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・１３０８・　安徽医科大学学报Ａｃｔａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌｉｓ　Ａｎｈｕｉ　２０１５　Ｓｅｐ；５０（９）　ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１２ｐ７０在经典型霍奇金淋巴瘤中的表达及意义　陈聪　，刘芳　，张聪　，陈顺华　，曹立宇　，尹玉　摘要目的探讨白细胞介素一１２　ｐ４０（１Ｌ一１２ｐ４０）、白细胞介　素．１２ｐ７０（ＩＬ一１２ｐ７０）在经典型霍奇金淋巴瘤（ＣＨＬ）组织中　的表达及意义。方法应用免疫组织化学法检测ＩＬ一１２ｐ４ｏ、　ＩＬ．１２ｐ７０在４１例ＣＨＬ组织、９２例弥漫性大Ｂ细胞淋巴瘤　（ＤＬＢＣＬ）组织及２０例反应性淋巴组织增生（ＲＬＨ）中的表　达。结果ＩＬ一１２ｐ４０、ＩＬ－１２ｐ７０在４１例ＣＨＬ及９２例ＤＬＢＣＬ　中的阳性表达率分别是５１．２２％、７０．７３％及０．００％、　４．３５％，２０例ＲＬＨ中未见ＩＬ一１２ｐ４Ｏ及ＩＬ一１２ｐ７０表达。ＩＬ一　１２ｐ４０、ＩＬ一１２ｐ７０在ＣＨＬ中及各亚型中的表达均明显高于　ＤＬＢＣＬ及ＲＬＨ（Ｐ＜０．０５）。ＩＬ一１２ｐ４０及ＩＬ一１２ｐ７０的表达与　患者性别、年龄、肿块大小、Ｂ症状、临床分期、血清乳酸脱氢　酶水平、国际预后评分等临床病理因素均无关。ＩＬ一１２ｐ４０与　ＩＬ一１２ｐ７０在ＣＨＬ中的表达有相关性（Ｐ＜０．０５）。结论ＩＬ一　１２ｐ４０、ＩＬ一１２ｐ７０在ＣＨＬ发病中有重要作用。　关键词霍奇金淋巴瘤；弥漫性大Ｂ细胞淋巴瘤；ＩＬ一１２ｐ４０；　ＩＬ一１２ｐ７０；免疫组织化学　中图分类号Ｒ　７３３．４　文献标志码Ａ文章编号１０００—１４９２（２０１５）０９—１３０８—０５　经典型霍奇金淋巴瘤（ｃｌａｓｓｉｃａｌ　Ｈｏｄｇｋｉｎ　ｌｙｍ—　ｐｈｏｍａ，ＣＨＬ）是一种常见的淋巴造血系统恶性肿　瘤，占所有霍奇金淋巴瘤（Ｈｏｄｇｋｉｎ　ｌｙｍｐｈｏｍａ，ＨＬ）　病例的９５％以上　１１；其组织学特点为少数的肿瘤细　胞一Ｈｏｄｇｋｉｎ细胞和Ｒｅｅｄ—Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ细胞（ＨＲＳ细　胞）浸润于大量的炎性背景细胞，其中肿瘤性ＨＲＳ　细胞只占１％～５％。该病的发病机制尚未完全明　了，目前认为ＣＨＬ中的肿瘤细胞绝大多数起源于生　发中心Ｂ细胞，其发病与病毒感染、细胞因子及信　号传导通路异常等多种因素有关。弥漫性大Ｂ细　胞淋巴瘤（ｄｉｆｆｕｓｅ　ｌａｒｇｅ　Ｂ—ｃｅｌｌ　ｌｙｍｐｈｏｍａ，ＤＬＢＣＬ）是　一种异质性的侵袭性Ｂ细胞淋巴瘤，根据免疫组化　２０１５—０５—０８接收　基金项目：安徽高校省级自然科学研究项目（编号：ＫＪ２０１３Ａ１５０）　作者单位：　安徽医科大学病理学教研室，合肥２３００３２　安徽医科大学第一附属医院病理科，合肥２３００２２　佛山科学技术学院医学院生理病生教研室，佛山　５２８０００　作者简介：陈聪，女，硕士研究生；　曹立宇，男，副教授，硕士生导师，责任作者，Ｅ．ｍａｉｌ：ｃａ．　ｏｌｉｙｕｈｆ＠１６３．ＣＯＢ　及分子遗传学不同可分为多种亚型，其治疗方法及　预后与ＣＨＬ不同。白细胞介素一１２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１２，　ＩＬ．