新型兽用疫苗佐剂研究进展

山东畜牧兽医　２０１６年第３７卷　新型兽用疫苗佐剂研究进展　杨飞　（山东省枣庄市峄城区畜牧兽医局２７７３００）　中图分类号：￥８５１．３３　文献标识码：Ａ　文章编号：１００７．１７３３（２０１６）１２．００９４．０３　产技术得到不断突破，但其抗原常常不能诱导较强的免　相比于传统的灭活或活体疫苗，由基因工程重组抗　原或化学合成多肽组成的现代疫苗往往存在免疫原性弱　等问题，需要免疫佐剂来增强其作用。疫苗佐剂能够提　高机体对抗原的适应性免疫应答，在疫苗的研发中具有　重要的作用。随着药物研发的不断进步，近年来国内外　出现了许多新型佐剂。尽管传统的铝盐佐剂是目前唯一　全球公认的人用佐剂，但存在激发细胞免疫应答能力差　等不足，因此，需要研发更为安全有效的兽用新型佐　剂，尤其是安全无毒、能够刺激较强细胞免疫应答的佐　剂，以及适合粘膜疫苗，亚单位疫苗及ＤＮＡ疫苗等的免　疫佐剂。本文分类阐述了近年来疫苗佐剂的最新研究进　展及应用概况，总结了佐剂对免疫系统的影响和作用机　制，临床有效性和不良反应，以及新型佐剂研发最新关　注热点。　疫应答【２】。因此要使新型疫苗的缺点得到弥补，最常用的　方法是以适当的佐剂与之配合使用。而常规的佐剂由于　其自身的缺陷使之很难适应新型疫苗的发展，因此新型　佐剂的研究工作已经逐渐引起科研工作者的注意。　１纳米粒子佐剂　（１）纳米粒子一般是指粒径在１～１００ｎｍ范围内的超　微粒子，纳米技术是指在１～ｌＯＯｎｍ的量度范围内研究原　子、分子的结构及相互作用并加以应用的技术，物质用　纳米技术细化之后，具有比表面积大，表面活性中心　多，反应活性高，吸附和催化能力强的特点，因此会产　生体积效应，表面效应，量子尺寸效应，目前关于纳米　材料用作疫苗佐剂，已受到极大重视，纳米粒子能穿透　组织间隙，也可通过机体最小的毛细血管，且分布面极　广，易被消化和吸收，而且包裹或表面结合抗原的纳米　粒子能使蛋白抗原的表面充分暴露，同时使抗原结构更　稳定，在体内能引起强烈的特异性免疫反应。（２）大量　疫苗佐剂是能够提高机体对抗原的适应性免疫应答　的物质Ｉ¨】，能够在免疫反应低下的动物中诱导全面持久　的免疫应答，因此疫苗佐剂在疫苗的研发中具有重要的　作用。传统兽用疫苗中常用的佐剂有铝盐佐剂和油佐　剂。铝盐佐剂为目前应用最广泛的一类佐剂，但其在诱　导细胞毒性Ｔ细胞及Ｔｈｌ型反应中作用很有限　在同高纯　度的小分子蛋白抗原共同使用时不能引起足够的抗体应　答【Ｉ】。油佐剂疫苗在促进疫苗效果方面优于铝盐佐剂疫　苗，但由于油佐剂皮下注射会引起炎症、溃疡和肉芽　的实验都表明，纳米粒子佐剂可有效提高细胞免疫，体　液免疫和黏膜免疫，美国密歇根州大学生物纳米科技中　心，将小鼠免疫流感病毒Ａ和纳米乳剂的混合物免疫小　鼠，２０ｄ后用致死剂量的流感病毒感染小鼠，结果免疫动　物受到了完全的保护，而接种了甲醛灭活病毒或纳米乳　剂的小鼠，则发展为病毒性肺炎，６ｄ后死亡【】　。Ｓｔｉｅｎｅｋｅｒ　等发现聚甲基丙烯酸甲酯纳米粒子对大鼠体内的ＡＩＤＳ疫　肿，且不易代谢。因此，研制和开发新型佐剂，已成为　新疫苗研究中的一个重要领域【　。目前，随着基因工程　苗起辅助作用时，与氢氧化铝辅助作用相比，抗体的滴　亚单位疫苗及ＤＮＡ疫苗的研究，高度纯化新型疫苗的生　往发生过犬的突发死亡的，应结合地域特点，及时开展　度妻高出１００～１０００倍［１　。柴家前等通过专门技术制备纳　ｍ　关工作者的意见，方可给出诊断结论。