HPLC法测定木贼中槲皮素和山柰素的含量

・４００・　齐鲁药事・Ｑｉｌｕ　ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＡｆｆａｉｒｓ　２０１２　Ｖｏ１．３１，Ｎｏ．７　ＨＰＬＣ法测定木贼中槲皮素和山柰素的含量　郦红岩　，汤小伟　，周坚祥　，赵雷　（１．江苏吉贝尔药业有限公司，江苏镇江２１２００９；２．江苏七Ｏ七天然制药有限公司，江苏镇江２１２００５）　摘要：目的建立高效液相色谱法测定木贼中槲皮素和山柰素的含量。方法采用Ｋｒｏｍａｓｉｌ　Ｃ，　柱（４．６　ｍｍ　ｘ　２５０　槲皮素和山柰素的回收率分　该法结果准确，重复性好，可用于　ｍｍ，５　ｍ）；流动相：甲醇一０．４％磷酸溶液（６０：４０）；检测波长：３６０　ｎｍ，柱温：３０℃。结果别为１００．２％、１００．１％；线性范围分别为０．０２５　８～０．７７４　ｔｘｇ、０．３１６～３．１６　ｇ。结论该产品的质量控制。　关键词：木贼；槲皮素；山柰素；高效液相色谱法；含量测定　中图分类号：Ｒ９２７．２文献标识码：Ａ文章编号：１６７２—７７３８（２０１２）０７—０４００—０２　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ａｎｄ　ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ　ｉｎ　Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ　ｈｉｅｍａｌｅ　Ｌ．ｂｙ　ＨＰＬＣ　ＬＩ　Ｈｏｎｇ—ｙａｈ　，ＴＡＮＧ　Ｘｉａｏ—ｗｅｉ。，ＺＨＯＵ　Ｊｉａｎ．ｘｉａｎｇ　，ＺＨＡＯ　Ｌｅｉ　（　．Ｊｉａｎｇｓｕ　ｆｉｂｒ￣ｒ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ　２１２００９，Ｃｈｉｎａ；２．Ｊｉａｎｇｓｕ　ＳＮＳ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ　２１２００５，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａｎ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ａｎｄ　ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ　ｉｎ　Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ　ｈｉｅｍａｌｅ　Ｌ．．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　Ｋｒｏｍａｓｉｌ　Ｃｌ８　ｃｏｌｕｍｎ（４．６　ｍｍ　ｘ　２５０　ｍｍ，５　ｍ）ｗａｓ　ａｄｏｐｔｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｗａｓ　ｍｅｔｈａｎｏｌ一０．４％　ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ　ａｃｉｄ（６０：４０）．Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　３６０　ｎｍ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　３０℃．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅ—　ｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ａｎｄ　ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ　ｗｅｒｅ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　１００．２％ａｎｄ　１００．１％。ａｎｄ　ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒａｎｇｅｓ　ｗｅｒｅ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　０．０２５　８—　０．７７４　ｇ　ａｎｄ　０．３１６～３．１６　Ｉｘｇ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｍｅ￣ｏｄ　ｗａｓ　ａｃｃｕｒａｔｅ，ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ　ａｎｄ　ｉｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ　ｈｉｅｍａｌｅ　Ｌ．．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ　ｈｉｅｍａｌｅ　Ｌ．；Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ；Ｋａｅｍｐ￣ｒｏｌ；ＨＰＬＣ；Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　木贼为木贼科植物木贼Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ　ｈｉｅｍａｌｅ　Ｌ．