1
设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:
1.1 冰箱: 2℃~ 5℃。
1.2 恒温培养箱: 36℃±1℃, 42℃±1℃。 1.3 均质器。 1.4 振荡器。
1.5 电子天平:感量 0.1g。
1.6 无菌锥形瓶 :容量500ml, 250ml。
1.7 无菌吸管: 1ml(具0.01ml刻度)、 10ml(具0.1ml刻度)或微量移液器
及吸 头。
1.8 无菌培养皿:直径 90mm。
1.9 无菌试管: 3mm× 50mm、 10mm× 75mm。 1.10 无菌毛细管。
1.11 pH计或 pH比色管或精密 pH试纸。 1.12 全自动微生物生化鉴定系统。 2
培养基和试剂
2.1 缓冲蛋白胨水( BPW):见附录中 1。 2.2 四硫磺酸钠煌绿( TTB )增菌液:见附录中 2。 2.3 亚硒酸盐胱氨酸( SC)增菌液:见附录中 3。 2.4 亚硫酸铋( BS)琼脂:见附录中 4。 2.5 HE琼脂:见附录中 5。
2.6 木糖赖氨酸脱氧胆盐( XLD )琼脂:见附录中 6。 2.7 沙门氏菌属显色培养基。
2.8 三糖铁( TSI)琼脂:见附录中 7。
2.9 蛋白胨水、靛基质试剂:见附录中 8。 2.10 尿素琼脂( pH7.2):见附录中 9。 2.11 氰化钾( KCN )培养基:见附录中 10。 2.12 赖氨酸脱羧酶试验培 养基: 见附录中 11。
2.13 糖发酵管:见附录中 12。
2.14 邻硝基酚 β-D 半乳糖苷( ONPG)培养基:见附录中 13。 2.15 半固体琼脂:见附录中 14。 2.16 丙二酸钠培养基:见附录中 15。 2.17 沙门氏菌 O和 H诊断血清。 2.18 生化鉴定试剂盒。 3 操作方法 3.1 试验前准备
3.1.1 将供试品及所有已灭菌的平皿、 锥形瓶、匀浆杯、试管、 量筒、吸管(1ml、 10ml)、稀释剂等移至操作室内。准备好足够用量,避免操作中出入操作间。 3.1.2 开启无菌室紫外杀菌灯和洁净工作台的空气过滤装置 30min。
3.1.3 操作人员用肥皂洗手,关闭紫外杀菌灯,进入缓冲间,换工作鞋,用消毒
液洗手或用乙醇棉球擦手,穿戴好无菌衣、帽、口罩、手套等。
3.1.4 操作前先用乙醇棉球擦手、工作台面,再用乙醇棉球擦拭供试品瓶、盒、
袋等的开口处周围,待干后用灭菌剪刀或镊子将供试品启封。
3.2 前增菌
称取25g(ml)样品放入盛有 225ml BPW的无菌均质杯中,以 8000r/min~
10000r/min均质1min ~2min,或置于盛有 225ml BPW的无菌均质袋中,用拍击
式 均质器拍打 1min~2min。若样品为液态,不需要均质,振荡混匀。如需测定 pH 值,用 1mol/ml 无菌NaOH或HCl调pH至6.8±0.2。无菌操作将样品转至 500ml锥形 瓶中,如使用均质袋,可直接进行培养,于 36℃±1℃培养8 h~
18h。如为冷冻产 品,应在45℃以下不超过 15min,或2℃~ 5℃不超过 18h解冻。 3.3 增菌
轻轻摇动培养过的样品混合物,移取 1ml,转种于 10ml TTB 内,于42℃±1℃
培养18 h~24h。同时,另取 1ml,转种于10ml SC内,于36℃±1℃培养18h~
24h。 3.4 分离
分别用接种环取增菌液 1环,划线接种于一个 BS琼脂平板和一个 XLD 琼脂平 板(或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板)。于 36℃±1℃分别培养 18h~ 24h(XLD琼脂平板、 HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板)或 40h~48h
BS琼脂平板),观察各个平板上生长的菌落。各个平板上的菌落特征见表1
