防哮颗粒对哮喘缓解期大鼠血清IFN-γ和TNF-α的影响

2008年11月J1PEDIATRICSOFTCMNov12008

实验研究

防哮颗粒对哮喘缓解期大鼠血清

γ和TNF2α的影响IFN2

邢向晖1,陈

鲁1,阎

雁2,刘

玮3

250011;

(1.山东中医药大学附属医院,山东

2.济南市第三人民医院,山东　济南摘

要:目的

济南

250025;3.淄博市淄川区中医医院,山东　淄博　255100)

探讨防哮颗粒对哮喘缓解期气道炎性损伤的防治机理。方法制作大鼠哮喘缓解

γ和Tα的影响,并与固本咳喘片、期模型,观察防哮颗粒浓缩液灌胃后对模型大鼠血清IFN2NF2酮替芬

对照组比较。结果防哮颗粒能升高哮喘缓解期模型大鼠血清中IFN2γ含量,降低TNF2α含量,且与中、西药对照组比较差异有高度统计意义(P<0.01)。结论

防哮颗粒可抑制模型大鼠气道炎症,降低

气道高反应,故对哮喘缓解期模型大鼠气道炎性损伤具有良好的预防作用。

α关键词:防哮颗粒;大鼠;哮喘缓解期;实验研究;IFNγ2;TNF2

中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1673-4297(2008)06-0005-03

　　支气管哮喘是由嗜酸粒细胞、肥大细胞和T正交试验法筛选工艺,以最佳流程制备。组成:黄淋巴细胞等多种炎性细胞参与的气道慢性炎症,其气道变应性炎症的程度与哮喘发作程度呈正相关,无论在发作期还是缓解期,这种慢性炎症都不同程

度地存在。近年来运用中医药防治本病取得了显著成果,但其作用机理有待进一步研究。为深化其作用机理,我们观察了防哮颗粒对哮喘缓解期模型

γ和TNF2α的影响,现总结如下。大鼠血清IFN21

实验材料1.1　实验动物

10)g,雌雄各半,由山东大学实验动物中心提供,

符合一级实验动物(清洁级)标准。

1.2　试剂与药品

芪、白术、防风、陈皮、清半夏、熟地黄、淫羊藿、黄芩、蛤蚧、五味子、丹参。生药购于山东中医药大学附属医院药房。大鼠灌胃药以其制成浓缩液,每毫

升含生药2g。其他如生理盐水、0.4%戊巴比妥钠等。1.3　实验仪器

益鸟牌超声雾化器(402型):上海四菱医疗器械厂生产。电热恒温水箱(HW1型):北京医疗设备厂生产。白洋牌自动平衡离心机(B80型):白科学仪器有限公司提供。StatFax-2100型酶标仪:美国AWARENESS公司生产。

2

选择健康Wistar大鼠40只,体质量(200±洋离心机厂生产。JA2003型电子称:由上海恒平

实验方法

将40只大鼠随机分成空白对照组、模型对照

IFNγ2ELISA试剂盒和TNFα2ELISA试剂盒,

均购于晶美生物工程(北京)有限公司。卵白蛋白粉剂(10g/瓶),购于济南科瑞生物科技有限公司(Sigma公司分装)。酮替芬(1mg/片),江苏天士力帝益药业有限公司生产(批号:20050521),研磨成末,用生理盐水配成质量浓度为0.02mg/mL混悬液。固本咳喘片(0.4g/片),台州南峰药业有限公司生产(批号:060305),研磨成末,用生理盐水配成质量浓度为0.02mg/mL混悬液。防哮颗粒(8g/袋),由山东中医药大学药学院药剂教研室按

