三唑酮液相色谱分析方法

液相色谱法 1 方法提要

试样用甲醇溶解，过滤，以乙睛+水为流动相，使用以ODS为填充物的不锈钢柱和可变波长紫外检测器，对试样中的三唑酮进行高效液相色谱分离和测定。 2 试剂

乙睛：色谱纯； 甲醇：分析纯； 二次蒸馏水；

三唑酮标样：已知质量分数，≥99%。 3 仪器

高效液相色谱仪：具有可变波长紫外检测器； 色谱工作站；

色谱柱250mm×4.6mm(id)不锈钢色谱柱，内装ODS填充物（5um）； 超声波脱气仪；

过滤器：滤膜孔径0.45um； 微量进样器：50ul； 定量进样阀：20ul。

4 操作条件

柱温：30℃；

流速：1.0ml/min； 检测波长：276nm； 进样体积：20ul；

流动相：乙睛+水=55+45；

保留时间：三唑酮约为6.9min。 5 测定步骤

5.1 标样溶液的制备

称取三唑酮标样60mg(精确至0.2mg)，置于50ml容量瓶中，用甲醇溶解稀释并定容至刻度，摇匀。

5.2 试样溶液的制备

称取含三唑酮60mg的试样(精确称至0.2mg)，置于50ml容量瓶中，用甲醇溶解稀释并定容至刻度，摇匀。 5.3 测定

在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标准溶液，直至相邻两针三唑酮相对响应值变化小于1.0%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。 6 计算

将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中三唑酮峰面积分别进行平均。试样中三唑酮质量分数X(%)，按下式计算：

A2·m1·p

X = A1·m2

式中

A1- 标样溶液中三唑酮峰面积的平均值；

A2- 试样溶液中三唑酮峰面积的平均值； m1-标样的质量，g； m2-试样的质量，g；

p-标样中三唑酮的质量分数，%。

7、结果与讨论

7.1分析条件的确定 紫外全波长扫描三唑酮在276nm处有最大的吸收峰，因此选择检测波长为276nm，本实验中选择的流动相以乙腈为主，通过改变水的体积比例，分离三唑酮标准样品，根据分离情况，确定乙腈:水（55：45，v/v）为流动相；在不同流速下测定样品，根据分离度大小和分析时间长短，选择流速为1.0ml/min；根据不同柱温下的分离效果，柱温定为30℃。

上述操作条件系典型操作系数，可根据不同仪器特点，对给定的操作参数作适当的调整，以期获得最佳效果，典型的三唑酮液相色谱图见图1，图2。

图1三唑酮标准品色谱图

图2 25%三唑酮样品色谱图

8结论

用HPLC法测定样品中三唑酮的含量，操作简便，测定准确，重现性好，方法在0.02~0.32mg/ml范围内具有良好的线性关系，是一种较为理想的分析方法。