表 1 沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征
选择性琼脂平板 BS琼脂 沙门氏菌 菌落为黑色有金属光泽、 棕褐色或灰色, 菌落周围培养基可呈黑色或棕色; 有些菌株形成灰绿色的菌落,周围培养基不变。 蓝绿色或蓝色,多数菌落中心黑色或几乎全黑色;有些菌株为黄色,中心 黑色或几乎全黑色。 HE琼脂 XLD 琼脂 菌落呈粉红色,带或不带黑色中心,有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中 心,或呈现全部黑色的菌落;有些菌株为黄色菌落,带或不带黑色中心。 按照显色培养基的说明进行判定。 沙门氏菌属显色培养基 3.5 生化试验
3.5.1 自选择性琼脂平板上分别挑取 2个以上典型或可疑菌落,接种三糖铁琼脂,
先在斜面划线,再于底层穿刺;接种针不要灭菌 ,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培 养基和营养琼脂平板,于 36℃±1℃培养 18h~24h,必要时可延长至 48h。在三糖 铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内,沙门氏菌属的反应结果见表 2。
表 2 沙门氏菌属在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内的反应结果
三糖铁琼脂 斜面 K K A A K 底层 A A A A K 产气 +(-) +(-) +(-) +/- +/- 硫化氢 +(-) +(-) +(-) +/- +/- 赖氨酸脱羧酶试验培养基 + - + - +/- 初步判断 可疑沙门氏菌属 可疑沙门氏菌属 可疑沙门氏菌属 非沙门氏菌 非沙门氏菌 注: K:产碱, A:产酸,+:阳性,-:阴性;+ (-)多数阳性,少数阴性;+ /-:阳性或阴性。 3.5.2 接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时 ,可直接接种蛋白胨水
(供做靛基质试验)、尿素琼脂( pH7.2)、氰化钾( KCN )培养基,也可在初 步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于 36℃±1℃培养 18h~
24h, 必要时可延长至 48h,按表3判定结果。 将已挑菌落的平板储存于 2℃~ 5℃或室温 至少保留 24h,以备必要时复查。
表3 沙门氏菌属生化反应初步鉴别表
反应序 号 A1 A2 A3 靛基质 硫化氢( H2S) + + - pH7.2 尿素 氰化钾( KCN ) - - - 赖氨酸脱羧酶 + + +/- - + - - - - 注:+:阳性,-:阴性,+ /-:阳性或阴性。 3.5.2.1 反应序号 A1:典型反应判定为沙门氏菌属。 如尿素、 KCN 和赖氨酸
脱羧 酶3 项中有 1项异常,按表 4可判定为沙门氏菌。如有 2项异常为非沙门氏菌。
表 4 沙门氏菌属生化反应初步鉴别表
pH7.2 尿素 氰化钾( KCN ) - 赖氨酸脱羧酶 - 判定结果 甲型副伤寒沙门氏菌(要求血清学鉴定结 果) - - + + 沙门氏菌 IV 或 V (要求符合本群生化特 性) 沙门氏菌个别变体(要求血清学鉴定结 果) + 注:+:阳性,-:阴性。 - + 3.5.2.2 反应序号 A2:补做甘露醇和山梨醇试验,沙门氏菌靛基质阳性变体两项
试验结果均为阳性,但需要结合血清学鉴定结果进行判定。
3.5.2.3 反应序号 A3:补做ONPG。ONPG 阴性为沙门氏菌,同时赖氨酸脱羧酶
阳性。甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。
3.5.2.4 必要时按表 5 进行沙门氏菌生化群的鉴别。