１２）是一种有多种免疫调节功能的异源二聚体细　胞因子，由ｐ３５及０４０两个亚基通过二硫键连接而　成，主要由树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ　ｃｅｌｌ，ＤＣ）、单核巨　噬细胞、Ｂ细胞以及其他的抗原提呈细胞产生口　，能　促进ＣＤ４　Ｔ辅助细胞（Ｔｈ１）的增殖，诱导ＮＫ细胞　和Ｔ细胞产生细胞因子，在感染免疫、肿瘤免疫及　自身免疫性疾病中起重要作用。关于ＩＬ．１２不同亚　基成分在淋巴瘤中的表达鲜有报道。该实验采用免　疫组织化学法检测ＩＬ一１２ｐ４Ｏ、ＩＬ．１２ｐ７０在ＣＨＬ、ＤＬ—　ＢＣＬ组织中的表达，探讨其在ＣＨＬ及ＤＬＢＣＬ组织　发病中的作用及临床意义，为ＣＨＬ与ＤＬＢＣＬ的鉴　别诊断及治疗提供分子依据。　１材料与方法　１．１材料　１．１．１标本收集安徽医科大学第一附属医院病　理科２００６年１月～２０１３年１２月诊断及分型均明确　的ＣＨＬ病例４１例，其中男２５例，女１６例；发病年　龄５～８０（３３．７６±１７．１４）岁。所有病例参照文献　Ｊ　进行组织形态学分型，其中结节硬化型ＣＨＬ（ｎｏｄｕ．　１ａｒ　ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ　ｃｌａｓｓｉｃａｌ　Ｈｏｄｇｋｉｎ　ｌｙｍｐｈｏｍａ，ＮＳＣＨＬ）２２　例，混合细胞型ＣＨＬ（ｍｉｘｅｄ　ｃｅｌｌｕｌａｒｉｔｙ　ｃｌａｓｓｉｃａｌ　Ｈｏｄｇｋｉｎ　ｌｙｍｐｈｏｍａ，ＭＣＣＨＬ）１２例，淋巴细胞丰富型　ＣＨＬ（１ｙｍｐｈｏｃｙｔｅ－ｒｉｃｈ　ｃｌａｓｓｉｃａｌ　Ｈｏｄｇｋｉｎ　ｌｙｍｐｈｏｍａ，　ＬＲＣＨＬ）７例，淋巴细胞消减型ＣＨＬ（１ｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｄｅ．　ｐｌｅｔｅｄ　ｃｌａｓｓｉｃａｌ　Ｈｏｄｇｋｉｎ　ｌｙｍｐｈｏｍａ，ＬＤＣＨＬ）０例。　ＤＬＢＣＬ病例９２例，其中男６１例，女３１例；发病年龄　１４～９０（５６．５２±１５．１３）岁。另选２０例反应性淋巴　组织增生（ｒｅａｃｔｉｖｅ　ｌｙｍｐｈｏｉｄ　ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ，ＲＬＨ）作为　对照。所有病例经２位病理专家复诊。所有标本经　１０％中性福尔马林液固定，石蜡包埋，３　ｍ连续切　片，分别作ＨＥ、免疫组化及原位杂交染色。　１．１．２主要试剂　兔抗人ＩＬ一１２０４０（ａｂ１０６２７０）多　克隆抗体购自香港Ａｂｃａｍ公司；鼠抗人ＩＬ．１２ｐ７０　（ｓｅ．７４１５０）单克隆抗体购自美国Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ公司；免　疫组织化学二步法染色试剂盒、柠檬酸修复液　安徽医科大学学报Ａｃｔａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌｉｓ　Ａｎｈｕｉ　２０１５　Ｓｅｐ；５０（９）　・１３０９・　（ｐＨ６．０）及ＤＡＢ显色试剂盒购自北京中杉金桥生　物技术有限公司。　因素间的关系　ＩＬ．１２ｐ４Ｏ及ＩＬ．１２ｐ７０表达与患者　性别、年龄、肿块大小、Ｂ症状（发热、乏力、消瘦、盗　１．２实验方法免疫组织化学（ＥｎＶｉｓｉｏｎ二步法）　汗、皮肤瘙痒等）、临床分期、血清乳酸脱氢酶（１ａｃｔｉｃ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＬＤＨ）水平、国际预后评分（ｉｎｔｅｒｎａ—　及原位杂交染色按试剂盒说明书操作，用已知阳性　切片作阳性对照，用ＰＢＳ代替一抗作阴性对照。　１．３结果判定标准ＩＬ一１２ｐ４Ｏ、ＩＬ－１２ｐ７０免疫组化　染色表达主要定位于细胞质，细胞质呈棕黄色者为　ｔｉｏｎａｌ　ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ　ｓｃｏｒｅ，ＩＰＳ）等临床病理因素均无关，　见表２。　