RP-HPLC法测定陕西产茜草中QA的含量

维普资讯 http://www.cqvip.com 第２７卷第３期　河南大学学报（医学版）　Ｖｏ１．２７　Ｎｏ．３　２００８年８月　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｅｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ）　Ａｕｇ．２００８　ＲＰ—ＨＰＬＣ法测定陕西产茜草中ＱＡ的含量　贺光东　，郅妙利　，王二辉　，康文艺　（１．河南大学天然药物研究所，河南开封４７５００４；２．河南大学药学院，河南开封４７５００４）　摘　要：目的：测定陕西产茜草中１，３，６－ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ－２一ｍｅｔｈｙｌａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ一３一Ｏ一３一［３－０一ａｃｅｔｙｌ—ｄ—Ｌ—ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ一（１　＿＋２　Ｄ—ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］的含量。方法：选用Ｐｕｒｏｓｐｈｅｒ　ｓｔａｒ　ＲＰ—ｃｌ８色谱柱（４．６　ｍｍ×２５０　ｍｍ，５　ｍ，Ｍｅｒｃｋ公司）；　流动相为甲醇朽四氢呋喃（６５：３４．７：０．３），流速为１．０　ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长为２７６　ｎｍ，柱温为２５￣Ｃ，外标法定量分析。　结幕：该方法在０．０２０　ｗｇ～０．１６０　ｗｇ范围内线性关系良好，ｒ＝０．９９９９，平均回收率１０１．４，ＲＳＤ＝２．０％（ｎ＝６），测　定结果为０．０５３％。结论：该法测定茜草中１，３，６－ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ一２一ｍｅｔｈｙｌａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ一３—０－３一［３－０一ａｃｅｔｙｌ—ｄ＿，Ｊ—　ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ一（１＿＋２　Ｄ一￣ｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］含量灵敏、准确、重现性好。　关键词：ＨＰＬＣ；ＱＡ；茜草根　中图分类号：Ｒ９３１．７１　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７２—７６０６（２００８）０３—００３５—０３　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＱＡ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｒｕｂｉａ．ｃｏｒｄｉｆｏｌｉａ　ｆｒｏｍ　Ｓｈａｎｘｉ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　ｂｙ　ＲＰ－ＨＰＬＣ　ＨＥ　Ｇｕａｎｇ—ｄｏｎｇ　一，ＺＨＩ　Ｍｉａｏ．１ｉ’一．　ＷＡＮＧ　Ｅｒ—ｈｕｉ　２　ＫＡＮＧ　Ｗｅｎ—ｙｉ　２　（１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｈｅｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋａｉｆｅｎｇ　４７５００４，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｈｅｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｍｉ＠，Ｋａｉｆｅｎｇ　４７５００４，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　１，３，６－ｔｉｆｈｙｄｒｏｘｙ－２一ｍｅｔｈｙｌａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ－３—０－３一【３－０一ａｃｅｔｙｌ—ｄ—Ｌ—ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ一（１　，２）一ｐ—Ｄ—ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ】ｉｎ　Ｒｕｂｉａ．ｅｏｒｄｉｆｏｌｉａ　ｆｒｏｍ　Ｓｈａｎｘｉ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　ｂｙ　ＲＰ．ＨＰＬＣ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ＨＰＬＣ　ｓｙｓｔｅｍ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ　ｏｆ　Ｐｕｒｏｓｐｈｅｒ　ｓｔａｒ　ＲＰ—Ｃｌ８　ｃｏｌｕｍｎ（４．６　ｍｍ×２５０　ｍｍ，５　ｍ，Ｍｅｒｃｋ）ａｔ　２５　ｏＣ，ＭｅＯＨ—Ｈ２Ｏ—ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｙｒａｎｅ　（６５：３４．