表 5 沙门氏菌属各生化群的鉴别
项目 卫矛醇 山梨醇 水杨苷 ONPG I II III IV V VI + + - - - - + + - - + - - + - + + - - + + - - + + + - + - + - - - - - - 丙二酸盐 KCN 注:+:阳性,-:阴性。 3.5.3 如选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统,可根据 3.5.1的初
步 判断结果, 从营养琼脂平板上挑取可疑菌落, 用生理盐水制备成浊度适当的菌悬 液,使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。
3.6 血清学鉴定 3.6.1 抗原的准备
一般采用 1.2%~ 1.5%琼脂培养物作为玻片凝集试验用的抗原。 O血清不凝 集时,将菌株接种在琼脂量较高的(如 2%~ 3%)培养基上再检查;如果是由于 Vi 抗原的存在而阻止了 O凝集反应时,可挑取菌苔于 1ml生理盐水
中做成浓菌 液,于酒精灯火焰上煮沸后再检查。 H 抗原发育不良时,将菌株接种在 0.55%~
0.65%半固体琼脂平板的中央,俟菌落蔓延生长时,在其边缘部分取菌检查;或
将菌株通过装有 0.3%~ 0.4%半固体琼脂的小玻管 1 次~ 2次,自远端取菌培养后 再检查。
3.6.2 多价菌体抗原( O)鉴定
在玻片上划出 2个约 1cm×2cm的区域,挑取 1环待测菌,各放 1/2环于玻片上 的每一区域上部,在其中一个区域下部加 1滴多价菌体( O)抗血清,在另一区 域下部加入 1滴生理盐水,作为对照。再用无菌的接种环或针分别将两个区域内 的菌落研成乳状液。将玻片倾斜摇动混合 1 min,并对着黑暗背景进行观察,任 何程度的凝集现象皆为阳性反应。
3.6.3 多价鞭毛抗原( H)鉴定同 3.6.2。 3.7 结果与报告
综合以上生化试验和血清学鉴定的结果,报告 25g(ml )样品中检出或未检 出沙门氏菌。
附录 培养基和试
1 缓冲蛋白胨水( BPW ) 剂
1.1 成分 蛋白胨 氯化钠
磷酸二氢钾 蒸馏水
1.5g 10.0g 7.2 1000ml 5.0g ±0.2 9.0g
pH
1.2 制法 (含 磷酸氢二钠12 个结晶水)
将各成分加入蒸馏水中,搅混均匀,静置约 10 min,煮沸溶解,调节 pH,
高 压灭菌 121 ℃,15min。
2 2.1 pH
四硫磺酸钠煌绿( TTB )增菌液
基础液 蛋白胨 牛肉膏 氯化钠 碳酸钙 蒸馏水
10.0g 5.0g 3.0g 45.0g 1000ml 7.0 ±0.2
除碳酸钙外,将各成分加入蒸馏水中,煮沸溶解,再加入碳酸钙,调节 pH,高 压灭菌121℃, 20 min。
2.2
2.3
硫代硫酸钠溶液
硫代硫酸钠(含 5个结晶水)
50.0g
蒸馏水
高压灭菌 121℃, 20 min。
碘溶液
加至100ml
碘片 碘化钾
20.0g 25.0 g
蒸馏水 加至100 ml
将碘化钾充分溶解于少量的蒸馏水中, 再投入碘片, 振摇玻瓶至碘片全部溶解为
止,然后加蒸馏水至规定的总贮存于棕色瓶内,塞紧瓶盖备用。 量,
2.4 0.5%煌绿水溶液 煌绿
0.5g 蒸馏水
100ml
溶解后,存放暗处,不少于 使其自然灭菌。
1d,
2.5 牛胆盐溶液 牛胆盐
10.0g 蒸馏水
100ml
加热煮沸至完全溶解,高压灭121 菌
℃, 20min。 2.6 基础液制法
900ml 硫代硫酸钠溶液 100ml 碘溶液 20.0ml 煌绿水溶液 2.0ml 牛胆盐溶液
50.0ml
临用前,按上列顺序,以无菌操作依次加入基础液中,每加入一种成分,均应摇 匀后再加入另一种成分。
3 亚硒酸盐胱氨酸( SC)增菌液 3.1 成分
蛋白胨 5.0g 乳糖 4.0g 磷酸氢二钠 10.0g 亚硒酸氢钠
4.0g L-胱氨酸