收稿日期:2008-06-11

组、中药治疗组、中药对照组、西药对照组,每组8只,雌雄各半,常规饲养1周后致敏。除空白对照组外,其余各组大鼠常规皮肤消毒后腹腔注射10%卵白蛋白生理盐水1mL致敏,常规饲养1周后放入密闭的动物造模雾室内,用卵白蛋白与生理盐水配成1%的液体,加入超声雾化器雾化进行大鼠哮喘诱发实验,记录大鼠喘息时的症状、体征(大鼠出现躁动不安、呼吸加速、腹部内凹等呼吸困难表现,说明诱发哮喘成功)。每日诱发哮喘

作者简介:邢向晖(1956-),女,教授,从事中医儿科教学、临床及科研工作。

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第4卷第6期中医儿科杂志Vol14　No16

2008年11月J1PEDIATRICSOFTCMNov12008离心5min,取血清待用。采用ELISA法检测血清

γα的含量(具体步骤按试剂说明进1周,开始灌胃。根据“常用动物与人体面积比值”中INF2、TNF2

计算大鼠灌胃药量(D2=D1/R1×R2)[1]。中药治行操作)。疗组每只每天用防哮颗粒9g/kg,即0.9mL;中药对照组(固本咳喘片)和西药对照组(酮替芬)按每

3

统计方法

采用SPSS12.0统计软件进行统计,计量资料

30min,连续诱发14d。诱发实验结束后常规饲养

只每天0.09mg/kg给药,即0.9mL;空白对照组、采用t检验与方差分析,P<0.05为差异有统计意模型对照组大鼠以等量生理盐水代替,即每只每天义,P<0.01为差异有高度统计意义。用0.9mL。共灌胃30d。

灌胃结束后用0.4%戊巴比妥钠腹腔麻醉(1mL/100g)大鼠,腹主动脉取血,以3000r/min

4　实验结果

见表1。

表1防哮颗粒对大鼠血清IFN2γ和INF2α含量的影响　(�x±s)

组别空白对照组模型对照组中药治疗组中药对照组西药对照组

n88888

γ(pg/mL)IFN2

60.38±2.2621.13±2.9556.13±3.6031.13±2.7532.88±3.98

☆☆△△△★★△★★

α(pg/mL)INF2

33.50±2.3354.75±2.4336.38±1.9238.63±1.6950.88±2.64

☆☆△△△△★★

　　注:与空白对照组比较☆☆P<0.01;与模型对照组比较△P<0.05,△△P<0.01;与中药治疗组比较★★P<0.01。

5　讨论

γ-干扰素(IFN2γ)作为Th1型细胞因子的代表,是一种对细胞功能具有调节作用的小分子多肽。首先在IgE合成方面,活化的Th1细胞产生的IFN2γ和活化的Th2细胞产生的IL24可相互拮抗,从而调节IgE的生成和分泌。无论是外源性还是

γ均可降低致敏小鼠血浆IgE水平、内源性IFN2降

增高,IL24/IFN2γ比值增高,这可能是哮喘容易复发的原因之一

[7]

。

α)是一种参与哮喘发生肿瘤坏死因子(TNF2

及进展的细胞因子,它由壁细胞、气道和组织的巨噬细胞、支气管上皮细胞分泌产生。TNF2α能增加气道的高反应性,诱发气道炎症。研究发现,哮

α水平仍高于正常人。TNF2α喘缓解期患者TNF2

[7]

低气道高反应性和BALF中的浸润细胞数量[2]。除作为一种重要的炎性介质外,同时也可作为各种

同时,IFN2γ也是IL24的拮抗因子,可通过抑制细胞因子的启动因子,影响与哮喘有关的染色体遗IL24mRNA转录水平,并抑制IL24诱导的B细胞表达低亲和IgE受体与可溶性的低亲和IgE受体,

[3-4]

从而抑制体内IgE生成。其次,IFNγ2对气道

传基因的改变,参与哮喘的整个病理生理过程和遗传过程。本实验表明:防哮颗粒能升高哮喘缓解期

模型大鼠血清中IFNγ2,降低TNFα2的含量。证明

嗜酸性粒细胞浸润具有抑制作用。国内的研究发防哮颗粒可抑制模型大鼠气道炎症,降低气道高反

γ能强烈抑制EOS聚集,并能够促进EOS应,故对哮喘缓解期模型大鼠气道炎性损伤具有良现,IFN2

[5]