７：０．３）ｍｉｘｔｕｒｅ　ａｓ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ，ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ａｔ　２７６　ｎｍ，ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｏｆ　１．０　ｍｌ／ｍｉｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　Ｗａｓ　ｆｏｕｎｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ０．０２０—０．１６０　ｗｇ，ｒ＝０．９９９９，ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　Ｗａｓ　１０１．４％，ＲＳＤ　ｗａｓ　２．０％ｆｎ　＝６）．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　１，３，６－ｔｉｆｈｙｄｒｏｘｙ－２一ｍｅｔｈｙｌａｎｔｈｍｑｕｉｎｏｎｅ一３—０—３一【３－０一ａｃｅｔｙｌ—ｄ—Ｌ—ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙ１．（１—＋２）．Ｂ—Ｄ．　ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ】ｉｎ　Ｒｕｂｉａ．ＣＯｒｄｉｆｏｌｉａ　ｆｒｏｍ　Ｓｈａｎｘｉ　ｐｒｏｖｉｎｃｅ　ｗａｓ　０．０５３％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ｈＴｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｒｅｌｉａｂｌｅ　ａｎｄ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　１，３，６－ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ－２一ｍｅｔｈｙｌａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ－．３—０－３一【３－０一ａｃｅｔｙｌ—ｄ—Ｌ—ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ一　（１—＋２）一Ｂ—Ｄ—ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅＪ　ｉｎ　Ｒｕｂｉａ．ｃｏｒｄｉｆｏｌｉａ　ｆｒｏｍ　Ｓｈａｎｘｉ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ＨＰＬＣ；１，３，６－ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ－２一ｍｅｔｈｙｌａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ一３—０—３一【３－０一ａｃｅｔｙｌ—ｄ—Ｌ—ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ一（１—　２）一３１－Ｄ一　￣ｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ】；Ｒｕｂｉａ．ｃｏｒｄｉｆｏｌｉａ　茜草（Ｒｕｂｉａ　ｃｏｒｄｉｆｏｌｉａ　Ｌ．）是茜草科茜草属植物，　物大孔树脂４０％活性部位分离得到１，３，６－ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ．　主产于陕西、河南、安徽、河北、山东、广西和四川等，　２－ｍｅｔｈｙｌａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ－３－Ｏ－３－［３－０一ａｃｅｔｙｌ－Ｏ／－Ｌ－ｒｈａｍｎｏ－　其中以陕西、河南产量最大而且品质优良¨Ｊ。茜草　ｐｙｒａｎｏｓｙｌ－（１＿２　－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］（以下简称　的化学成分、药理和临床作用已被深入系统的研究，　ＱＡ），并以该化合物作为质量指标，测定了河南栾川　各种类型的化合物相继被分离鉴定＿２　］。在寻找抗　产茜草中该化合物的含量　Ｊ。本文在前面的工作基　艾滋病病毒活性成分的研究中，从茜草根茎乙醇提取　础上考察了陕西产茜草中该化合物的含量。　收稿日期：２００８—０５—２８　基金项目：河南省科技厅基础前沿计划（０７２３００４５０２）；河南省教育厅基础研究计划（２００８Ａ３６０００２）；河南大学科研基金项　目（Ｎｏ０６ＹＢＺＲ０７３）　作者简介：贺光东（１９８４一），男，河南南阳人，硕士研究生，从事天然活性成分研究及新药开发。　通讯作者：康文艺（１９７１一），男，黑龙江尚志市人，医学博士后，副教授，从事天然药物活性成分研究工作。　维普资讯 http://www.cqvip.com