0.01g 蒸馏水
1000ml
pH
7.0 ±0.2
3.2 制法
除亚硒酸氢钠和 L-胱氨酸外,将各成分加入蒸馏水中,煮沸溶解,冷至 55℃ 以下,以无菌操作加入亚硒酸氢钠和 1g/L L-胱氨酸溶液 10m(l 称取0.1g L-胱氨酸, 加1mol/L氢氧化钠溶液 15ml,使溶解,再加无菌蒸馏水至 100ml 即成,如为 DL-
4 亚硫酸铋( BS )琼
脂
4.1 成分 蛋白胨 牛肉
10.0g 5.0g 5.0g 0.3g 4.0g
0.025g或5.0g/L水溶液
5.0ml 2.0g 6.0g
膏 葡萄糖 硫酸亚铁 磷酸氢二钠 煌绿 柠檬酸铋铵 亚硫酸钠
胱氨酸,用量应加倍)。摇匀,调节 pH。
琼脂 蒸馏水
pH 4.2 制法
18.0g~20g 1000ml 7.5 ±0.2
将前三种成分加入 300 ml 蒸馏水(制作基础液),硫酸亚铁和磷酸氢二钠 分别加入 20ml和 30ml蒸馏水中,柠檬酸铋铵和亚硫酸钠分别加入另一 20ml和 30ml蒸馏水中,琼脂加入 600ml蒸馏水中。然后分别搅拌均匀,煮沸溶解。冷至 80 ℃左右时,先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀,倒入基础液中,混匀。将柠檬 酸铋铵和亚硫酸钠混匀,倒入基础液中,再混匀。调节 pH,随即倾入琼脂液中, 混合均匀,冷至 50℃~ 55℃。加入煌绿溶液,充分混匀后立即倾注平皿。 注:本培养基不需要高压灭菌, 在制备过程中不宜过分加热, 避免降低其选择性, 贮于室温暗处,超过 48h会降低其选择性,本培养基宜于当天制备, 第二天使用 5 HE 琼脂( Hektoen Enteric Agar)
5.1 成分
蛋白胨
12.0g
牛肉膏 乳糖
3.0g 12.0g
蔗糖
12.0g
水杨素 胆盐
2 .0g 20.0g
氯化钠
5.0g 18.0g~20.0g 1 000ml 16.0ml
琼脂 蒸馏水
0.4%溴麝香草酚蓝溶液 Andrade 指示剂
20.0ml
甲液 乙液
20.0ml 20.0ml
pH 5.2 制法
7.5 ±0.2
将前面七种成分溶解于 400 ml 蒸馏水内作为基础液 ;将琼脂加入于 600 ml 蒸馏水内。然后分别搅拌均匀,煮沸溶解。加入甲液和乙液于基础液内 ,调节 pH。 再加入指示剂 ,并与琼脂液合并 ,待冷至 50℃~ 55℃倾注平皿。
注:①本培养基不需要高压灭菌,在制备过程中不宜过分加热,避免降低其选择 性。
② 甲液的配制
硫代硫酸钠 柠檬酸铁铵 蒸馏水 ③ 乙液的配制 去氧胆酸钠 蒸馏水
④ Andrade指示剂 酸性复红
1mol/L 氢氧化钠溶液
34.0g 4.0g 100ml
10.0g 100ml
0.5g 16.0ml 100ml
蒸馏水
将复红溶解于蒸馏水中 ,加入氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全 ,再加氢氧 化钠溶液 1ml ~2ml。
6 木糖赖氨酸脱氧胆盐( XLD )琼脂 6.1 成分
酵母膏
L-赖氨酸
3.0g 5.0g 3.75g 7.5g 7.5g 2.5g 0.8g 6.8g 5.0g 15.0g 0.08g 1 000ml 7.4 ±0.2
木糖 乳糖 蔗糖 去氧胆酸钠 柠檬酸铁铵 硫代硫酸钠 氯化钠 琼脂 酚红 蒸馏水
pH
6.2 制法
除酚红和琼脂外,将其他成分加入 400ml蒸馏水中,煮沸溶解,调节 pH。
另
将琼脂加入 600ml蒸馏水中,煮沸溶解。将上述两溶液混合均匀后,再加入指示 剂,待冷至 50℃~ 55℃倾注平皿。
注:本培养基不需要高压灭菌,在制备过程中不宜过分加热,避免降低其选择性, 贮于室温暗处。本培养基宜于当天制备,第二天使用。
7 三糖铁( TSI )琼脂 7.1 成分
蛋白胨 牛肉膏 乳糖 蔗糖 葡萄糖
