壳聚糖／海藻酸钠／活性肽复合膜的制备与性能研究

化学工程师　２０１７年第０４期　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒ　ＤＯＩ：１０．１６２４７／ｊ．ｅｎｋｉ．２３—１１７１￣ｑ．２０１７０４０９　科　｛亭ｆ　苜　开　：发　壳聚糖／海藻酸钠／活性肽复合膜　的制备与性能研究’‘　李楚燕，程瑜，胡章　，杨萍，廖铭能，李思东　（广东海洋大学化学与环境学院应用化学系。广东湛江５２４０８８）　摘　要：以壳聚糖和海藻酸钠高分子为基质原料，采用层层自组装技术形成聚电解质复合多层膜，并包裹　深海鱼蛋白活性肽，考察复合膜的厚度、溶胀度、透气性、抗拉伸强度、累积释放度等基本性能。结果表明，制备　复合膜的最佳条件为壳聚糖（分子量５０ｋＤａ）与海藻酸钠的质量分数比２：１。在此条件下，制备复合膜层数为　７层时，其厚度为０．０４１ｍｍ、透气性６３．９６％、溶胀度为１７９．９２％，断裂拉伸率为１２．４５％，３ｈ累计释放度为　１１．５８％，显示出优越的生物医用膜性能，这将为开发一种新型的生物创伤医用膜提供参考。　关键词：壳聚糖；海藻酸钠；活性肽；层层组装技术；创伤修复　中图分类号：￥６６７．１　文献标识码：Ａ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｃｈｉｔｏｓａｎ－ａｌｇｉｎａｔｅ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ－ｐｅｐｔｉｄｅ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ　ｆｄｍｓ　ＬＩ　Ｃｈｕ－ｙａｎ，ＣＨＥＮＧ　Ｙｕ，ＨＵ　Ｚｈａｎｇ　，ＹＡＮＧ　Ｐｉｎｇ，ＬＩＡＯ　Ｍｉｎｇ—ｎｅｎｇ，ＬＩ　Ｓｉ－ｄｏｎｇ　（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｙ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｒｏｎｍｅｎｔ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｏｃｅａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，　Ｚｈａｎｊｉａｎｇ　５２４０８８，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｐｒｅｐａｒｅ　ｃｈｉｔｏｓａｎ　ａｌｇｉｎａｔｅ－ｐｅｐｔｉｄｅ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ　ｆｉｌｍｓ　ｆｒｏｍ　ｃｈｉｔｏｓａｎ　ａｎｄ　ａｌｇｉｎａｔｅ，ｐｏｌｙｅｌｅｃ—　ｔｒｏｌｙｔｅ　ｍｕｈｉｌａｙｅｒ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ　ｍｅｍｂｒａｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ｆｏｒｍｅｄ　ｂｙ　ｌａｙｅｒ－ｂｙ－ｌａｙｅｒ　ｓｅｌｆ－ａｓｓｅｍｂｌｙ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｆｉｓｈ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｗｅｒｅ　ｐａｃｋｅｄ．Ｂａｓｉｃ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ　ｍｅｍｂｒａｎｅｓ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ，ｄｅｇｒｅｅ　ｏｆ　ｓｗｅｌｌｉｎｇ，ｐｅｒｍｅ—　ａｂｉｌｉｔｙ，ｔｅｎｓｉｌｅ　ｓｔｒｅｎｇｔｈ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉ—　ｍｕｍ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ａｓ　ｆｏｌｌｏｗｓ：ｔｈｅ　ｍａｓｓ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｃｈｉｔｏｓａｎ（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　５０ｋＤａ）ａｎｄ　ｓｏｄｉｕｍ　ａｌｇｉｎａｔｅ　２：１　ａｎｄ　７ｌａｙｅｒｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｉｌｍｓ．Ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ　ｆｉｌｍｓ　ｗｅｒｅ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ　０．０４１　ｍｍ，ｓｗｅｌｌｉｎｇ　ｒａ—　ｒｉｏ　１７９．９２％，ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ　６３．９６％，ｔｅｎｓｉｌｅ　ｒａｔｅ　１２．４５％ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　１　１．５８％．Ｉｔ　ｗｉｌｌ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｔｈｅ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｆｏｒ　ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｔｒａｕｍａ　ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　ｍｅｍｂｒａｎｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｃｈｉｔｏｓａｎ；ａｌｇｉｎａｔｅ；ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｐｅｐｔｉｄｅ；ｌａｙｅｒ－ｂｙ－ｌａｙｅｒ　ｓｅｌｆ－ａｓｓｅｍｂｌｙ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ；ｗｏｕｎｄ　ｈｅａｌｉｎｇ　皮肤损伤是日常生活常见的问题，如今市面上　存在的外用性创伤医疗用品，基本是以化学物质为　主要的有效成分，添加到医用胶布上。长时间使用会　造成伤口不透气，使用不当容易导致伤口发炎，且防　菌效果不佳，吸水性能较差，使皮肤处于浸泡状态，　伤口愈合缓慢，更有甚者减慢了原有的愈合速度。　能材料等领域。目前，被公认是一种非常具有发展潜　力的天然高分子材料ｌｌ＿３］。壳聚糖在医用敷料方面的　应用研究成绩卓著，已被广泛用于人造工程皮肤、可　吸收的术后缝线、药物载体等方面［　。与其他抑制　剂相比，壳聚糖具有抗菌谱广、抑制活性高、杀灭率　高的优点［６］，因而能更加有效地抑制细菌的繁殖和　生长。　壳聚糖（ｃｈｉｔｏｓａｎ）亦被称为壳多糖、脱乙酰甲壳　素，是天然糖中唯一大量存在的碱性氨基多糖。壳聚　糖具有优秀的生物相容性、无免疫原性、可生物降解　和广谱抗菌ｆ生等特点，应用于食品、医药、化妆品、功　海藻酸钠一种来源海洋褐藻的天然高分子材　料，安全无毒，温和无刺激，其溶解性、粘性、稳定性　等性能优良，广泛用于药物制剂、化妆品及食品等领　域【　。　生物活性肽是指来源于生物体且对生命活动有　益或具有促进生理作用的功能肽化合物。研究表明，　水产蛋白肽具有生物相容性、低免疫性原性和可降　解性，以及来源丰富等优点，已经广泛运用于医学等　领域【引。　收稿日期：２０１７—０２—１８　基金项目：广东省自然科学基金（２０１６Ａ０３０３０８００９）；广东海洋大学　“创新强校工程”项目（２０１５ＫＴＳＣＸ０５３，ＧＤＯＵ２０１３０５０２２１）　作者简介：李楚燕（１９９３～），女，广东人，本科学士，助理工程师，研究　方向为制药工程。　１０　李楚燕等：壳聚糖／海藻酸钠／活性肽复合膜的制备与性能研究　２０１７年第０４期　本研究以壳聚糖和海藻酸钠大分子为基质原　料，采用层层自组装技术形成聚电解质复合多层膜，　并包裹深海鱼胶原蛋白肽，制备得到壳聚糖／海藻　酸钠／活性肽生物复合膜，通过对复合膜的厚度、溶　胀度、透气性、抗拉伸强度等性能检测，优化制备复　合膜的操作参数，探讨制备高性能复合膜的最优工　艺条件，以期为开发一种新型创伤生物医用膜提供　参考。　