３６　河南大学学报（医学版），２００８年，第２７卷第３期　１仪器与试药　１．１　仪器　膜（０．４５　ｍ）滤过，既得供试品溶液。　２．４线性关系考察　．　精密吸取对照品溶液１　ｌ、２　ｌ、４　ｌ、６　ｌ、８　ｌ，　岛津ＬＣ－２０１０Ａ高效液相色谱仪，ＣＬＡＳＳ—ＶＰ色　注入液相色谱仪，测定峰面积。以进样量（　ｇ）为横　谱工作站，ＵＶ－２０１０Ａ检测器，自动进样器，柱温箱，　坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明１，　四元低压梯度泵。　余所用试剂均为分析纯。　１．２试药　３，６－ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ一２一ｍｅｔｈｙｌａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ一３一Ｏ一３一［３－０一ａｃｅ—　在０．０２０　ｇ一０．１６０　ｇ的范围呈良好的线性关系，　回归方程为：Ｙ＝５×１０。Ｘ＋１２２２１，ｒ＝０．９９９９。　试剂：甲醇、四氢呋喃为色谱纯，水为高纯水；其　ｔｙｌ一０［一Ｌ—ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ一（１　２　一Ｄ—ｇｌｕｅｏｐｙｒａｎｏ—ｓｉｄｅ］　１，３，６－ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ－２一ｍｅｔｈｙｌａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ一３一Ｏ一３一［３一　２．５精密度试验　取同一对照品溶液１Ｏ　Ｉ，连续进样５次，测峰面　Ｏ—ａｃｅｔｙｌ一０［一Ｌ－ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ一（１　２　一Ｄ—ｇ｜ｕｃｏｐｙｒａｎ—　ｏｓｉｄｅ］河南大学天然药物研究所自制，纯度９８％，可　积，其ＲＳＤ为０．０８％。　用于定量测定。陕西产茜草购自开封市乐仁堂药店。　２．６稳定性试验　精密吸取于室温下放置的同一供试品溶液１Ｏ　ｌ，分别于０　ｈ、２　ｈ、４　ｈ、６　ｈ、８　ｈ、１０　ｈ进样，测定。结　果儿茶素峰面积的ＲＳＤ为０．８３％。结果表明供试品　２方法与结果　２．１　色谱条件　　色谱柱：Ｐｕｒｏｓｐｈｅｒ　ｓｔａｒ　ＲＰ—Ｃｌ８色谱柱（４．６　ｍｍ×　溶液在１０　ｈ内稳定。２５０　ｍｍ，５　ｍ，Ｍｅｒｃｋ公司）；甲醇水四氢呋喃（６５：　２．７重复性实验　３４．７：０．３），流速为１．０　ｍｌｆｍｉｎ，检测波长为２７６　ａｍ，　精密称取同一样品６份（每份０．０８０　ｇ），按２．３　项下制备方法制备样品溶液。各进样１Ｏ　ｌ，测定峰　柱温为２５℃，外标法定量分析。　２．２对照品溶液的配制　面积，峰面积ＲＳＤ为１．７７％，表明本方法重现性良　　精密称取１，３，６－ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ一２一ｍｅｔｈｙｌａｎｔｈｒａｑｕｉ—　好。ｎｏｎｅ一３－０—３－［３—０－ａｃｅｔｙｌ一０［一Ｌ—ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ一（１　２）－　２．８加样回收率实验　称取已知１，３，６－ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ－２一ｍｅｔｈｙｌａｎｔｈｒａｑｕｉ—　ＪＢ—Ｄ—ｇｌｕｅｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］对照品２．０　ｍｇ置于１Ｏ　ｍｌ容量　瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度。精密移取１　ｍｌ溶　ｎｏｎｅ…３　０　３一［３－０一ａｃｅｔｙｌ一０［一Ｌ—ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ一（１　２）－　液至１Ｏ　ｍｌ容量瓶中定容，配成浓度为０．０２０　ｇ／Ｌ的　ＪＢ—Ｄ—ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］含量的茜草根茎粉末０．０２０　ｇ置　对照品溶液。　２．３供试品溶液的配制　于ｌＯ　ｍＩ容量瓶中平行６份，分别精密加人０．０２　ｇ／Ｌ　的对照品１　ｍｌ，按２．３项下制备方法制备供试品液，　将干燥的茜草根茎粉碎，过６Ｏ目筛，精密称取样　按２．１项色谱条件测定含量，计算回收率。实验结果　　品０．０８０　ｇ置于１Ｏ　ｍｌ容量瓶中，加甲醇定容，超声　见表１。３０　ｍｉｎ，放冷，再用甲醇定容至１Ｏ　ｍｌ，摇匀，用微孔滤　表１　加样回收率实验结果　２．９样品测定　表２茜草根茎中ＱＡ的含量测定　精密称取陕西产茜草根茎干燥粉末０．０８０　ｇ，平　行三份。按２．３项方法制备供试品，在上述色谱条件　下测定。结果见表２和图１。　样品序号ＱＡ的含量测定（％）平均含量（％）ＲＳＤ（％）　维普资讯 http://www.cqvip.com