硫酸亚铁铵(含 6 个结晶水) 酚红 氯化钠 硫代硫酸钠 琼脂 蒸馏水
pH 7.2 制法
20.0g 5.0g 10.0g 10.0g 1.0g 0.2g
0.025g或5.0 g/L溶液5.0ml 5.0g 0.2g 12.0g 1000ml 7.4 ±0.2
除酚红和琼脂外,将其他成分加入 400ml蒸馏水中,煮沸溶解,调节 pH。另 将琼脂加入 600ml蒸馏水中,煮沸溶解。将上述两溶液混合均匀后,再加入指示 剂,混匀,分装试管,每管约 2ml~4ml,高压灭菌 121℃10 min 或 115℃
15min, 灭菌后置成高层斜面,呈桔红色。 8 蛋白胨水、靛基质试剂 8.1 蛋白胨水
蛋白胨(或胰蛋白胨) 氯化钠
20.0g 5.0g
蒸馏水
pH
1000ml 7.4 ±0.2
将上述成分加入蒸馏水中, 煮沸溶解,调节 pH,分装小试管 ,121℃高压灭菌
15min
8.2 靛基质试剂
8.2.1 柯凡克试剂: 将5g对二甲氨基甲醛溶解于 75ml戊醇中 ,然后缓慢加入
浓盐酸 25ml。
8.2.2 欧-波试剂:将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于 95ml95%乙醇内。 然后缓慢
加入 浓盐酸 20ml。
8.3 试验方法
挑取小量培养物接种 ,在36℃±1℃培养 1d~2d,必要时可培养 4d~5d。加入 柯凡克试剂约 0.5ml,轻摇试管 ,阳性者于试剂层呈深红色;或加入欧 -波试剂约 0.5ml,沿管壁流下,覆盖于培养液表面 ,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。 注:蛋白胨中应含有丰富的色氯酸。每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后 方可使用。
9 尿素琼脂( pH 7.2 ) 9.1 成分
蛋白胨 氯化钠
葡萄糖 磷酸二氢钾
1.0g 5.0g 1.0g 2.0g
0.4%酚红 琼脂 蒸馏
3.0ml 20.0g 1000ml 100ml 7.2 ±0.2
水
20%尿素溶液 pH 9.2 制法
除尿素、琼脂和酚红外,将其他成分加入 400ml 蒸馏水中,煮沸溶解,调
节 pH。另将琼脂加入 600 ml 蒸馏水中,煮沸溶解。将上述两溶液混合均匀后,再 加入指示剂后分装, 121℃高压灭菌 15min。冷至 50℃~ 55℃,加入经除菌过滤的 尿素溶液。尿素的最终浓度为 2%。分装于无菌试管内,放成斜面备用。
9.3 试验方法
挑取琼脂培养物接种 ,在36℃±1℃培养 24h,观察结果。尿素酶阳性者由于产
碱而使培养基变为红色。
10 氰化钾( KCN )培养基
10.1 成分
蛋白胨 氯化钠 磷酸二氢钾 磷酸氢二钠 蒸馏水
0.5%氰化钾 10.2 制法
10.0g 5.0g 0.225g 5.64g 1000ml 20.0ml
将除氰化钾以外的成分加入蒸馏水中,煮沸溶解,分装后 121℃高压灭菌
15min。放在冰箱内使其充分冷却。每 100ml 培养基加入 0.5%氰化钾溶液 2.0ml
(最后浓度为 1:10000),分装于无菌试管内 ,每管约 4ml,立刻用无菌橡皮塞塞紧 放在4℃冰箱内 ,至少可保存两个月。同时,将不加氰化钾的培养基作为对照培养 基 , 分装试管备用。
10.3 试验方法
将琼脂培养物接种于蛋白胨水内成为稀释菌液,挑取 1环接种于氰化钾 (KCN)培养基。并另挑取 1环接种于对照培养基。在 36℃±1℃培养1 d~2 d, 观察结果。如有细菌生长即为阳性 (不抑制) ,经2d细菌不生长为阴性 (抑制) 注 :氰化钾是剧毒药 ,使用时应小心,切勿沾染,以免中毒。夏天分装培养基应在 冰箱内进行。试验失败的主要原因是封口不严 ,氰化钾逐渐分解,产生氢氰酸气 体逸出,以致药物浓度降低,细菌生长,因而造成假阳性反应。试