（４）有些疾病具　有典型的地域特征，如雪盲症。该病只在常年积雪且海　拔较高的地区发生。这就需要相关工作人员对犬异地作　业时根据地方特征，提前做好防护准备。而长期在此工　作的军警犬，需要提前对其做好相关的防护计划和措　对微量元素的检测工作。微量元素如存在偏低或严重不　足的情况，可适当在日粮中逐渐补充该微量元素。（２）　不同地区饮水、地面矿物质的含量差异较大，长时间作　用机体后，也可能会导致一些疾病的发生。但是像因慢　性砷中毒导致的肿瘤性疾病，其病因容易被忽视。作为　警犬繁育工作者和兽医工作者，也应密切关注周边环境　中，犬的疾病发生情况。可以通过定期走访调查的方式　施，应定期开展对犬的健康检查。确保疾病发生有较　好、较快的转归。　参考文献　【ｌ】方向柒．猪硒缺乏引起跋行和趴窝［Ｊ］ｌ中国兽医杂志．２０００，ｌ：３２．　［２］姚伟华，姚晓东，刘跃生等．幼犬硒缺乏症的诊断与防治［Ｊ］．上海　畜牧兽医通讯，２０１１，６：８６．　来获取周边环境中的犬是否存在因水质污染或微量元素　的变化而导致疾病的发生。（３）需要注意的是，微量元　素的缺乏或过多与疾病发生关系之间的论证，需要严密　科学的进行。尤其在死亡报告或病历诊断报告中，应配　合相关的血液检查、影像学检查以及组织病理学检查　等。在对系统检查的数据进行分析后，应综合至少３位相　［３】张福存，文冬光，郭建强等．中国主要地方病区地质环境研究进展　与展望［Ｊ］．中国地质，２０１０，３７（３）：５５１．５６２．　（收稿日期：２０１６－１０－２５）　２０１６年第１２期（总第２３９期）　米蜂胶颗粒（ＮＰＰ），发现ＮＰＰ使雏鸡血液中的Ｔ淋巴细胞比　文献综述　外，枸杞多糖作为甲肝疫苗的佐剂效果与铝佐剂相似，　且与铝佐剂有协同作用。谢勇等研究发现以壳聚糖为佐　率和ＲＢＣ２Ｃ３ｂＲ花环率都极显著增加，而ＲＢＣ２１Ｃ花环率　显著降低【　。纳米佐剂是目前研究的热点，可避免传统疫　苗的载体效应发生，还可提高生物利用率，提高制剂的　均匀性，分散性和吸收｝生，具有较理想的免疫增强作用。　剂的幽门螺杆菌蛋白抗原对幽门螺杆菌感染具有免疫保　护作用，可明显促进ＴＨ２细胞因子的分泌，且与ＣＴ有协　同作用【１　。林树乾等发现黄芪多糖与金黄色葡萄球菌灭　２天然来源的佐剂　活苗联用后可以显著提高血清抗体滴度且抗体维持一个　较高水平㈣。　２．１蜂胶蜂胶是蜜蜂从植物中采集的树脂、花粉及蜂　蜡等混合物，内含几十种生物活性物质、多种维生素、　３脂质体　脂质体是单层磷脂或由数层可溶性物质隔开的呈同　心圆状排列的连续多层磷脂所组成的脂质小囊，既是抗　氨基酸、脂肪酸、多糖及酶等，具有广谱抗病毒、抗细　菌和抗霉菌作用。其具有增进机体免疫功能和促进组织　再生的作用，应用蜂胶或配合抗原能增强免疫功能以及　补体和吞噬细胞活力，增加白细胞的产生和抗体产量，　并使特异性凝集素的产生大大增加。赵恒章等以油乳　剂、蜂胶和铝胶为佐剂，按一定比例配制成巴氏杆菌的　灭活苗【６】。经试验证明，该疫苗安全，有效，其中铝胶苗　的效果不及蜂胶苗和油苗，油苗的保护期和蜂胶灭活苗　的保护期相当，但蜂胶灭活苗的抗体水平上升速度比油　苗快且保护率高。欧阳素贞在大肠杆菌病多价蜂胶苗对　肉仔鸡免疫效果的跟踪研究中证明，该蜂胶疫苗对禽大　肠杆菌病的免疫效果可靠ｆ　；另外发现淫羊霍　蜂胶佐剂　不仅能提高小鼠外周血Ｔ淋巴细胞的转化率，而且影响抗　环磷酸胺对Ｔ淋巴细胞的抑制作用，使受抑制的Ｔ淋巴细　胞转化活性基本恢复正常，并能刺激Ｔ，Ｂ淋巴细胞活　化，显著提高ＣＴＬ活性【８］。　