１．４壳聚糖／；每藻酸钠，活性肽复合膜的表征　１．４．１膜的厚度制备的复合膜层数分为３层、５　层、７层、９层，若壳聚糖有ｎ层，则海藻酸钠为ｎ一１　层。各选取５张光滑、平整的缓释膜，用螺旋测微器　分别测定膜的４个顶点和１个中心点，取平均值作　为膜的厚度ｄ（ｍｍ）。　１．４．２透气率的测定根据关丽【　］等的实验方法测　定复合膜的透气性能，取４个洁净的称量瓶，加入无　水ＣａＣＩ：（２ｇ）粉末，称重，其中３个瓶口用样品复合　１实验部分　１．１试剂、材料与仪器　海水罗非鱼（湛江东风水产市场）；壳聚糖（Ｃｓ）　（分子量５万Ｄａ，脱乙酰度≥９５％，萨恩化学技术　（上海）６－限公司）；海藻酸钠（ＡＲ天津市科密欧化　学试剂开发中心）；冰乙酸、聚乙二醇４００等试剂均　为分析纯。　紫外分光光度计ｕＶ２８００（上海舜宇恒平科学仪　器有限公司）；索尼数码照相机（ｗ８００，索尼（中国）　有限公司）。　１．２鱼肉蛋白肽的制备　取一定量的罗非鱼肉，按料液比为１：２．５（ｇ，、，）　的比例加入水，将混合物加热，至５０￣Ｃ时加人中性　蛋白酶和木瓜蛋白酶，酶解５ｈ后，升温至１００℃灭　活１０ｍｉｎ，冷却，离心，清液经５０ｎｍ陶瓷膜微滤，得　滤液，减压浓缩，喷雾干燥制成粉状。　１．３壳聚糖，海藻酸钠艚性肽复合膜的制备［９１　壳聚糖膜液称取壳聚糖２ｇ和鱼蛋白肽１ｇ溶　于０．５％冰乙酸水溶液，加入０．２５％聚乙二醇　４００，５０℃水浴加热并磁力搅拌至壳聚糖完全溶解，　静置脱气。　海藻酸钠膜液称取海藻酸钠ｌｇ和深海鱼肽　１ｇ，溶于蒸馏水中，加入０．２５％聚乙二醇４００，磁力搅　拌至海藻酸钠完全溶解，静置脱气。　凝固液室温下，将５ｇ无水硫酸钠置于烧杯　中，加入１００ｍＬ蒸馏水，搅拌均匀，再加入３ｇＣａＣ１　，　搅拌均匀后把沉淀物过滤得到凝固液。　往洁净的培养皿中倒入一定量的壳聚糖溶液，　流延均匀，反应３０ｒａｉｎ后，用去离子水洗涤游离的壳　聚糖分子，而后加入海藻酸钠溶液，３０ｍｉｎ后用去离　子水洗涤，重复上述步骤，可制备一定层数的壳聚糖　／海藻酸钠层层自组装多层膜，将膜置于真空干燥箱　中５５℃烘干后，置于凝固浴中交联３０ｍｉｎ，脱膜，晾　干，薄膜保存在冰箱内待用。　膜密封，另１个不封膜作对照，然后，把４个瓶都置　人装有饱和食盐水的密闭容器中，２４ｈ后将瓶子取　出，把复合膜取下，并再次称重，计算透气率。平行操　作３次，计算平均值。公式如下：　透气率＝样品瓶吸水量／对照瓶吸水量×　１００％　１．４．３溶胀度取膜２ｅｒａ×３ｅｒａ的小片，精确称量　后放人生理盐水中，３７　ｃＣＩ的恒温水浴浸泡２４ｈ后取　出，用滤纸小心吸干表面水分，称重。平行操作３次，　取平均值。溶胀度（Ｓｗｅｌｌｉｎｇ　ｒａｔｉｏ，ＳＲ）的计算公式如　下【ｌ１］：　（％）：里　×１００％　ｍ。　式中ＳＲ：溶胀度，％；ｍ　和ｍ　分别为膜溶胀前、后　的质量，ｇ。　１．４．４抗拉伸强度和断裂伸长率的测定ＩＩ２１将长为　５ｅｍ，宽为ｌｃｍ的薄膜以对折方式悬挂于玻璃棒上，　上端ｌｃｍ处用手握紧，下端夹挂可以加砝码的小托　盘。连托盘质量一起为３００ｇ开始，每分钟放置小砝　码５０ｇ，测量平衡后的膜长度并记录总重量。以复合　膜断裂时的总重量为抗张强度，以断裂时的长度与　原长度（］．５ａｍ）的比值计算断裂伸长率。平行操作３　次，取平均值。　１．４．５活性肽累积释放度的测定精密称取一定质　量的活性肽，配成０．１ｍｇ・ｍＬ　的标准溶液，于紫外可　见分光光度计扫描２００　４００ｎｍ的吸光度，确定活　性肽的最大吸收波长。在最大吸收波长下绘制活性　肽的浓度与吸光度的标准曲线。　取药膜３片，分别投入３个烧杯中。在０．５、１、　１．５、２、３ｈ时分别精密取样２ｍＬ，同时向烧杯中补加　缓冲溶液２ｍＬ。取出的２ｍＬ放于１０ｍＬ容量瓶中，　加蒸馏水定容至刻度，摇匀。取空白膜，同法操作作　为对照，紫外分光光度标准曲线法求出溶液中活性　肽的浓度，根据如下公式分别计算活性肽的体外累　计释放度（Ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ，ＣＲＰ）ｔ”１。　