验时对每一环 节都要特别注意。
11 赖氨酸脱羧酶试验培 养基 11.1 成分
蛋白胨 酵母浸膏 葡萄糖
5.0g 3.0g 1.0g
1.6%溴甲酚紫 -乙醇溶L-赖氨酸或 DL- 赖氨
1.0ml 1000ml
0.5g/100ml 或1.0g/100ml 6.8 ±0.2
蒸馏水
pH 11.2 制法
除赖氨酸以外的成分加热溶解后 ,分装每瓶 100ml,分别加入赖氨酸。 L- 赖氨 酸按 0.5%加入, DL-赖氨酸按1%加入。调节 pH。对照培养基不加赖氨酸。分 装于无菌的小试管内, 每管 0.5ml ,上面滴加一层液体石蜡, 115℃高压灭菌 10min。
11.3 试验方法
从琼脂斜面上挑取培养物接种, 于36℃±1℃培养 18h~24h,观察结果。 氨基 酸脱羧酶阳性者由于产碱,培养基应呈紫色。 阴性者无碱性产物, 但因葡萄糖产 酸而使培养基变为黄色。对照管应为黄色。
12 糖发酵管 12.1 成分
牛肉膏 蛋白胨 氯化钠
5.0g 10.0g 3.0g
磷酸氢二钠(含 12个结晶水) 2.0g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液
12.0ml 1000ml 7.4 ±0.2
蒸馏水
pH 12.2 制法
12.2.1 葡萄糖发酵管按上述成分配好后,调节 pH。按 0.5%加入葡萄糖,分装
于 有一个倒置小管的小试管内, 121℃高压灭菌 15min。
12.2.2 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后 ,分装每瓶 100ml,121℃高压灭
菌 15min。另将各种糖类分别配好 10%溶液,同时高压灭菌。将 5ml糖溶液加入于 100ml培养基内,以无菌操作分装小试管。
注:蔗糖不纯 ,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌。
12.3 试验方法 :从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于 36℃±1℃培养,一般2d~
3d。迟缓反应需观察 14d~30d。 13 ONPG 培养基 13.1 成分
邻硝基酚 β-D半乳糖苷( ONPG) 60.0mg
0.01mol/L 磷酸钠缓冲液( pH7.5) 10.0ml 1%蛋白胨水( pH7.5)
30.0ml
13.2 制法 将ONPG溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于无
菌的小试 管内,每管 0.5ml,用橡皮塞塞紧。
13.3 试验方法 自琼脂斜面上挑取培养物 1 满环接种于 36℃±1℃培养 1h~3h
和24h 观察结
果。如果 β-半乳糖苷酶产生,则于 1h~3h 变黄色,如无此酶则 24h不变色。
14 半固体琼脂 14.1 成分
牛肉膏 蛋白胨 氯化钠 琼脂 蒸馏水
pH 14.2 制法
0.3g 1.0g 0.5g 0.35g~0.4g 100ml 7.4 ±0.2
按以上成分配好 ,煮沸溶解 ,调节 pH。分装小试管。 121℃高压灭菌 15min。直 立凝固备用。注 :供动力观察、菌种保存、 H抗原位相变异试验等用。
15 丙二酸钠培养基 15.1 成分
酵母浸膏 硫酸铵 磷酸氢二钾 磷酸1.0g 二氢钾
2.0g 0.6g 0.4g
氯化钠 丙二酸钠
0.2%溴麝香草酚蓝溶液
2.0g 3.0g 12.0ml 1000ml 6.8 ±0.2
蒸馏水
pH
15.2 制法
除指示剂以外的成分溶解于水,调节 pH,再加入指示剂,分装试管, 121℃ 高压灭菌 15min。
15.3 试验方法 用新鲜的琼脂培养物接种,于 36℃±1℃培养 48h,观察结果。
阳性者由绿色 变为蓝色。
因篇幅问题不能全部显示,请点此查看更多更全内容