２．２　多糖，糖苷及复方中药　多糖是一类具有广泛生物　活性的生物大分子物质。植物多糖来源于植物的根、　茎、叶、皮、种子和花，由相同或不同单糖以ａ或Ｂ．糖苷　键所组成，分子量数万甚至数百万。其具有抗菌、抗病　毒、抗寄生虫、抗感染、抗肿瘤、抗辐射、抗衰老、降　血糖、降血脂等功用，对机体毒副作用小。中药多糖特　别是补益类中药多糖一般都有增强机体免疫功能的作　用，而对正常细胞没有毒副作用，是良好的生物反应调　节剂，很有希望开发成为新型疫苗佐剂，从中草药植物　中提取糖苷，与病毒及类脂混合，在一定条件下形成一　种性能稳定的复合制剂，免疫增强作用明显，此外，一　些复方中药也可作为佐剂，如紫术散，当归补血汤等，　对免疫激活和提高免疫都有很大的作用。总之，中药佐　剂安全，有效，可靠，稳定，是一个很有发展前景的佐　剂，但因其产地不同，采收时间差异，有效成分的含量　不如西药那样容易确定，另外一些佐剂制作烦琐，价格　高，效果不稳定，限制了它的推广使用，目前将中药作　为疫苗佐剂研究存在很多问题，如分子结构不明确，质　量标准不易控制，生物活性的影响因素多等。柳钟勋从　当归中提取的当归多糖（ＡＳＤＰ）和当归内酯（ＡＳＤＥ３）作为　乙肝疫苗基因工程疫苗佐剂，发现ＡＳＤＰ／ＡＳＤＥ３的免疫效　果明显优于铝佐剂，且有效剂量范围广，毒性小【　。另　原载体，也是免疫佐剂。其具有多种优点：安全性高，　天然靶向型，能降低被包裹抗原的毒性，增强动物对抗　原物质的耐受性，提高抗原稳定性，延长疫苗使用期，　降低贮存条件。但又存在由于所用材料的尾部脂肪酸有　不同程度的双链，导致贮存时会随时间而逐渐氧化，产　生溶血磷脂；小脂质体倾向于相互融合成大脂质体，在　融合过程中可导致包入的抗原释放等缺点。７Ｏ年代Ｅｄｇａｒ　等系统研究了ＬＰＳ的性质并用沙门氏菌的ＬＰＳ水解得到　ＭＰＬＡ，发现ＭＰＬＡ对患肿瘤的几内亚猪有保护作用，而　其毒性只占ＬＰＳ的０．０８％。近年来，人们做了很多工作来　验￣ｉＥＥｄｇａｒ的工作。ＩＬ．１ｂ是一种促炎症因子，在小鼠的研　究【ｌ　中，ＭＰＬＡ强烈刺激ＩＬ．１ｂ的ｍＲＮＡ翻译，相似的模　式在后来研究中再次发现【ｌ８】，小鼠脾脏在注射ＭＰＬＡ后强　烈表达ＩＬ．１ｂ，但血清中ＩＬ．１ｂ含量相比注射ＬＰＳ组小鼠要　低很多。由此可知ＭＰＬＡ与ＬＰＳ同样具有刺激促炎症因子　ＩＬ－１ｂ的作用，但ＭＰＬＡ作用下ＩＬ—ｌｂ只被限制在特定部位　起作用。刘湘涛等报道，用脂质体、油乳剂、明矾及金　黄色葡萄球菌免疫复合物为佐剂，分别与禽多杀性巴氏　杆菌的主要保护性抗原荚膜多糖（ｃＰｓ）配制成疫苗免疫　鸡，结果显示，脂质体组的ＩｇＧ抗体水平高，抗体持续时　间最长¨　。脂质体还是一种有效的黏膜免疫佐剂，能诱　导分泌型ＩｇＡ（ｓｉｇＡ）的产生。Ａｌｅｚｎ等认为，脂质体疫苗　经下呼吸道免疫雌性小鼠，除诱导全身ＩｇＧ和呼吸道ｓＩｇＡ　分泌外，还可诱导阴道分泌物中产生特异性ＩｇＡ，即远端　黏膜区产￣ＥＳｉｇＡ。　４细胞因子　细胞因子可调节细胞增殖分化并诱导细胞发挥功能的　高活性多功能多肽蛋白或糖蛋白。其具有明显的免疫佐　剂效应，可增强病毒、细菌和寄生虫疫苗的保护效应，　激发对肿瘤抗原的免疫反应。先前研究得出细胞因子通　过免疫调节提高抗原提呈能力，诱导并增强ＣＴＬ的作用；　细胞因子佐剂能使机体持续产生抗体，并阻碍淋巴滤泡　中生发中心的形成；细胞因子能将Ｂ细胞与外周隔绝，使　抗体生成下降，从而起到阴性免疫调节作用。　４．１粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ．ＣＳＦ１　ＧＭ．ＣＳＦ　能募集并活化ＡＰＣ，增强初级免疫应答。但ＧＭ．ＣＳＦ的实　９５　山东畜牧兽医　际应用受限于其毒性，需要多次注射和异源免疫【　】。在　有关人用疫苗佐剂研究中上市产品主要用于癌症化疗引　２０１６年第３７卷　【４］张延龄，张晖．疫苗学［Ｍ］．北京：科学出版社，２００４．３００—３１４．　【５］柴家前，王玲，庞听，＆沈志强．纳米蜂胶颗粒对鸡免疫功能的影　响［Ｊ］．畜牧兽医学报．２００２．３３（４）：４１２．４１６．　起的骨髓移植。可作为疫苗和单抗的复合佐剂，在上市　适应症范围内有较好的耐受性【　。　［６］赵恒章，余燕，李国旺等．兔巴氏杆菌蜂胶苗的制备及免疫效果试　验［Ｊ］ｌ中国草食动物，２００８，２８（６）：４９．５０．　［７］欧阳素贞，王双山，张福良等．肉鸡大肠杆菌多价灭活蜂胶苗的研　制［Ｊ】．中国兽医学报，２００５，２５（３）：２５３—２５４．　４．２白介素．１２（ＩＬ。１２）ＩＬ．１２是目前发现的主要由Ｂ细胞　产生的细胞因子，与ＩＬ．２有协同作用。除此之外，ＩＬ．１２　可提高黏膜和体液免疫应答中ＩｇＧ２ａ和ＩｇＡ的水平，明显　降低细菌的侵入量［１　。研究证明，其可激活Ｔｈｌ细胞，有　望用于临床试验的细胞因子佐剂。它加强Ｔｈｌ型细胞免　［８］欧阳素贞，王双山，田素香等．淫羊藿一蜂胶合剂促进鸡细胞免疫　的研究【Ｊ］．畜牧兽医学报，２００６，３７（１）：８０．８３．　［９］柳钟勋，左增艳．ＡＳＤＰ／ＡＳＤＥ３作为乙型肝炎基因工程疫苗新型　疫，目前正在进行ＡＩＤＳ和肿瘤治疗的临床试验【２”。　４．３　白介素Ｉ（ＩＬ－１）ＩＬ．１是由抗原．抗体复合物、炎性细胞　因子ＩＬ．１家族与ＯＶＡ和破伤风毒素的联合免疫，提高血清　和黏膜中ＩｇＧ和ＩｇＡ的水平，增强细胞免疫应答［１　。近年　来，ＩＬ．１介导固有炎性反应，其佐剂性质引起了研究者们　越来越多的关注。细胞因子可以与ＤＮＡ疫苗中的抗原共　表达，提高ＤＮＡ疫苗的效应［２　。但是由于表达和纯化的　成本高，免疫时需多次注射，因而未得到广泛应用。　５展望　以上所述的佐剂种类繁多，效果明显，但它们也有　一些不可避免的缺点，合理选择和使用佐剂不但可以节　约抗原的使用量，还可以迅速刺激免疫系统，增强免疫　应答，特别对免疫力低下的动物意义重大。为了追求可　以以最小的免疫刺激即可引起适当的免疫促进作用，粘　度较低、颗粒大小均匀、稳定性良好，在机体内存在时　间较长，并可提高血中抗体浓度，局部反应轻微，且无　不良反应等的理想免疫佐剂，已逐步成为研究的热点。　以多糖类物质佐剂为例，一些多糖分别或同时具有调节　淋巴细胞、吞噬细胞、白细胞介素、抗体水平以增强免　疫功能；一些多糖可经化学修饰形成多孔微颗粒，具有　浓缩和储存抗原的作用。多糖微粒可耐受胃肠道的降　解，可发展成口服免疫载体。可见，随着分子免疫学等　基础理论的快速发展，免疫佐剂的作用不再局根于增强　免疫应答，而更着重于其诱导机体选择性地产生有效防　御相应病原体感染的特异性的免疫应答并减少抗原物质　的副作用。目前对免疫佐剂研究的主要趋势是多来源、　多途径开发出低廉、高效、速效、长效的新型佐剂并探　索其作用机理。随着佐剂大量出现的同时，随之而来的　是对其安全性的担忧。因此，未来的工作重点之一应是　深入研究佐剂的作用机制，全面推测其对免疫系统的影　响，寻找并建立合理可靠的动物模型，预测免疫毒性发　生的可能性。　