表１　ＩＬ－１２ｐ４Ｏ、几・１２ｐＴ０在ＣＨＬ、ＤＬＢＣＬ及ＲＬＨ中的表达［ｎ（％）］　阳性，血管内皮细胞阳性作为内对照；ＥＢ病毒（ｅｐ．　ｓｔｅｉｎ．ｂａｎ＂ｖｉｒｕｓ，ＥＢＶ）编码的小ＲＮＡ（Ｅｐｓｔｅｉｎ—Ｂａｎ＂　ｅｎｃｏｄｅｄ　ＲＮＡｓ，ＥＢＥＲ）阳性定位于细胞核，细胞核　呈棕黄色者为阳性。　１．４统计学处理应用ＳＰＳＳ　１９．０软件进行分析，　计数资料采用ｘ　检验或校正的）（　检验及Ｆｉｓｈｅｒ精　确概率法比较各组间的差异，相关性分析采用二分　类变量之间的Ｐｅａｒｓｏｎ关联分析。　２结果　２．１　ＩＬ．１２ｐ４Ｏ、ＩＬ．１２ｐ７０在ＣＨＬ、ＤＬＢＣＬ及ＲＬＨ　中的表达ＣＨＬ病理诊断及亚型均经组织学、免疫　组化及原位杂交染色证实（图１）。ＩＬ一１２　ｐ４Ｏ及ＩＬ一　１２ｐ７０定位于细胞质中，ＣＨＬ中可见肿瘤性ＨＲＳ细　胞表达，非肿瘤性细胞不表达（图２）。ＩＬ－１２ｐ４Ｏ在　ＮＳＣＨＬ、ＭＣＣＨＬ、ＬＲＣＨＬ、ＣＨＬ中的表达率分别是　５０．００％、４１．６７％、７１．４３％、５１．２２％。ＩＬ一１２ｐ４Ｏ总　体阳性率有差异，ＮＳＣＨＬ、ＣＨＬ与ＤＬＢＣＬ比较（ｘ　＝４５．３３９、５５．９５７，Ｐ＜０．００１），ＭＣＣＨＬ、ＬＲＣＨＬ与　ＤＬＢＣＬ比较（Ｆｉｓｈｅｒ）（　，Ｐ＜０．００１）；ＮＳＣＨＬ与ＲＬＨ　比较（ｘ　＝１３．５４８，Ｐ＜０．００１），ＭＣＣＨＬ与ＲＬＨ比较　（ｘ　＝６．９６９，Ｐ＝０．００８），ＬＲＣＨＬ、ＣＨＬ与ＲＬＨ比较　（）（　＝１３．１１８、１５．６２２，Ｐ＜０．００１）。ＩＬ一１２ｐ７０在　ＮＳＣＨＬ、ＭＣＣＨＬ、ＬＲＣＨＬ、ＣＨＬ中的表达率分别是　８１．８２％、５８．３３％、５７．１４％、７０．７３％，ＩＬ一１２ｐ７０总体　阳性率有差异，ＮＳＣＨＬ、ＭＣＣＨＬ、ＣＨＬ与ＤＬＢＣＬ比　较（ｘ　＝６３．５３５、２７．２５１、６６．９９４，Ｐ＜０．００１），　ＬＲＣＨＬ与ＤＬＢＣＬ比较（Ｆｉｓｈｅｒ）（　，Ｐ＜０．００１）；　ＮＳＣＨＬ与ＲＬＨ比较（ｘ　＝２８．６３６，Ｐ＜０．００１），ＭＣ—　ＣＨＬ与ＲＬＨ比较（ｘ　＝１１．７１５，Ｐ＝０．００１），ＬＲＣＨＬ　与ＲＬＨ比较（）（　＝９．２７０，Ｐ＝０．００２），ＣＨＬ与ＲＬＨ　比较（ｘ　＝２６．９６６，Ｐ＜０．００１）。ＩＬ一１２，ｐ４Ｏ及ＩＬ－　１２ｐ７０在ＣＨＬ及其亚型中的表达率均明显高于ＤＬ—　ＢＣＬ及ＲＬＨ（ｘ　＝６７．２０９、７９．９１６，Ｐ＜０．０５），见表　１。　２．２　ＣＨＬ中几．１２ｐ４ｏ、ＩＬ－１２ｐ７０表达与临床病理　与ＣＨＬ比较：　Ｐ＜０．０５；与ＮＳＣＨＬ比较：　Ｐ＜０．０５；与ＭＣＣＨＬ　比较：　Ｐ＜０．０５；与ＬＲＣＨＬ比较：　Ｐ＜０．０５　表２　ＣＩ－ＩＬ中ｌＬ一１２：ｐ４０、ＩＬ－１２ｐ７０表达与临床病理因索之间的关系　代表临床病理资料齐全的实际病例数；　表示采用校正的ｘ　检验　２．３　ＣＨＬ中ＩＬ．１２ｐ４ｏ与ＩＬ－１２ｐ７０表达之间的关　系２１例ＩＬ　１２ｐ４Ｏ阳性ＣＨＬ病例中，ＩＬ－１２ｐ７０阳　性１８例，阴性３例；２０例ＩＬ一１２ｐ４Ｏ阴性ＣＨＬ病例　中，ＩＬ．１２ｐ７０阳性１１例，阴性９例。Ｐｅａｒｓｏｎ关联分　析结果显示，ＩＬ．１２ｐ４Ｏ、ＩＬ一１２ｐ７０在ＣＨＬ中的表达有　相关性（ｒ＝０．３３７，Ｐ＝０．０３１）。　安徽医科大学学报Ａｃｔａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌｉｓ　Ａｎｈｕｉ　２０１５　Ｓｅｐ；５０（９）　・１３１　１・　本研究采用免疫组织化学法检测ＩＬ一１２０４０及　ＩＬ一１２ｐ７０在ＣＨＬ组织中的表达，数据显示ＩＬ．　