一种缓释恩诺沙星注射液的初步研究

・－——１８６－－——　江苏农业科学２０１２年第加卷第７期　郭俊清，李建正，徐进，等．一种缓释恩诺沙星注射液的初步研究［Ｊ］．江苏农业科学，２０１２，４０（７）：１８６—１８８　一种缓释恩诺沙星注射液的初步研究　郭俊清，李建正，徐进，赵志刚，卜昌超　（河南省郑州市后羿制药有限公司／河南省天然兽药工程技术研究中心，河南郑州４５１１６１）　摘要：将羧甲基纤维素钠和聚乙烯吡咯烷酮等２种高分子缓释材料，聚乙二醇、ａ一吡咯烷酮、甘油缩甲醛等３种　稳定剂物质按照１８种不同比例组成配方，制成１０％恩诺沙星注射液，通过临床试验对健康猪肌注由不同比例缓释剂　和稳定剂组成的配方，最终筛选出最佳配方，检测血药浓度。结果表明：配方５中检测血药浓度有效时间比其他配方　时间长，半衰期长，药时曲线峰面积大，在临床上达到长效缓释效果。　关键词：缓释材料；稳定剂；血药浓度；恩诺沙星；高效液色谱仪　中图分类号：Ｓ８５９．７９文献标志码：Ａ　文章编号：１００２—１３０２（２０１２）０７—０１８６—０３　喹诺酮类药萘啶酸是由美国Ｌｅｓｈｅｒ等首先开发的”　］，　由于喹诺酮类药物基本结构相似，取代点较多，抗菌谱较广，　活性高，从其结构——活性关系上探索开发新品种已成为喹　其余注射用水等，按照这个比例进行长效物质不同比例的配　合，组成最佳长效配方，根据不同的缓释材料及稳定剂的不同　比例分成１８组不同配方，详见表１。　’　ｌ诺酮类药的研究热点　。恩诺沙星是一种畜禽专用喹诺酮　类药，我国早在２ｏ世纪９ｏ年代初就已开发上市，它属于喹诺　酮类的第３代产品　，别称“氟喹诺酮”类药物，这类药物不　表１不同缓释材料及稳定剂的不同比例配方　１　２　３　４　５　６　７　８　９　ｍ　ｎ　ｎ好¨　盯堪　仅抗菌谱广、杀菌话性强、组织分布广，对于狗、猫等宠物也有　治疗作用　，由于普通的恩诺沙星注射液半衰期短，反复给　药，给饲养员造成劳动力浪费、时间浪费、饲养成本的提高、对　动物应激增加等缺点。因此，针对以上缺点开发出长效缓释　恩诺沙星注射液，为使产品达到长效，选择ｌ８组缓释材料和　ｍ　ｍ　ｍ　ｍ　ｍ　ｍ∞ｍ　ｍ　ｍ　ｍ　ｍ　ｍ　ｍ　ｍ　ｍ　ｍ　∞∞　∞ｍ　ｍ∞加　∞ｍ　ｍ∞∞　ｍ∞　∞　∞ｍ　ｍ　加ｍ　稳定剂不同比例的配方，以临床试验从中选取最佳的配方比　例，保证在临床上起长效作用。　１材料与方法　加ｍ加ｍ∞　∞ｍ　加∞ｍ　ｍ∞　∞加∞∞　加∞ｍ　ｍ∞　１　ｌ　ｌ　０　０　Ｏ　Ｏ　０　０　ｌ　１　ｌ　ｌ　ｌ　ｌ　Ｏ　０　Ｏ　０　Ｏ　Ｏ　５　５　５　５　５　５　５　５　５　５　５　５　１．１材料　１．１．１　试验试剂　聚乙烯吡咯酮（国产分析纯）、聚乙二醇　（国产分析纯）、色谱试剂进口、肝素（医用）、乙腈（国产分析　纯）、磷酸（国产分析纯）、饲料（联合英伟）、羧甲基纤维素钠　（国产分析纯）、Ｏｔ一吡咯烷酮（国产分析纯）、甘油缩甲醛（国　产分析纯）、恩诺沙星原粉（国产分析纯）。　Ｌ　Ｌ　Ｌ　０　０　０　Ｏ　Ｏ　Ｏ　５　５　５　５　５　５　５　５　５　５　５　５　Ｌ　Ｌ　Ｌ　Ｌ　Ｌ　Ｌ　ｍ　ｍ　吼ｍ　ｍ仉ｍ　ｍ　ｍ　ｍ仉　ｍ　ｎ　ｍ　２　２　２　２　２　２　２　２　２　２　２　２　２　２　２　２　２　２　ｍ　ｍ　ｍ　ｎ　ｍ仉　ｍ　１．１．２试验仪器心管。　高效液相色谱仪（型号为Ｗａｔｅｒｓ　ｅ２６９５，　￡；　舵观　ｇ｝￡ｊ观舵　窨｝　４　４　４　４　４　４　４　４　４　４　４　４　４　４　４　４　４　４　美国）、低温离心机（Ｔｈｅｒｍｏ）、注射器、移液枪（Ｔｈｅｒｍｏ）、离　１．