生物技术综合实验——淀粉酶产生菌的初步筛选

一、实验目的

学习从自然界中筛选分离淀粉酶产生菌株。 二、实验内容

淀粉酶产生菌的筛选和分离。 三、实验原理

在筛选培养基平板上，可溶性淀粉被目的菌株产生的淀粉酶水解，形成透明圈。不同种类的微生物产生的淀粉酶的种类和活力各不相同，对可溶性淀粉的水解能力各不相同，所形成的水解圈与菌落大小比值故而不同，因而根据其比值可初步断定其对可溶性淀粉的水解能力。许多细菌和霉菌产生淀粉酶，特别是一些芽孢杆菌，因此，本实验将土壤样品加热处理后，将其接种到筛选培养基平板进行培养，根据平板的水解圈做初筛，从中筛选出产淀粉酶活性较好的菌株进行保藏。 四、实验材料和用具 1、材料：土壤样品

2、试剂：牛肉膏蛋白胨筛选培养基平板（含可溶性淀粉1%）、45mL无菌水瓶

3、仪器及用具：恒温培养箱、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、摇床、酒精灯、牙签、移液枪、试管、涂布器、量筒等。 五、操作步骤 （一） 准备材料

1、筛选固体培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入可溶性淀粉（1%），配制600mL，制备30个平板。

2、含45mL水的三角瓶5瓶，200ul枪头及枪头盒3盒，牙签3瓶，涂布器3包，灭菌处理。

（二） 菌种分离

1、土壤采集

选取采集地点地表植被根系周围的土壤，首先去除地表浮土，然后挖取2-5cm深的土壤样品，每个样品约取20g土壤，装入塑料袋内，备用。 2、制备菌悬液

取5g土壤样品置于含45ml无菌水的三角瓶中，用振荡器震荡10分钟，在90度水浴锅中处理15分钟。

3、涂布平板培养与分离

吸取100ul悬浮液，用涂布器涂布于筛选培养基平板，待液体充分被吸收后，置于37℃培养箱中培养48h。每组做2个平板。 （三）菌种初步筛选

在平板中加入少量卢戈氏碘液，观察菌落形成透明水解圈情况，用无菌牙签挑取产水解圈的菌落，转接到新的筛选培养基中，每个平板上接种16个菌种，每组接种2个平板，置于37℃培养24h。在平板内加入卢戈氏碘液，根据单菌落透明圈直径与菌落直径比值(H/C)大小进行初筛，选择水解圈直径与菌落直径比值大的菌株，从中选取淀粉酶活力相对较高的菌株。

（四）菌种保藏

将筛选出来产淀粉酶活性较强的菌株转接到牛肉膏蛋白胨培养基平板上，37℃培养24h，然后置于4度冰箱保藏。

六、实验结果与分析

1、菌株的分离

从筛选培养基上筛选出若干个产透明水解圈的菌落。 2、菌株的筛选

将分离到的菌株分别接种到筛选培养基上，置于37℃培养24h，加入卢戈氏碘液，观察菌落水解圈情况，将结果记录在下表： 菌株编号 1 2 3 4 5 6 H/C 3、每组选择一株产蛋白酶活性最高的菌株进行菌种保藏。

4、将实验的相关相片粘贴在此处并做说明。

7 8 9 组员签字： 时间：