１２０４０、ＩＬ一１２ｐ７０在ＣＨＬ组织中表达的阳性率均显　著高于ＤＬＢＣＬ及ＲＬＨ，提示ＩＬ一１２在ＣＨＬ发病中起　重要作用。尽管绝大多数ＣＨＬ被认为是Ｂ细胞起　源的肿瘤，但常用的Ｂ系标志物（如ＣＤ２０）在ＨＲＳ　细胞的阳性表达率不高，Ｐａｘ．５常为弱阳性表达，而　典型的ＤＬＢＣＬ中ＣＤ２０、Ｐａｘ－５常强阳性表达，推测　其发病机制可能与ＤＬＢＣＬ不同。２００８版ＷＨＯ分　类方案　表明ＨＲＳ细胞中ＥＢＶ的感染率与ＣＨＬ　的组织学亚型有关，其中ＭＣＣＨＬ亚型ＥＢＶ感染率　最高，约为７５％。本研究ＣＨＬ中ＬＭＰ一１／ＥＢＥＲ表　达率为４８．８％，其表达与ＩＬ一１２０４０及ＩＬ－１２ｐ７０有　关，提示ＥＢＶ感染在ＣＨＬ发病中起重要作用。　Ｓｃｈｗａｌｌｅｒ　ｅｔ　ａｌ　８　应用免疫组织化学法发现大部　分的ＣＨＬ病例中ＨＲＳ细胞周围聚集有ＩＬ．１２免疫　反应阳性的小淋巴细胞，而ＨＲＳ细胞中未见ＩＬ一１２　表达，这样的病例被认为ＩＬ一１２阳性，其阳性率为　８２％，在非霍奇金淋巴瘤（ｎｏｎ—Ｈｏｄｇｋｉｎ　ｌｙｍｐｈｏｍａ，　ＮＨＬ）、非肿瘤性的淋巴组织病变以及部分ＣＨＬ中　仅有散在的少数ＩＬ－１２免疫反应阳性的小淋巴细　胞，这些病例被认为ＩＬ．１２阴性，并且所有ＥＢＶ阳性　的ＣＨＬ病例也表达ＩＬ—ｌ２，而在所有ＮＨＬ病例中未　检测到ＬＭＰ．１的表达。该研究认为在ＨＲＳ细胞中　不表达ＩＬ一１２，是因为这些细胞是大量细胞因子的已　知来源，而细胞因子的作用是双向的，在周围Ｔ细　胞中表达的ＩＬ一１２可能对ＨＲＳ细胞的生物学功能有　重要影响。Ｓｃｈｗａｌｌｅｒ　ｅｔ　ａｌ＿８　认为大多数ＣＨＬ表达　ＩＬ．１２表明其可能在ＨＬ的发病中起重要作用，提示　该细胞因子与ＥＢＶ阳性的ＨＬ有关。　ＣＨＬ患者除淋巴结进行性肿大外还经常伴有　发热、体重减轻、盗汗等Ｂ症状，推测肿瘤可能分泌　细胞因子。研究　显示ＨＲＳ细胞能分泌多种细胞　因子，如ＩＬ－２、ＩＬ－５、ＩＬ－ｌ５、ＩＬ＿７、ＩＬ－９、ＩＬ一１０、粒细胞一　巨噬细胞集落刺激因子、转化生长因子一Ｂ等。由于　绝大多数ＨＲＳ细胞是起源于Ｂ细胞的，而ＩＬ一１２是　从ＥＢＶ感染的Ｂ淋巴母细胞中发现的，关于ＩＬ一１２　通过ＥＢＶ的介导在Ｂ细胞中表达已有文献　。。报　道。本研究ＨＲＳ细胞胞质中有ＩＬ－１２的表达，提示　ＨＲＳ细胞可能分泌ＩＬ一１２作用于自身及周围Ｔ细　胞，诱导Ｔｈ０细胞向Ｔｈｌ细胞分化，启动细胞免疫应　答。ＩＬ．１２在ＣＨＬ中的表达与临床因素的关系还不　清楚，本研究结果显示ＩＬ．１２０４０及ＩＬ一１２ｐ７０表达与　患者性别、年龄、肿块大小、Ｂ症状、临床分期、ＬＤＨ　水平、ＩＰＳ评分等临床病理因素均无关。　综上所述，本研究结果显示ＩＬ－１２在ＨＬ中高表　达，提示ＩＬ．１２在ＣＨＬ发病中起重要作用，可能为　ＣＨＬ的免疫治疗提供新的实验依据。　参考文献　［１］Ａｎｓｅｌｌ　Ｓ　Ｍ．Ｈｏｄｇｋｉｎ　ｌｙｍｐｈｏｍａ：２０１２　ｕｐｄａｔｅ　ｏｎ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｒｉｓｋ－　ｓｔｒａｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｈｅｍａｔｏｌ，２０１２，８７　（１２）：１０９６—１０３．　［２］Ｄ　Ａｎｄｒｅａ　Ａ，Ｒｅｎｇａｒａｊｕ　Ｍ，Ｖａｌｉａｎｔｅ　Ｎ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎａｔｕｒａｌ　ｋｉｌｌｅｒ　ｃｅｌｌ　ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　ｌ２）ｂｙ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｅｘｐ　Ｍｅｄ，１９９２，１７６（５）：１３８７—　９８．　