参考文献　【ｌ】周慧，李盛贤，平文祥．佐剂的研究进展［Ｊ］．生物技术，２００４，１４（４）　８４—８４．　【２］姜平．兽医生物制品学［Ｍ】．北京：中国农业出版社，２００３．５０．５６．　【３】李忠明．当代新疫苗［Ｍ］．北京：高等教育出版社，２００１．９３．１０１．　复合佐剂的效果及安全性［Ｊ］＿病毒学报，１９９２，８（４）：３０９・３１４．　［１０】谢勇，龚燕锋，周南进，等．以壳聚糖为佐剂的幽门螺杆菌疫苗　的免疫治疗作用［Ｊ】．世界华人消化杂志，２００７，ｌ５（６）：５６１・５６７．　［１１］林树乾，张燕，杨少华等．中药黄芪多糖的免疫佐剂作用［Ｊ］．中　国畜牧兽医，２００６，３３（５）：５８．６０．　【ｌ２］刘湘涛，李忠润．脂质体等四种佐剂对禽多杀性巴氏杆菌亚单位　抗原免疫增强作用的比［Ｊ】．中国兽医科技，１９９５，２５（７）：２５—２６．　【ｌ３］霍宁波．人用免疫佐剂的前景展望［Ｊ］．齐鲁药事，２０１０（２）：１０３—　１０６．　【１４】Ｍｉｌｌｉｎｅｒ　Ｄ　Ｓ，Ｓｈｉｎａｂｅｒｇｅｒ　Ｊ　Ｈ，Ｓｈｕｍａｎ　ｅｔ　ａ１．Ｉｎａｄｖｅｒｔｅｎｔ　ａｌｕｍｉｎｕｍ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ　ｄｕｒｉｎｇ　ｐｌａｓｍａ　ｅｘｃｈａｎｇｅ　ｄｕｅ　ｔｏ　ａｌｕｍｉｎｕｍ　ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｌｂｕｍｉｎ—ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ　ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌｎａｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，　１９８５，３１２（３）：１６５－１６７．　［１５］Ｍｙｃ　Ａ，Ｋｕｋｏｗｓｋａ－Ｌａｔａｌｌｏ　Ｊ　Ｅ　Ｂｉｅｌｉｎｓｋａ　Ａ　Ｕ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｉｍｍｕｎｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｈａｔ　ｐｒｏｔｅｃｔｓ　ｍｉｃｅ　ｆｒｏｍ　ｖｉｒａｌ　ｐｎｅｕｍｏｎｉｔｉｓ　ａｆｔｅｒ　ａ　ｓｉｎｇｌｅ　ｉｎｔｒａｎａｓａｌ　ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｉｎｆｌｕｅｎｚａ　Ａ　ｖｉｒｕｓ　ａｎｄ　ｎａｎｏｅｍｕｌｓｉｏｎ［Ｊ］．　Ｖａｃｃｉｎｅ，２００３，２１（２５）：３８０１＿３８１４．　［１６］Ｓｔｉｅｎｅｋｅｒ　Ｆ，Ｋｒｅｕｔｅｒ　Ｊ，Ｌ６ｗｅｒ　Ｊ．Ｈｉｇｈ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｔｉｔｒｅｓ　ｉｎ　ｍｉｃｅ　ｗｉｔｈ　ｐｏｌｙｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ　ａｓ　ａｄｊｕｖａｎｔ　ｆｕｒ　ＨＩＶ　ｖａｃｃｉｎｅｓ［Ｊ］．　ＡＩＤＳ，１９９１，５（４）：４３１－４３６．　