微生物实验思考题
1、 用油镜观察时应该注意哪些问题？在载破片和镜头之间加滴什么油？起什么作用？ 答：应该先用擦镜纸将镜头擦干净,以防上次实验的污染.操作时,先低倍再高倍.用完要擦掉
油.
加滴香柏油。作用：增加,也就是增加了显微镜的分辨率.
2、 根据实验体会，谈谈应如何根据所观察微生物的大小，选择不同的物镜进行有效的观察。 答：细菌用油镜,真菌用高倍镜.都是先用低倍镜找到目标后,再用高倍镜调到合适的视野和合
适的清晰度. 放线菌、酵母菌、多细胞真菌相对较大，用放大 40 倍的物镜就可以看了，细菌小， 要用放大 1000 倍的物镜看，感觉还很小。病毒那就要用电子显微镜看了。
3、 哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？ 答：涂片环节、加热固定环节、脱色环节；其中最关键的环节是脱色环节。
4、 进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题？ 答：着色不均，染色效果不好。阴性阳性不明显分不太清楚,问题是：不便于显微镜下观察 是阳性菌还是阴性菌。
5、革兰氏染色时，初染前能加碘液吗?乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌 应分别是什么颜色?
答：不可以。因为碘与染料会结合成大分子，使得染料分子不能穿过细胞的细胞壁，对实验结果造成影响。脱色后复染前，革兰氏阳性菌呈紫色，阴性菌无色。
6、不经过复染这一步，能否区别革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌？
答：不行。在复染之前，革兰氏阴性菌是无色透明的，在显微镜下很难观察到；或者脱色过度，也会造成阳性菌脱色，不经过复染，无法进一步区别。 6
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7、你认为制备细菌染色标本时,应该注意哪些环节? 答: 1制备适宜的培养基
2在超净工作台上进行,保持无菌环境 3对培养基,接种环等物品的高温高压灭菌. 4倒置培养基,防止冷凝水内流
8. 为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察?
答:1、若未完全干燥,载玻片上的液体会污染油镜镜头。镜头非常精密,被污染后不利于下次观察；2、若未完全干燥，水滴会影响油与玻璃之间折光率，造成视野不够清晰。
9. 如果涂片未以热固定,将会出现什么问题?加热温度过高、时间太长，又会怎么样呢？ 答:如果没有加热固定的话，水分蒸发太慢或者在染色时菌体会被冲洗掉； 如果加热时间过久，菌体变形或形态破坏，无法染色。
10. 制备培养基的一般程序是什么？
答：称量——溶解—调 PH 值—融化琼脂—过滤分装—包扎标记——灭菌——倒平板
11. 做过本次实验后，你认为在制备培养基时要注意些什么问题？
答：溶解配料的水要适量；PH 要调到 左右；要小心手提式高压锅的使用；倒平板时要 防止培养基被污染
12. 灭菌在微生物学实验操作中有何重要意义？ 答：防止培养基被污染；防止杂菌影响实验结果
13. 试述高压蒸汽灭菌的操作方法和原理。
答：高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的 6
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沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在 的压力下，锅内温度达 121℃。在此蒸 汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。 操作方法：加水——装料、加盖——排气——升压、保压、和降压——取料
14. 高压蒸汽灭菌时应注意哪些事项？
答：第一，无菌包不宜过大，不宜过紧，各包裹间要有间隙，使蒸汽能对流易渗透到包裹 中央。第二，布类物品应放在金属类物品上，否则蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮。阻碍蒸 汽进入包裹中央，严重影响灭菌效果。第三，定期检查灭菌效果。
15. 试述如何在接种中，贯彻无菌操作的原则?
答：保持操作台的无菌状态与在无菌室操作；操作前，要进行手的消毒；接种环要加热灭 菌；接种物品要标记。
16. 以斜面上的菌种接种到新的斜面培养基为例说明操作方法和注意事项。
答：在接种箱或者超净工作台上.将母种经过消毒处理以后,在酒精灯火焰区上方打开棉塞.用接种针挑取一小块菌丝体,接入新的试管培养基上即可.