２０１７年第ｏ４期　李楚燕等：壳聚糖／海藻酸钠／活性肽复合膜的制备与性能研究　１１　ｃｊ×Ｖ总＋２＿一　取　ＣＲｔ：￣＝————————上三　————一１　００％　，孔　式中ＣＲＰ％：累计释放百分率；Ｃｆ：第．７时刻缓冲溶　液中药物的浓度，　ｇ・ｍＬ　；Ｖ　释放体系缓冲溶液　总体积，ｌＯ０ｍＬ－・；Ｃ　：第ｉ时刻缓冲溶液中药物的浓　度，　ｇ－ｍＬ　；Ｖ取：每次从释放体系中取出的体积。　２结果与讨论　２．１复合膜的外观形态　所制备复合膜呈圆形，质地均匀，表面光滑，透　明，柔韧性比较好，见图１。　２　２　∞　ｌ　∞　ｌ　如　Ｏ　如　２　图１复合膜的外观形态　Ｆｉｇ．１　Ａｐｐｅａｒａｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ　ｆｉｌｍ　２．２复合膜的厚度和透气率　制备的复合膜层数分为３层、５层、７层、９层，　不同层数复合膜的厚度和透气率见表１。　表１　不同层数复合膜的厚度和透气率　Ｔａｂ．１　Ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ　ａｎｄ　ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ　ｆｉｌｍｓ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｌａｙｅｒｓ　膜的层数越多，其平均厚度越厚，但并非呈线性　关系，当膜由７层增加到９层时，厚度急剧增加。膜　的透气率与平均厚度呈反比例关系，当膜由７层增　加至９层时，透气率急剧降低。由此可见，复合膜７　层时对透气率有着重要的转折作用。皮肤需要呼吸，　作为生物医用膜材料，创伤膜贴在皮肤表面，应具备　一定的透气性能，有助于创面的正常有氧呼吸和新　陈代谢，促进组织的修复和伤口的愈合【ｌ４】。而７层复　合膜透气性达６３．９６％、透气性相对较好。　２．３复合膜的溶胀度和抗拉伸性能　复合膜的溶胀度和断裂拉伸率结果见图２。　１６　１４　当　ｓ　斑　６　１斗　２　Ｏ　９　膜层数　１６　１４　１２蚤　１０　２　∞　堡　当瓣霜　如　１　１　∞　如　Ｏ　毳　６　０　３　５　７　９　膜层数　图２不同层数复合膜的溶胀度和抗拉伸强度　Ｆｉｇ．２　Ｓｗｅｌｌｉｎｇ　ｒａｔｉｏ　ａｎｄ　ｔｅｎｓｉｌｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ　ｆｉｌｍｓ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｌａｙｅｒｓ　由图２可知，复合膜溶胀度随着膜的增厚呈降　低趋势；而复合膜的抗拉伸性能则正好相反。通过比　较，７层壳聚糖／海藻酸钠复合膜各项基本性能更　优，其厚度平均值为Ｏ．０４１ｍｍ，膜轻薄的外形在临床　上可以给与使用者更舒适的感觉。７层复合膜因结　构疏松，水分子容易通过，溶胀度为１７９．９２％，抗拉　伸率为１２．４５％。　复合膜的抗拉伸性能取决与膜材料的交联程　度。带有相反电荷的阳离子壳聚糖大分子与阴离子　海藻酸钠大分子通过静电吸引力相互作用，并且在　含有一ＳＯ２和ｃａ２十凝固浴里，未参与反应的壳聚糖、　海藻酸钠分子分别与一Ｓ０４２－、Ｃａ２＋反应３０ｍｉｎ，使复　合膜呈现出交联程度极高、纳米线性交错的牢固结　构，科学上称之为“蛋盒结构”。但是过度交联会使膜　变脆，力学性能降低，这是由于过度交联使壳聚糖／　海藻酸钠间分子作用力受到破坏，影响分子链的紧　密排列，降低膜的抗拉强度。　２．４复合膜的体外释放度　复合膜中鱼蛋白活性肽的释放曲线见图３。　１２　李楚燕等：壳聚糖／海藻酸钠／活性肽复合膜的制备与性能研究　２０１７年第ｏ４期　菖ｕ　辎　６　４　２　Ｏ　８　６　４　２　Ｏ　０　０．５　１．０　１．５　２．Ｏ　２．５　３．０　时间，ｈ　图３复合膜中活性肽累计释放曲线　Ｆｉｇ．３　Ｃｕｒｖｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｅ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｒｅｌｅａｓｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ　ｆｉｌｍｓ　从曲线中切线的斜率可以判断出不同层数复合　膜中活性肽在溶液中释放速度是先快后慢，０．