的干燥地　２方法与结果　上部分，一年或多年生草本蕨类植物，具有疏散风热、明目退　翳之功效。用于风热目赤，迎风流泪，目生云翳。现代研究　表明，木贼中含有黄酮类、酚酸类、酯类、生物碱类挥发油等　２．１色谱条件Ｋｒｏｍａｓｉｌ　Ｃ１８柱（４．６　ｍｍ　ｘ２５０　ｍｍ，５　ｍ）；　流动相：甲醇一０．４％磷酸溶液（６０：４０）；流速：１．０　ｍＬ・　ｍｉｎ～；柱温：３０　ｏＣ；检测波长：３６０　ｎｍ；进样２０　。理论板　成分　－３］。２０１０年版《中国药典》中对其所含的山柰素进行　了质量控制，本文参考相关文献　。　，对其所含的槲皮素和　山柰素进行了含量测定，木贼的质量控制作参考。　１仪器与试药　数按槲皮素峰计算应不低于３　０００。　２．２对照品溶液与供试品溶液的制备　精密称取槲皮素对　照品和山柰素对照品适量，加８０％甲醇制成每１　ｍＬ含３　ｔｘｇ　和６０　ｇ的对照品混合溶液。　取本品粉末约３．０　ｇ，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密　加８０％甲醇５０　ｍＬ，密塞，称定重量，加热回流１　ｈ，放冷，再　称定重量，用８０％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量　取续滤液２５　ｍＬ，精密加入盐酸５　ｍＬ，摇匀，置９０℃水浴中　加热回流１　ｈ，取出，迅速冷却，转移至５０　ｍＬ量瓶中，用８０％　１．１仪器Ａｇｉｌｅｎｔ　１２００高效液相色谱仪，Ｇ１３１４Ｂ紫外检　测器，Ｇ１３５４Ａ四元泵，Ｇ２１７０ＢＡ二维液相色谱软件包（美国　Ａｇｉｌｅｎｔ科技公司）；ＢＲＡＮＳＯＮ　ＳＢ３２００超声波清洗器；Ｓａｔｏｒｉｕｓ　ＣＰ２２５Ｄ电子天平。　１．２试药槲皮素、山柰素对照品（中国药品生物制品检定　所，批号分别为１０００８１—２００４０６、１　１０８６１—２００６０６，供含量测　甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。　２．３线性关系的考察标准曲线的绘制：精密吸取不同浓　定用），甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。　样品由江苏吉贝尔药业有限公司提供，经江苏大学欧阳臻教　授鉴定为木贼。　度的对照品溶液注入液相色谱仪，以进样量为横坐标（　），　峰面积值Ａ为纵坐标（Ｙ），进行线性回归绘制标准曲线，计　齐鲁药事・０ｉｌｕ　ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＡＥａｉｒｓ　２０１２　Ｖｏ１．３１，Ｎｏ．７　・４０１・　算得回归方程，槲皮素Ｙ＝３　７６７．７Ｘ一９．１２５　４，ｒ＝０．９９９　８；　山柰素Ｙ＝３　９３０．２Ｘ一１８．６３２，ｒ＝０．９９９　９。结果表明槲皮素　在０．０２５　８～０．７７４　ｐ，ｇ、山柰素在０．３１６～３．１６　Ｉｘｇ范围内呈　良好的线性关系。　２．４精密度试验精密吸取同一浓度对照品溶液，依法测　定，连续进样５次，测定峰面积，槲皮素、山柰素的ＲＳＤ分别　为１．７５％、０．９３％，表明其精密度良好。　２．５稳定性试验取同一样品供试液，分别在Ｏ、ｌ、２、３、４．６　ｈ　Ａ　Ｂ　图１　ＨＰＬＣ图　Ａ．对照品；Ｂ．供试品溶液１．槲皮素，２．山柰素　测定槲皮素和山柰素峰面积，其ＲＳＤ分别为１．４７％、１．５４％，表明样品在６　ｈ内具有良好的稳定性。　２．６重复性试验取同一批样品分别精密称取５份，依法　处理，测定，结果样品中槲皮素和山柰素的平均含量分别为　０．０６５、２．２６５　ｍｇ・ｇ～，ＲＥＤ分别为１．８７％、１．４３％。　２．７　回收率测定精密称取已知含量的样品６份约１．５０　ｇ，分别加入槲皮素、山柰素对照品溶液，依法处理，得供试品　溶液，依法测定，结果见表１。　］｛１ｊ表１加样回收率试验结果（ｎ：６）　２．８样品测定分别精密称取不同批次的木贼样品，按供　表２样品含量测定结果　张宪，赵惠萍，张小茜，等．木贼质量标准研究［Ｊ］．中国　中医药信息杂志，２００５，１２（５）：４８—５０．　朴惠顺，金光洙．木贼的化学成分和药理作用研究进展　试品溶液制备方法制备，如法测定，结果见表２。　［Ｊ］．时珍国医国药，２００６，１７（６）：１０７７—１０７８．　许保海，张静，臧琛．节节草生药学的研究［Ｊ］．中国中　药杂志，２００６，３１（１８）：１５３６—１５３７，１５６０．　３讨论　雷鹏，刘韶，李新中，等．ＨＰＬＣ测定地锦草中槲皮素、　选择甲醇一０．４％磷酸溶液体系，改变　山柰素的含量［Ｊ］．中药材，２００５，２８（８）：６６６—６６７．　杨燕飞．ＨＰＬＣ测定金胆片中山柰素和槲皮素的含量　［Ｊ］．中成药，２００５，２７（１１）：１２６３—１２６５．　郑瑶，孙兰香，王紫秋，等．油菜花粉中槲皮素和山柰素　３．１流动相的选择流动相的比例，发现甲醇一０．４％磷酸溶液在６０：４０时，目标　主峰分离的较好，且其他成分对测定无干扰。　３．２样品提取条件的选择分别进行了不同浓度的甲醇提　取、不同提取方法（加热回流、超声提取）和不同提取时间　（０．５、１、１．５　ｈ）的比较，最后确定以８０％甲醇回流１　ｈ。　总含量的ＨＰＬＣ法测定［Ｊ］．中国新药杂志，２００５，１４　（５）：８６—８８．　３．３经本法测定，木贼药材中的槲皮素含量较少，与文献报　道一致。　参考文献：　高汉成，何明三，韩宁涛．木贼乙醇提取物中槲皮素　ＨＰＬＣ法含量测定的研究［Ｊ］．湖北中医学院学报，　１９９９，１（５）：２９—３１．