［３］Ｓｗｅｒｄｌｌｏｗ　Ｓ　Ｈ，Ｃａｍｐｏ　Ｅ，Ｈａｒｒｉｓ　Ｎ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．ＷＨＯ　ｃｌａｓｓｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｕｍｏｕｒｓ　ｏｆ　ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ　ａｎｄ　ｌｙｍｐｈｏｉｄ　ｔｉｓｓｕｅｓ［Ｍ］．Ｌｙｏｎ：　ＩＡＲＣ　Ｐｒｅｓｓ，２００８：２６９—３１９．　［４］　李小秋，李甘地，高子芬，等．中国淋巴瘤亚型分布：国内多　中心性病例１０００２例分析［Ｊ］．诊断学理论与实践，２０１２，ｌｌ　（２）：１１１—５．　［５］　Ｋｏｂａｙａｓｈｉ　Ｍ，Ｆｉｔｚ　Ｌ，Ｒｙａｎ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｉｆｃａ—　ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎａｔｕｒａｌ　ｋｉｌｌｅｒ　ｃｅｌｌ　ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ（ＮＫＳＦ），ａ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ　ｗｉｔｈ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｂｉｏｌｏｇｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｈｕｍａｎ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｅｘｐ　Ｍｅｄ，１９８９，１７０（３）：８２７—４５．　［６］Ｓｔｅｒｎ　Ａ　Ｓ，Ｐｏｄｌａｓｋｉ　Ｆ　Ｊ，Ｈｕｌｍｅｓ　Ｊ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｔｏ　ｈｏｍｏ—　ｇｅｎｅｉｔｙ　ａｎｄ　ｐａｒｔｉａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｍａｔｕｒａ－　ｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ　ｆｒｏｍ　ｈｕｍａｎ　Ｂ—ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｏｉｄ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　Ｕ　Ｓ　Ａ，１９９０，８７（１７）：６８０８—１２．　［７］Ｐｕｉｓｉｅｕｘ　Ｉ，Ｏｄｉｎ　Ｌ，Ｐｏｕｊｏｌ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｃａｎａｒｙｐｏｘ　ｖｉｒｕｓ　ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｉｎ—　ｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　１２　ｇｅｎｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｉｎｔｏ　ｍｕ￣ｎｅ　ｍａｍｍａｒｙ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ｔｕｍｏｒ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒａｌ　ｉｍｍｕｎｉｔｙ　［Ｊ］．