｇ　ＣＹＹａｎ　Ｗ，ｅｔ　ａ１．Ｚｈｏｎｇｇｕｏ　Ｚｕｚｈｉ　Ｇｏｎｇｃｈｅｎｇ　Ｙａｎｊｉｕ　Ｙｕ　Ｋａｎｇｆｕ　２００６；ｌ０（４１）：６９—７ｌ　霍春月，张玉富，鄢雯．等．骨髓间充质干细胞体外诱导分化软骨细　胞表型的可行性【Ｊ１．中国组织工程研究与临床康复，２００６，１０（４１）：　６９—７ｌ　ＪａｎｇＨ，ＷａｎｇＺＷ，ＷａｎｇＨＳ，ｅｔ　ａ１．ＺｈｏｎｇｇｕｏＺｕｚｈｉＧｏｎｇｃｈｅｎｇＹａｎｊｉｕ　Ｙｕ　Ｌｉｎｃｈｕａｎｇ　Ｋａｎｇｆｕ　２ｏ０６：ｌ０（４５）：８一ｌｌ　姜辉，汪曾炜，王辉山，等．５一氮胞苷体外诱导人骨髓间充质干细　胞转化为心肌样细胞的实验【Ｊ１．中国组织工程研究与临床康　复，２ｏ０６，ｌ０（４５）：８一ｌｌ　Ｗｏｏｄｂｕｒｙ　Ｄ，Ｓｃｈｗａｒｚ　ＥＪ．Ｐｒｏｃｋｏｐ　ＤＪ．ｅｔ　ａ１．Ａｄｕｌｔ　ｒａｔ　ａｎｄ　ｈｕｍａｎ　ｂｏｎｅ　ＩＴＩａｌＴＯＷ　Ｓｔｒｏｍａｌ　ｃｅｌｌｓ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ　ｉｎｔｏ　ｎｅｕｒｏｎｓ．Ｊ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ　Ｒｅｓ　２０００；６ｌ（４）：３６４—３７０　Ｓａｎｃｈｅｚ—Ｒａｍｏｓ　Ｊ．Ｓｏｎｇ　Ｓ，Ｃａｒｄｏｚｏ．Ｐｅｌａｅ　ｅｔ　ａ１．Ａｄｕｌｔ　ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｗ　ｓｔｒｏｍａｌ　ｃｅｌｌｓ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ　ｉｎｔｏ　ｎｅｕｒａｌ　ｃｅｉｌｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．Ｅｘｐ　Ｎｅｕｒｏｌ　２ｏ０Ｏ：ｌ６４（２）：２４７　Ｘｉｎａｇ　Ｘｉａ　ＷＪ，Ｗａｎｇ　Ｕ‘ｅｔ　ａ１．Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ　１ｎｋｅ　Ｄｘｕｅ　Ｘｕｅｂａｏ　２ｏ０ｌ；２２（５）：３２ｌ一３２４　项鹏．夏文杰，王连英，等．丹参注射液诱导间质干细胞分化为神经元　样细胞【Ｊ１．中山医科大学学报，２００１，２２（５）：３２ｌ一３２４　Ｌｉｕ　ＪＢ．Ｄｏｎｇ　ＸＸ，Ｄｏｎｇ　ＹＸ．ｅｔ　ａ１．Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｙｉｘｕｅ　２００３；２４（５）：４６６－４６８　刘金保，董晓先，董燕湘，等．当归诱导骨髓间充质干细胞分化为神经　元样细胞【Ｊ１．广东医学，２００３，２４（５）：４６６—４６８　Ｘｉａｏ　Ｑｚ，Ｌｉ　ＨＷ，Ｗｅｎ　ＧＭ，ｅｔ　ａ１．Ｚｈｏｎｇｇｕｏ　Ｂｉｏｎｇｌｉ　Ｓｈｅｎｇｌｉ　Ｚａｚｈｉ　２００２；ｌ８（１Ｏ）：ｌｌ７９一ｌｌ８２　肖庆忠。李浩威，温冠媚，等．麝香多肽体外诱导成年大鼠和人骨髓间　充质干细胞定向分化为神经元的研究【Ｊ１．中国病理生理杂　志，２ｏ０２．１８（１Ｏ）：ｌｌ７９一ｌｌ８２　Ｌｉｕ　Ｗ，Ｘｉａｏ　ＭＬＷｕ　ＪＨ，ｅｔ　ａ１．Ｚｈｏｎｇｇｕｏ　Ｂｉｏｎｇｌｉ　Ｓｈｅｎｇｌｉ　Ｚａｚｈｉ　２００６；２２（３）：５２４—５２７　刘薇，肖美玲，吴家华，等．脑组织提取液促进体外培养神经干细胞　增殖【Ｊ１．中国病理生理杂志，２００６，２２（３）：５２４—５２７　Ｙａｎｇ　ＬＤｅｎｇ　ＣＺ．Ｇｕ　ＸＳ．ｅｔ　ａ１．Ｎａｎｔｏｎｇ　Ｘｕｅｙｕａｎ　Ｘｕｅｂａｏ　ｌ９９９；ｌ９（４）：３７２—３７３　杨柳，邓传宗，顾晓松，等．脑组织提取液对体外培养雪旺氏细胞影响　的观察【Ｊ１．南通医学院学报，１９９９，１９（４）：３７２—３７３　Ｍｅｉ　ＸＦ，Ｑｉｎ　ｓＪ，Ｆａｎ　ＧＹｅｔ　ａ１．Ｚｈｏｎｇｇｕｏ　Ｌｉｎｃｈｕａｎｇ　Ｊｉｅｐｏｕｘｕｅ　Ｚａｚｈｉ　２ｏ０５；２３（３）：２６４．２６７　梅晰凡。秦书俭，范广宇，等．损伤脊髓组织液对大鼠骨髓基质细胞向神　经细胞诱导分化的研究［Ｊ】．中国临床解剖学杂志，２００５，２３（３）２６４－２６７　２０　Ｎｉｕ　ＣＳ。Ｋｏｎｇ　Ｊ．Ｌｉｔｉ　Ｄｉｎｇｘｉｎａｇ　Ｈｅ　Ｇｏｎｇｎｅｎｇｘｉｎｇ　Ｓｈｅｎｊｉｎｇ　Ｗａｉｋｅ　Ｚａｚｈｉ　２００６；ｌ９（５）：２７０—２７２　牛朝诗．孔杰．损伤脑组织匀浆诱导骨髓间质干细胞向神经细胞分　化的研究【Ｊ】．立体定向和功能神经外科杂志，２００６，ｌ９（５）：２７０－２７２　Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ　１２００，Ｓｈｅｎｙａｎｇ　１１０００４　ｋｆ２３３８５０８３＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