17.试设计一个实验，从土壤中分离酵母菌并进行计数。 答：无标准答案。
18.在酵母菌死活细胞的观察中，使用美蓝液有什么作用？ 答：区别死活细胞。
19.为何要用乳酸-石碳酸溶液作霉菌水浸片？
答：用乳酸-石炭酸的优点是可使细胞不变形，具有杀菌、防腐作用；不易干燥，能保持较 长时间；能防止孢子四处飞散。 6
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20.细菌与霉菌的菌落有何区别？
答：细菌菌落光滑，易于基质脱离；霉菌菌落较大、菌丝细长,菌落疏松,呈绒毛状、蜘蛛网状、棉絮状,无固定大小,多有光泽,不易挑。
21.如何区分霉菌与放线菌的菌落？什么是扩展性菌落？
答：霉菌的菌落形态较大,质地一般比放线菌疏松,细胞分化明显 菌丝粗壮 有核 菌落边缘有粗丝状细胞 生长快 有霉味。而霉菌往往形成复杂的孢子囊孢子梗等结构。 放线菌菌落小 菌丝细而均匀 菌落边缘可见细丝状细胞 有泥腥味，放线菌的分生孢子形态结构简单。
扩展性菌落：就是原本培养的细菌由于发生扩散,形成的一些非预期的菌落,通常这些菌落会影响正常实验观察,可以用药物抑制.
22. 能否用血球计数板在油镜下进行计数？为什么？
答：不能。计数时滴在血球计数板上的是菌悬液，相当于在镜头和计数板直接加了一层水。 水层会降低视野的亮度和显微镜的分辨率，造成菌体和网格线不清晰。
23. 根据自己体会，说明血球计数板计数的误差主要来自那些方面？如何减少误差？ 答：误差主要来自试剂误差、方法误差、仪器误差；减少误差有保持样品的纯净、细胞溶液必须震荡均匀、样品浓度要适中、血球计数板要整洁清晰。
24. 菌种保藏中，石蜡油的作用是什么？
答：作用是密封。防止空气进入，降低菌种的生理活性。 6
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25. 经常使用的细菌菌株，使用哪种保藏方法比较好？
答： 用甘油冷冻保藏方法保存， 在液体培养基中加入百分子十五的甘油， 然后低温冷冻 （-7 度）左右。
26. 食品检验为什么要测定细菌菌落总数？
答：测定细菌菌落总数是检验食品纯度程度的指标。也是判断其保存能力的指标。
27. 实验操作如何使数据可靠?
答：1、向平皿倾注液体时,平皿仅微微开启即可；
2、检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min. 3、培养液和检液在培养皿内要摇匀；
4、培养液倾注培养皿时温度要在45摄氏度,以免烫死菌落.
28. 食品中检出的菌落总数是否代表该食品上的所有细菌数？为什么？
答：不能代表该食品上所有细菌数。因为在实验过程中会造成细菌的损失或死亡、食品上 的细菌包括了各种各样的微生物。
29.为什么营养琼脂培养基在使用前要保持在（46±1）℃的温度？
答：营养琼脂是用来做菌落总数项目的,如果太热就会将细菌烫死,而太冷则琼脂还没倒就凝固了（凝固点大约在40度）。
30. 大肠菌群检验中为什么首先要用乳糖胆盐发酵管？
答：因为乳糖胆盐发酵管中的成分有溴甲酚紫，中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果颜 色不变（呈蓝紫色），说明无产酸的大肠菌群；如果颜色变黄色，说明可能出现能分解乳糖产 酸的大肠菌群；胆盐可以抑制其它细菌生长繁殖；看杜氏小管中是否有气体，判断是否为分解 乳糖产酸产气的大肠菌群。 6
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31. 做空白对照实验的目的?
答：目的是检验培养基是否受到污染，验证无菌操作。
32. 为什么大肠菌群的检验要经过复发酵才能证实
答：初发酵是样品的发酵结果，不是大肠菌群纯菌的发酵试验，有可能受其它杂菌影响判 断结果。进行证实试验避免假阳性结果。
33. 复发酵为什么使用乳糖发酵管但不需加胆盐?
答：胆盐能抑制革兰氏阳性菌等杂菌生长.在初发酵，培养基已经加入胆盐抑制革兰氏阳性
菌生长，并在 EMB 培养基上进行分离培养，因此复发酵培养时无需乳糖发酵管，以免大肠菌肠 受到抑制。
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