Ｈｕｍ　Ｇｅｎｅ　Ｔｈｅｒ，１９９８，９（１７）：２４８１—９２．　［８］　Ｓｃｈｗａｌｌｅｒ　Ｊ，Ｔｏｂｌｅｒ　Ａ，Ｎｉｋｌａｕｓ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１２　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｌｙｍｐｈｏｍａｓ　ａｎｄ　ｎｏｎｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ　ｌｙｍｐｈｏｉｄ　ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ［Ｊ］．　Ｂｌｏｏｄ，１９９５，８５（８）：２１８２—８．　［９］Ｍａｇｇｉｏ　Ｅ，ｖａｎ　ｄｅｎ　Ｂｅｒｇ　Ａ，Ｄｉｅｐｓｔｒａ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ，ｃｙｔｏ—　ｋｉｎｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ　ｉｎ　Ｈｏｄｇｋｉｎ　Ｓ　ｌｙｍｐｈｏｍａ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ　ａｎｄ　ｔｉｓ－　ｓｕｅｓ［Ｊ］．Ａｎｎ　ｏｎｃｏｌ，２００２，１３　ｓｕｐｐｌ　１：５２—６．　［１０］Ｙｏｓｈｉｍｏｔｏ　Ｔ，Ｎａｇａｓｅ　Ｈ，Ｙｏｎｅｔｏ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１２　ｅｘｐｒｅｓ－　ｓｉｏｎ　ｉｎ　Ｂ　ｃｅｌｌｓ　ｂｙ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　Ｅｐｓｔｅｉｎ—Ｂａｒｒ　ｖｉｒｕｓ［Ｊ］．Ｂｉｏ—　ｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏｍｍｕｎ，１９９８，２５２（３）：５５６—６０．　・１３１２・　安徽医科大学学报Ａｃｔａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌｉｓ　Ａｎｈｕｉ　２０１５　Ｓｅｐ；５０（９）　先天性无虹膜家系致病基因的突变检测　耿仁芳　，郑摘要　目的变。方法洁　，周青　，汪渊　，李寿玲　对一常染色体显性遗传的先天性无虹膜（ＡＮ）　８０名与该家系无血缘关系的健康对照组成员均未检测到该　突变。结论ＰＡＸ　６基因Ｃ．９４９　Ｃ＞Ｔ（Ｐ．Ｒ　３１７　Ｘ）突变导　家系进行ＰＡＸ６基因突变筛查，以确定其致病基因及致病突　收集一常染色体显性遗传的ＡＮ家系，采集该家　系患者、家族健康成员外周静脉血，提取基因组ＤＮＡ，应用　聚合酶链式反应（ＰＣＲ）方法扩增ＰＡＸ　６基因ｅｘｏｎ　４一ｅｘｏｎ　１３共１１个外显子以及外显子一内含子拼接部，将纯化后的　ＰＣＲ扩增产物直接测序，运用ＤＮＡＳｔａｒ软件（综合性序列分　析软件）对测序结果进行序列分析，检测ＰＡＸ　６基因的突变　类型，并与８Ｏ名随机抽取的与该家系无血缘关系的健康人　ＰＡＸ　６基因序列进行比对。结果　该家系患者ＰＡＸ　６基因　ｅｘｏｎ　１１存在一个杂合突变ｃ．９４９　Ｃ＞Ｔ（Ｐ．