染色体改构复合物（BAF）与转录因子（NF1/CTF）和RNA聚合酶Ⅱ在基因转录活
动中的联系
哺乳动物SWI／SNF(BAF)复合物和转录因子(NF1／CTF)都是转录活动的重要调控因子，许多实验证实，它们共同参与了基因转录调控活动。BAF复合物与转录因子NF1／CTF是否一同参加了由RNA聚合酶Ⅱ介导的基因转录起始复合物的形成，目前还没有比较一致的认识，已有的模型仍缺乏实验支持。
本文以Jurkat细胞、HeLa细胞和小鼠脾T淋巴细胞为研究材料，通过酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫共沉淀、免疫荧光共定位和免疫电镜双标记等实验，观察和分析了BAF复合物与转录因子NF1／CTF和RNA聚合酶Ⅱ在基因转录活动中的相互联系。主要结果如下： 1、通过免疫印记实验证实，在自主增殖的Jurkat细胞核中，存在BAF复合物和转录因子NF1／CTF。
进一步用小鼠T淋巴细胞活化体系的研究发现，未经ConA激活的T淋巴细胞中，BAF复合物和转录因子NF1／CTF不表达或低水平表达。经ConA激活后，小鼠脾T淋巴细胞中BAF复合物和转录因子NF1／CTF开始表达，随着刺激时间的增加，表达量增加。
以上实验表明，BAF复合物和转录因子NF1／CTF在细胞中的表达是与细胞活化和基因转录活动密切相关的。 2、免疫共沉淀实验证明，在活化的小鼠脾T淋巴细胞和自主增殖的Jurkat细胞中，BRG1、NF1／CTF和RNA聚合酶Ⅱ是紧密结合在一起的，在没有活化的小鼠脾T淋巴细胞中这三种蛋白质没有免疫共沉淀现象。
以HeLa细胞为材料，分别用抗BRG1抗体、抗RNA聚合酶Ⅱ抗体和抗NF1／CTF抗体进行免疫荧光共定位分析，发现BAF复合物的核心亚基BRG1和RNA聚合酶Ⅱ的大
亚基存在很好的荧光共定位现象，NF1／CTF和RNA聚合酶Ⅱ的大亚基之间的共定位现象不明显，BRG1和NF1／CTF也有很好的共定位现象。为了进一步揭示BAF复合物与转录因子NF1／CTF和RNA聚合酶Ⅱ的大亚基之间在亚显微结构水平的联系，我们用HeLa细胞进行了免疫电镜双标记实验。
通过计算和分析分别代表两种蛋白质的两种金颗粒之间的距离，进一步证实BAF复合物与RNA聚合酶11的大亚基及转录因子呷／CTF之间的联系紧密，而转录因子 NFI／CTF与叫A聚合酶 11的大亚基之间的联系相对较弱。 3、通过兔疫荧光实验我们还发现，BRG和 RNA聚合酶＊ d＼亚基B6之间没有明显共定位现象，与 RNA聚合酶 11小亚基 BS有部分的共定位现象：呷1儿仆与删A聚合酶＊小亚基孤有比较明显的共定位，与RNA聚合酶11小亚基BS有部分的共定位。
这些结果表明，BRGI和RNA聚合酶小亚基B6可能不直接联系，与小亚基BS可能部分联系。Nn几TF可能是通过与BRGI和RNA聚合酶H小亚基B6的联系参与了转录起始复合物的形成。
免疫电镜双标记实验结果进一步证实了上述观察结果，即BRGI与RNA聚合酶厂小亚基联系不紧密或不直接联系。转录因子呷几TF与MA聚合酶H小亚基B6的联系比较紧密。
4、研究表明，肌动蛋白是BAF复合物的一个亚基，我们在本论文中通过蛋白质免疫沉淀。免疫荧光共定位和免疫电镜双标记实验，探讨了肌动蛋白与 BRGI、转录因于呷／CTF和 RNA聚合酶＊之间的联系。
结果表明，在活化的小鼠脾T淋巴细胞和自主增殖的Jurkat细胞中，肌动蛋白可以与
MF复合物、转录因于 NFI／CTF和 RNA聚合酶 11结合。肌动蛋白与 BAF复合物和 RNA聚合酶 I工的联系紧密，与转录因子 NFI／CTF的联系不太密切。
根据上述实验结果，我们推测，在转录活跃的细胞中，BAF复合物、转录因于帜／CTF、RNA聚合酶11和肌动蛋白是结合在一起的，共同参加了基因转录起始复合物的形成活动；BAF复合物与RNA聚合酶＊的大亚基直接联系，与转录因于呷／CTF通过其N末端直接联系，转录因于NFI／CTF与叫A聚合酶11 ／J’亚基B6直接联系。
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