［１７】Ｏｋｅｍｏｔｏ　Ｋ，Ｋａｗａｓａｋｉ　Ｋ，Ｈａｎａｄａ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｐｏｔｅｎｔ　ａｄｊｕｖａｎｔ　ｍｏｒｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ　ｌｉｐｉｄ　Ａ　ｔｒｉｇｇｅｒｓ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｉｍｍｕｎｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，ｂｕｔ　ｎｏｔ　ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ　ｏｆ　ＩＬ—ｌｐ　ｏｒ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｓｐａｓｅ－１［Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００６，１７６（２）：１２０３－１２０８．　【１８］Ｍａｔａ—Ｈａｒｏ　Ｖ　Ｃｅｋｉｃ　Ｃ，Ｍａｒｔｉｎ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｖａｃｃｉｎｅ　ａｄｊｕｖａｎｔ　ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ　ｌｉｐｉｄ　Ａ　ａｓ　ａ　ＴＲＩＦ・ｂｉａｓｅｄ　ａｇｏｎｉｓｔ　ｏｆ　ＴＬＲ４［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，　２００７，３１６（５８３１）：１６２８—１６３２．　［１９］Ｒａｋｈｍｉｌｅｖｉｃｈ　Ａ　Ｌ，Ｊａｎｓｓｅｎ　Ｋ，Ｔｕｒｎｅｒ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ　ｇｅｎｅ　ｔｈｅｒａｐｙ　ｏｆ　ｃａｎｃｅｒ　ｕｓｉｎｇ　ｇｅｎｅ　ｇｕｎ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ｓｕｐｅｒｉｏｒ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１２［Ｊ］．Ｈｕｍａｎ　ｇｅｎｅ　ｔｈｅｒａｐｙ，１９９７，８（１１）：１３０３—１３１１．　［２０］Ａｇｕｉｌａｒ　Ｊ　Ｃ，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ　Ｅ　Ｇ　Ｖａｃｃｉｎｅ　ａｄｊｕｖａｎｔｓ　ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ［Ｊ］．Ｖａｃｃｉｎｅ，　２００７，２５（１９）：３７５２－３７６２．　［２１］Ｗｉｌｓｏｎ—Ｗｅｌｄｅｒ　Ｊ　Ｈ，Ｔｏｒｔｅｓ　Ｍ　Ｐ’Ｋｉｐｐｅｒ　Ｍ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｖａｃｃｉｎｅ　ａｄｊｕｖａｎｔｓ：ｃｕｒｒｅｎｔ　ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ　ａｎｄ　ｆｕｔｕｒｅ　ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２００９，９８（４）：１２７８—１３１６．　（收稿日期：２０１６－０８—２２）