Ｒ　３１７　Ｘ），导致　致ＰＡＸ　６蛋白提前编码终止是该常染色体显性遗传先天性　无虹膜家系的致病原因。　关键词先天性无虹膜；ＰＡＸ　６基因；基因突变　Ｒ　７７３．１；Ｒ　３９４．３　中图分类号文献标志码Ａ文章编号１０００—１４９２（２０１５）０９—１３１２—０４　先天性无虹膜（ＯＭＩＭ　１０６２１０，ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ　ａｎｉｒｉｄ．　ｉａ，ＡＮ）是Ｉ｝缶床上较为罕见的一种眼畸形疾病，具有　遗传性，其发病率为ｌ：６４　０００～１：１００　０００ｌＩ　Ｊ。约　２／３的ＡＮ病例呈家族性，多为常染色体显性遗传，　具有较高外显率，但表现度不一，其余１／３病例呈　散发性，无种族和性别差异Ｌ２　Ｊ。主要临床特征是虹　第３１７位精氨酸的密码子ＣＧＡ被终止密码子ＵＧＡ替代，造　成编码ＰＡＸ　６蛋白的过早终止，而该家系其他健康成员及　２０１５—０３—１３接收　作者单位：　安徽医科大学第一附属医院眼科，合肥２３００２２　膜组织的退化，表现为双眼虹膜的部分或完全缺失，　可合并有眼部或全身其他异常表现，如角膜血管翳、　白内障、青光眼、ＷＡＧＲ综合征等　Ｊ。ＰＡＸ　６基因　为目前该病发现的唯一致病基因，１９９１年，ＰＡＸ　６　安徽医科大学教育部“重要遗传病基因资源利用”重点　实验室（省部共建），合肥２３００３２　作者简介：耿仁芳，女，硕士研究生；　李寿玲，女，教授，主任医师，博士生导师，责任作者，Ｅ—　ｍａｉｌ：ｓｈｏｕｌｉｎｇｌｉ＠１２６．ｃｏｎ　基因便作为ＡＮ的候选基因被定位克隆，将其定位　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ　ｏｆ　ＩＬ－１２　ｐ４Ｏ　ａｎｄ　ＩＬ－１２　ｐ７ｏ　ｉｎ　ｃｌａｓｓｉｃａｌ　Ｈｏｄｇｋｉｎ　ｌｙｍｐｈｏｍａ　Ｃｈｅｎ　Ｃｏｎｇ　，Ｌｉｕ　Ｆａｎｇ　，Ｚｈａｎｇ　Ｃｏｎｇ　，ｅｔ　ａｌ　（　Ｄｅｐｔ　ｏｆＰａｔｈｏｌｏｇｙ，Ａｎｈｕｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｆｅｉ　２３００３２；　Ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　Ａｆｉｌｆｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆＡｎｈｕｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｆｅｉ　２３００２２；　Ｄｅｐｔ　ｏｆＰａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆＦｏｓｈａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ。Ｆｏｓｈａｎ　５２８０００）　Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１　２ｐ４０（ＩＬ．１　２０４０）ａｎｄ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１２ｐ７０（ＩＬ一１２ｐ７０）ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｃｌａｓｓｉｃａｌ　Ｈｏｄｇｋｉｎ　ｌｙｍｐｈｏｍａ（ＣＨＬ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＩＬ．１２０４ｏ　ａｎｄ　ＩＬ．　