γ好的预防作用。活化和分化的GM2CSF水平降低。此外,IFN2也是Th2淋巴细胞及包括上皮细胞在内的非淋巴

细胞的负生长调控细胞因子,可抑制人的支气管上皮细胞增殖[6]。哮喘缓解期患儿仍然存在Th2/Th1

《景岳全书喘促》云:“未发时以扶正气为主,既发时以攻邪气为主。”《医宗必读喘》:“治实者攻之即效,无所难也。治虚者补之未必即效,

亚群失衡,主要表现为外周血EOS升高、血清IgE须悠久成功,其间转折进退,良非易也。”哮喘病在γ升高、PBMC生成IL24和IL210增加。而IFN2阳肺,源在脾,根在肾。缓解期肺、脾、肾三脏不足,兼

性细胞百分比降低,PBMC中IL24阳性细胞百分比有痰浊、瘀血。根据“急则治标,缓则治本”的治疗

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第4卷第6期中医儿科杂志Vol14　No16

2008年11月J1PEDIATRICSOFTCMNov12008原则,确立以补肺、肾为主,补脾为辅,佐以化痰、活血的治疗大法。方中黄芪补肺气、益卫气;蛤蚧补肺气、纳肾气。两药合用,外御卫表,内补肺肾,共为君药。五味子上敛肺,下滋肾,助黄芪、蛤蚧补肺益肾涩精,为臣药。熟地黄、淫羊藿补肾阳、滋肾阴,以培先天;白术、陈皮、清半夏补益脾肺,理气化痰,以滋后天。共为佐助之品。黄芩清伏痰蕴郁之热,且防诸药辛燥、温热太过,为佐制之品。丹参活血行血,化瘀走里;防风辛散透达,助黄芪御表。共为使药。诸药合用,共有补肾固本、益气固表、祛痰通络、虚实并治、标本兼顾之效。

参考文献:

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1211-1213.

γandTNF2αinserumofratswithFangxiTheeffectofIFN2aoGranule

againstasthmainremissionstage

XingXianghui,ChenLu,YanYan,LiuWei

1

1

2

3

(1.TheHospitalAffiliatedtoShandongUniversityofTCM,250011,Jinan,China.

2.The3rdPeople’sHospitalinJinanCity,250025,Jinan,China;3.TheHospitalofTCMinZichuanDistrictinZiboCity,255100,Zibo,China)

Abstract:ObjectiveToexploreanddiscussthecurativemechanismofFangxiaoGranule(FXG)a2

gainstrespiratoryinflammatoryinjuriesinasthmainremissionstage.MethodsSelectedhealthyratstoestab2lishthemodelofasthmainremissionstage,enemastomachofratsbyconcentratedFangxiaoGranule(FXG)γandTαinserumofratswithbronchialasthmainremis2solution,observedFXG’sinfluencingonIFN2NF2

sionstage,andcomparedtheinfluencewithpositivecontrolgroupstreatedwithGubenKechuanTabletand

γlevelandreduceleveloftheinflammatoryfac2Ketotifenrespectively.ResultsFXGcouldincreasetheIFN2

αinserumofratswithbronchialasthmainremissionstage.TheresultshowedsignificantdeviationtorTNF2comparedwiththepositivecontrolgroups(P<0.01).ConclusionFXGcaninhibitallergicreactionand

lesseninflammatoryinjuriesofairtractsofmodelratswithbronchialasthmainremissionstage.Ithasdesira2blepreventiveeffectsagainstinflammatoryinjuriesofairtractsofmodelrats.

Keywords:FangxiaoGranule;rat;bronchialasthmainremissionstage;experimentalstudy;IFNγ2;TNF2α

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