１．３试验动物６周龄健康猪３６头，公母兼有，平均体重　（１４．５±１．５）ｋｇ，在专门试验区进行常规饲养，自由采食和饮　水，饲料不含有任何抗菌药物。　１．２方法　１．２．２试验动物标记及给药将这３６头健康试验猪随机分　成１８组，每组２个平行，编号、称重，按体重肌注恩诺沙星注　射液１０　ｍ１．／ｋｇ，采取自由采食和饮水，饲料为全价饲料（不含　抗菌素）。　Ｉ．２。１　产品配方主要用到恩诺沙星原料１０％、抗氧化剂　０．２％、络合剂０．０２％、助溶剂４％、缓释剂２％、稳定剂４０％、　１．２．３标准曲线的制定准确称取恩诺沙星标准品，用　０．０２５　ｍｏｌ／Ｌ磷酸一乙腈（８３：１７）流动相溶液溶解并稀释，用　收稿日期：２０１１—１２—０５　蒸馏水稀释为２００、１００、５０、２５、１２．５、１０…５　２　５…１　０　５．￣／ｍＬ一　系列梯度的标准工作液；取１Ｏ份７００　的空白血浆，分别与　基金项目：河南省郑州市科技攻关项目（编号：１０ＫＪＧＣ２２２、　０８２ＳＧＺＮ１６０５８）。　１００　不同浓度梯度的标准工作液混合均匀，使血浆恩诺沙　星标准浓度为２０、１０、５、２．５、１．２５、１、０．５、０．２５、０．１、　０．０５￣ｇ／ｍＬ；各血浆标准液加入２００　流动相溶液，涡旋　作者简介：郭俊清（１９８３一），男，河南安阳人，硕士研究生，研究方向　为临床应用分子生物学。Ｅ—ｍａｉｌ：ｇｉｑｌ０７＠ｙａｈｏｏ．１３１１。　郭俊清等：一种缓释恩诺沙星注射液的初步研究　一ｌ８７—　１．５　ｒａｉｎ。１２　０００　ｒ／ｒａｉｎ离心２０　ｍｉｎ；取上清液２０　Ｌ，注入色谱　系统进行分析，按ＨＰＬＣ操作条件得到色谱图，记录峰面积及　２结果与分析　保留时间，并计算标准曲线的线性关系和相关系数。　２．１相关系数　１．２．４血浆药浓度的测定　在选定的色谱条件和参数下，进样量为２０　，得到相关　１．２．４．１　试验动物给药　给药前称体重，计算给药量，　标准曲线的回归方程为：Ｙ＝０．２５＋１２０．１ｘ，相关系数ｒ＝　１０　ｍｇ／ｋｇ，编号，肌注，自由饮水和采食。　０．９９９　７，　代表浓度，Ｙ代表面积，当恩诺沙星浓度为０．０５—　１．２．４．２样本的采集保定人员将试验猪仰卧保定，给药前　２０　ｇ／ｍＬ时线性关系良好。　从前腔静脉采集空白血样。恩诺沙星注射液肌肉给药后　２．２检测血药浓度的变化　５　ｍｉｎ　１０　ｍｉｎ　１５　ｍｉｎ、３０　ｍｉｎ、１　ｈ　２　ｈ、４　ｈ、６　ｈ　８　ｈ、１０　ｈ１１２　ｈ１　猪肌肉注射给药在不同的时间点采集血液，血药浓度实　１６　ｈ、２４　ｈ、３６　ｈ、４８　ｈ采血。每次采血１０　ｍＬ，加入相应的肝素　测值见表２。从表２可以看出，在ｌ８组的配方中，配方５在不　钠，经低温高速离心机１０　０００　ｒ／ｒａｉｎ离心１０　ｍｉｎ，取上层血浆　同的时间点测出血药浓度值较高，这也说明配方５比其他组　（于一２Ｏ℃保存）。　配方较优，为此在生产中选择配方５作为生产配方。　１．２．４．３液相前准备精取８００　ＩＬＬ不同采样点的血浆，加　２．３猪肌肉注射恩诺沙星注射液的药动力学参数　入流动相溶液２００　，涡旋２　ｍｉｎ，１２　０００　ｒ／ｒａｉｎ离心１５　ｍｉｎ，　将所检测的血药浓度数据输入药代动力学数据处理程序　取上清液２Ｏ　Ｌ注入色谱系统进行分析，色谱条件：Ｃ　。