１　２ｐ７０　ｗｅｒｅ　ｓｔａｉｎｅｄ　ｂｙ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ＥｎＶｉｓｉｏｎ　ｔｗｏ．ｓｔｅｐ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｎ　４　１　ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ＣＨＬ，９２　ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ＤＬＢＣＬ　ａｎｄ　２０　ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ｒｅａｃｔｉｖｅ　ｌｙｍｐｈｏｉｄ　ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ（ＲＬＨ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ＩＬ－１２０４０　ａｎｄ　ＩＬ．１２ｐ７０　ｗｅｒｅ　５１．２２％，７０．７３％ｉｎ　ＣＨＬ　ａｎｄ　０．００％。４．３５％ｉｎ　ＤＬＢＣＬ，ｎｏ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＩＬ．１２　ｗａｓ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｉｎ　ＲＬＨ．Ｔｈｅ　ｅｘ－　ｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ＩＬ・１２０４０　ａｎｄ　ＩＬ－１２ｐ７０　ｉｎ　ＣＨＬ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ＤＬＢＣＬ　ａｎｄ　ＲＬＨ（Ｐ＜　０．０５）．Ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ＩＬ－１２０４０　ａｎｄ　ＩＬ一１２ｐ７０　ｗｉｔｈ　ｓｅｘ，ａｇｅ，ｂｕｌｋｙ　ｄｉｓｅａｓｅ，Ｂ　ｓｙｍｐｔｏｍ，ｃｌｉｎｉｃ　ｓｔａｇｅ，ｓｅｒｕｍ　ＬＤＨ　ｌｅｖｅｌ，ａｎｄ　ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ　ｓｃｏｒｅ．ＩＬ－１２ｐ４Ｏ　ｗａｓ　ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ　ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＩＬ－１２ｐ７０　ｉｎ　ＣＨＬ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ＩＬ一１２０４０　ａｎｄ　ＩＬ一１２ｐ７０　ｐｌａｙ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｒｏｌｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　ＣＨＬ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　ｃｌａｓｓｉｃａｌ　Ｈｏｄｇｋｉｎ　ｌｙｍｐｈｏｍａ；ｄｉｆｆｕｓｅ　ｌａｒｇｅ　Ｂ－ｃｅｌｌ　ｌｙｍｐｈｏｍａ；ＩＬ－１２　４０；Ｉ０Ｌ．１２ｐ７０；ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏ．　ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