贺光东，等：ＲＰ—ＨＰＬＣ法测定陕西产茜草中ＱＡ的含量　３７　ｊ　；　＾．　ｆ　【　０　ｌＯ　２Ｏ　３０　ＩＩＩｉｎ　Ｏ　Ａ　Ｂ　Ａ．对照品色谱图Ｂ．供试品色谱图　图１　ＨＰＬＣ色谱图　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ　ａｃｔｉｖｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｇｅｎｕｓ　３讨论　Ｒｕｂｉａ［Ｊ］．Ｃｈｅｍｉｓｔ￣ｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００４，（１）：１２４１—１２６１．　３．１　本文采用了文献［９］中的色谱条件，发现在此　［３］华会明，王素贤，吴立军，等．茜草中蒽醌酯类成分的研　条件下陕西产茜草中１，３，６－ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ－２一　究［Ｊ］．药学学报，１９９２，２７（４）：２７９—２８２．　ｍｅｔｈｙｌａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ一３一Ｏ一３一［３－０一ａｃｅｔｙｌ—　—Ｌ—ｒｈａｍｎｏｐｙ—　［４］王素贤，华会明，吴立军，等．茜草中蒽醌类成分研究　ｒａｎｏｓｙｌ一（１　２　Ｄ—ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］与周围色谱峰分　［Ｊ］．药学学报，１９９２，２７（１０）：７４３—７４７．　［５］Ｉｔｏｋａｗａ　Ｈ．Ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｒｕｂｉａ　ｃｏｒｄｉｆｏｌｉａ［Ｊ］．Ｃｈｅｍ　离良好，分离度大于１．５，峰形对称，符合定量测定的　Ｐｈａｒｍ　Ｂｕｌｌ，１９８３。３１（７）：２３５３—２３５８．　要求。１，３，６－ｔｉｆｈｙｄｒｏｘｙ－２一ｍｅｔｈｙｌａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ－３—０－３一　［６］Ｓｃｈｒｉｐｓｅｍａ　Ｊ，Ｄａｇｎｉｎｏ　Ｄ．Ｅｌｕｃｉｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ　［３－０一ａｃｅｔｙｌ—　—Ｌ—ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ一（１　２　一Ｄ—ｇｌｕｃｏｐｙ—　ｐａｔｅｒｎ　ｏｆ　９，１０－ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｈｅ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｓｈｉｆｔｓ　ｏｆ　ｒａｎｏｓｉｄｅ］作为茜草抗艾滋病病毒活性部位的主要成　ｐｅｆｉ・ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｐｒｏｔｏｎｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９６，４２（１）：　分，它的检测方法的建立为开发利用陕西的茜草资源　１７７—１８４．　提供了依据。　［７］Ｃｏｕｒｃｈｅｓｎｅ　Ｍ，Ｂｒａｓｓａｒｄ　Ｐ．Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚ—　３．２　利用本方法测得陕西产茜草中１，３，６一　ａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎａｔｕｒｌａ　ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ　Ｒｕｂｉａｄｉｎｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｎａｔ　Ｐｒｏｄ，１９９３，　ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ－２一ｍｅｔｈｙｌａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ一３一Ｏ一３一［３－０一ａｃｅｔｙｌ—　—　５６（５）：７２２—７３０．　Ｌ—ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ一（１　２　一Ｄ—ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］的含　［８］康文艺，臧鑫炎，李黎．茜草抗氧化活性成分研究［Ｊ］．　量为０．０５３％，与文献［９］中河南栾川产茜草中含量　河南大学学报（医学版），２００６，２５（３）：６—８．　［９］康文艺，郅妙利，王金梅，等．ＲＰ—ＨＰＬＣ法测定茜草中　（达０．４０％）相比，含量明显较低，如果从富集单体化　１，３，６－Ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ－２・ｍｅｔｈｙｌａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ・３・０・［３－０・Ａｃｅｔｙｌ—　合物的角度来说，建议采用河南栾川产茜草。　・Ｌ・ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ一（１一＋２　・Ｄ—ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］的含量　参考文献：　［Ｊ］．天然产物研究与开发，２００８，２０（２）：２９５—２９７．　Ｌ１ｊ肖培根．新编中药志Ｉ［Ｍ］．北京：化学工业出版社，　［责任编辑段金卯］　２０ｏ２：６２９—６３１．　［２］Ｓｉｎｇｈ　Ｒ，Ｇｅｅｔａｎｊｌａｉ，Ｃｈａｕｈａｎ　ＳＭＳ．９，１０一Ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