不锈　员中，计算机自动选择最佳模型为一级吸收二室开放模型，其　钢柱，柱温３０℃，检测波长２７８　ｎｍ，流速０．７　ｍＬ／ｍｉｎ，检测范　参数见表３。由表３可以看出，由配方５制成的恩诺沙星注　围０．０５—２０　ｇ／ｍＬ。用其测得的峰面积在标准曲线上进行　射液在猪体内的药代动力学参数为：消除半衰期（９．８２１士　多点外标法校准，得其血浆长效恩诺沙星的浓度。　２．２５６）ｈ、最大浓度（３．０３２±０．１５２）￣ｇ／ｍＬ、药时曲线下面积　１．２．５数据处理本试验采用ＭＣＰＫＰ药代学数据处理程　（１９．８６５±１．８７６）（ｍｇ・ｈ）／Ｌ，主要指标都比其他配方优越，　序，自由选择最佳模型，符合一级吸收二室开放模型，计算出　而且达到血药峰浓度的时间比其他配方短，说明该配方可以在　药动力学参数。　短时间达到血药浓度，且可以维持较长时间的有效血药浓度。　表２不同时　点血药浓度　０．７５±０．１８　０．４３±０．０２　Ｏ．３８±Ｏ．０９　Ｏ．２６±Ｏ．０３　０．１１±０．０２　Ｏ．０５±Ｏ．Ｏ３　０．７２±Ｏ．１６　０．４６　４－０．ｏ５　Ｏ．３２±０．０６　Ｏ．２２±０．０４　Ｏ．１３±Ｏ．Ｏ１　Ｏ．Ｏ６±Ｏ．０２　０．８２±Ｏ．１２　Ｏ．５Ｏ±Ｏ．１Ｏ　Ｏ．３５±０．０７　Ｏ．２４±０．０５　０．１２±０．Ｏ３　０．０５±０．０４　Ｏ．９６±Ｏ．１５　０．５９±０．Ｏ６　０．４０±０．０６　０．２８±０．０９　０．１７±０．０５　０．０９±０．０５　０．０４±０．０３　１．１２±０．１１　Ｏ．６３±Ｏ．ｏ９　０．４５±０．１２　Ｏ．３５±０．Ｏ８　Ｏ．２３±Ｏ．ｏ６　０．１３±０．０３　０．０７±０．０２　Ｏ．９５±０．１２　０．５７±Ｏ．０８　０．４３±０．１Ｏ　Ｏ．３１　４－０．ｏ５　０．１９土０．０７　０．１０±０．０４　０．０５±０．０４　０．７３±０．１３　０．４６±０．０６　Ｏ．３２±Ｏ．０６　０．２１±０．０６　０．１５±０．ｏ６　０．０７±０．０５　０．０４±０．０２　０．７５±０．１１　０．４３±０．０８　０．３５±０．０８　０．２４±０．Ｏ５　Ｏ．１４±Ｏ．０２　０．０６±０．０１　０．０３±０．０１　Ｏ．９１±Ｏ．１８　０．５４±０．０９　０．３８±Ｏ．０５　０．２６±Ｏ．０６　０．１２±０．０４　０．０５±０．０２　一１８８一　江苏农业科学２０１２年第４０卷第７期　究［Ｊ］．精细石油化工进展，２００５，６（１１）：３７—４２．　３结论　［２］王玉成，王秀云，郭慧元，等．近年我国喹诺酮类抗菌剂的研究进　展［Ｊ］．中国医药工业杂志，２００４，３５（３）：１７９—１８５．　由表２、表３可以看出，配方５在４８　ｈ还可以检出血药浓　度，比其他配方检出的血药浓度高，而且达峰时间较其他配方　短，峰高浓度比其他配方的浓度高，药时曲线下面积较其他配　方高。这充分说明配方５是最佳的，在临床应用上可以起缓　释长效的作用。　根据试验结果检出的血药浓度，经过ＭＣＰＫＰ药代学数　［３］龟田邦明，八木泽守正．抗生素——生产的科学［Ｍ］．王金南，　译．北京：中国医药科技出版社，１９９９，１９３．　