５ｈ内　释放最快。复合膜表层的活性肽最先透过壳聚糖层　释放，内部的则透过扩散作用慢慢释放出来。数据表　明，复合膜层数越多其缓释期越长，缓释性能越好，　由于复合膜层数越多载药量就越高，活性肽被不同　程度的裹在海藻酸钠层，交联后复合膜中高分子链　空间缩小，越靠近复合膜中心的活性肽就越难释放。　据文献报道，药物缓释最长可达１８０ｈｔ　】。复合膜３、　５、７和９层中活性肽３ｈ累计释放度分别为１４．２１％、　１２．０５％、１１．５８％和６．４６％，复合膜中活性肽的累计释　放度从３层到７层差异性不是很明显，而７层与９　层的累计释放度出现较大的转折。由此可见，复合膜　７层表现出合适的累计释放性能。　３结论　利用层层自组装技术制备的壳聚糖／海藻酸盐　复合膜外观透明光滑，轻薄柔韧，操作条件简单，成　本要求低。本文采用壳聚糖（分子量５０ｋＤａ）与海藻　酸钠的质量分数比２：１，在５５℃条件下干燥，成膜　后用含有一ＳＯ４２－和Ｃａ２＋的凝固浴浸泡交联３０ｍｉｎ，　所制备的复合膜透气性、溶胀度、抗拉伸能力基本符　合临床上创伤膜的要求。通过比较，７层复合膜具有　更加良好的基本性能，其机械强度、透气保湿能力、　稳定的药物释放能力，在作为新型生物医用敷料方　面有可观的探究价值和使用价值。　参考文献　［１］蒋挺大．壳聚糖（第二版）［Ｍ］．北京：化学工业出版社，２００６．　［２］袁丹波．壳聚糖抗菌生物医用膜在烧伤创面中的临床应用［Ｊ］．　微生物学免疫学进展，２０１２，４０（１）：３５—３７．　１３　Ｊ　Ｒｉｎａｕｄｏ　Ｍ．Ｃｈｉｔｉｎ　ａｎｄ　ｃｈｉｔｏｓａｎ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ａｎｄ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ【Ｊ　Ｊ．　Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　Ｐｏｌｙｍｅｒ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００６，３　１：６０３—６３２．　［４］　Ｒａｖｉ　Ｋｕｍａｒ　Ｍ．Ｎ．Ｖ．，Ｍｕｚｚａｒｅｌｌｉ　Ｒ．Ａ．Ａ．，Ｍｕｚｚａｒｅｌｌｉ　Ｃ．，ｅｔ　ａ１．　Ｃｈｉｔｏｓａｎ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓｌＪｊ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｒｅｖｉｅｗ，２００４，１０４：６０１７－６０８４．　［５］马建标，王红军，何炳林．壳聚糖与胶原或海藻酸复合物海绵的　制备以及人胎儿皮肤成纤维细胞在其中的生长［Ｊ］．自然科学进　展，２０００，１０（１０）：８９６—９０３．　［６］绍荣，许琦，余晓红，等．壳聚糖抗菌性能的研究［Ｊｊ＿食品科学，　２００７。２８（９）：１２１—１２４．　［７］张莉华，李科，　方方，海藻酸钠在药物制剂中的应用进展［Ｊ］．　中南药学，２０１６，１４（１）：５２—５６．　［８］曾丽，李丽，王加斌，等．水产胶原蛋白肽功能活性及其制备工　艺研究进展［Ｊ］．浙江海洋学院学报，２０１３，３２（２）：１６３—１６８．　［９］汪东风，高美玲，杨伟，等．一种具有抗菌功能的海洋多糖多层　复合包装膜［Ｐ］．ＣＮ：２０１０１０５７７７４４．１，２０１０．　［１０］关丽，黄国程，杨宝芸，等．壳聚糖复合膜剂的制备及性能研究　［Ｊ］．海峡药学，２０１４，２６（１）：２５—２８．　［１１］徐海星，闫玉华，万涛．壳聚糖一聚丙烯酸双层膜的制备与表　征［Ｊ］．武汉理工大学学报，２００７，２９（１０）：５１—５４．　［１２］　吕慧英，刘建芳，侯艳宁．正交设计法优化创伤涂膜剂的成膜　溶液［Ｊ］．解放军医药杂志，２０１２，２４（２）：３０—３２．　［１３］廉波，傅桂芹，郑炜．壳聚糖膜的制备及表征［Ｊ１．牡丹江师范　学院学报，２００５，（４）：２１—２３．　［１４］王军．组织工程化皮肤支架与创面敷料的研究［Ｄ］．东南大学　硕士学位论文，２００４．　［１５］涂依．壳聚糖／壳聚糖衍生物复合膜的制备及性能研究［Ｄ］．　武汉大学硕士学位论文，２００５．