［４］Ｍｉｙａｍｏｔｏ　Ｔ，Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ　Ｊ，Ｃｈｉｂａ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ｓｙｍｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ—　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｏｆ　５一ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ　６，８一ｄｉｌｆｕｏｍｑｕｉｎｏｌｏｎｅｓ，ｉｎｃｌｕ。　ｃｌｉｎｇ　ｓｐａｒｌｆｏｘａｅｉｎ，ａ　ｎｅｗ　ｑｕｉｎｏｌｏｎｃ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｇｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　据处理程序得出肌内注射半衰期为（９．８２１±２．２５６）ｈ，比曾　振灵等报道的半衰期高　】，说明恩诺沙星的消除比较缓慢，　在体内存留时间较长，这可能由于药物吸收缓慢，在消除相内　有药物持续吸收，从而导致消除半衰期延长，使恩诺沙星注射　ｐｏｔｅｎｃｙ［Ｊ］．Ｊ　Ｍｅｄ　Ｃｈｅｍ，１９９０，３３（６）：１６４５—１６５６．　［５］ＭｃＧｕｉｒｋ　Ｐ　Ｒ，Ｊｅｆｓｏｎ　Ｍ　Ｒ，Ｍａｎｎ　Ｄ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｎｄ　ａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　—ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ　ｏｆ　７一ｄｉａｚａｂｉｃｙｃｌｏａｌｋｙｌｑｕｉｎｏｌｏｎｅ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｄａｎｏｆｌｏｘａｃｉｎ，ａ　ｎｅｗ　ｑｕｉｎｏｌｏｎｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｇｅｎｔ　ｆｏｒ　ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　ｍｅｄｉ－　ｃｉｎｅ［Ｊ］．Ｊ　Ｍｅｄ　Ｃｈｅｍ，１９９２，３５（４）：６１１—６２０．　［６］王素芳，向东丽．喹诺酮类药物的研究进展［Ｊ］．中外医疗，　２００９，２８（１１）：１２０．　液起长效的作用。说明复合缓释剂和稳定剂比单一的效果　好，但是配方中各种物质的配合比例要合适，才能起显著的效　果，使用复合剂可以有效减缓药物的吸收速度，在消除时还有　部分药物被持续吸收，同时使药物在体内分布均匀，范围更　广，达到更好的治疗效果。自问世以来，喹诺酮类药物在临床　［７］戴述诚．兽用喹诺酮类药物发展动态［Ｊ］．中国兽药杂志，２００２，　３６（８）：２５—２７．　［８］曾振灵，冯淇辉．恩诺沙星在猪体内的生物利用度及药物动力学　研究［Ｊ］．中国兽医学报，１９９６，１６（６）：６０６—６１２．　［９］郭娇娇，宫智勇．恩诺沙星在水产养殖中的研究进展［Ｊ］．江苏　农业科学，２０１１，３９（４）：２９０—２９２．　［１０］吴曙霞．氟喹诺酮类原料药前景与况争分析［Ｊ］．精细与专用化　学品，２００５，１３（２）：１—３，１７．　上的疗效、良好的性质和占优势的疗效／价格获得了广泛使用　和认可，具有广阔的发展前景　参考文献：　［１］陈磊，高忠良，刘雁，等．喹诺酮类药物母环的衍变及合成研　。