卷烟 主流烟气总粒相物中烟草特有N-亚硝胺的测定 气相色谱-.

ＩＣＳ６５．１６０Ｘ８７ａ圄ＧＢ／Ｔ２３２２８－－２００８中华人民共和国国家标准卷烟主流烟气总粒相物中烟草特有Ⅳ－亚硝胺的测定气相色谱一热能分析联用法Ｃｉｇａｒｅｔｔｅ－－ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｉｎｔｏｔａｌｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅｏｆｔｏｂａｃｃｏｓｐｅｃｉｆｉｃＮ－Ｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅｓｍａｔｔｅｒｏｆｍａｉｎｓｔｒｅａｍｃｉｇａｒｅｔｔｅｓｍｏｋｅ——ＧＣ—ＴＥＡｍｅｔｈｏｄ２００８—１２－３１发布２００９—０６—０１实施宰瞀黜鬻瓣警糌赞星发布中国国家标准化管理委员会捉１”ＧＢ／Ｔ２３２２８－－２００８刮菁本标准的附录Ａ、附录Ｂ为资料性附录。本标准由国家烟草专卖局提出。本标准由全国烟草标准化技术委员会（ＳＡＣ／ＴＣ１４４）归口。本标准起草单位：中国烟草总公司郑州烟草研究院、上海烟草（集团）公司。本标准主要起草人：谢复炜、金永明、赵明月、王异、刘克建、吴鸣。卷烟主流烟气总粒相物中烟草特有Ｎ＿亚硝胺的测定气相色谱一热能分析联用法１范围本标准规定了卷烟主流烟气总粒相物中Ｎ一亚硝基降烟碱（ＮＮＮ）、Ｎ一亚硝基新烟碱（ＮＡＴ）、Ｎ－，／亚硝基假木贼碱（ＮＡＢ）和４－（甲基亚硝胺基）一１一（３一吡啶基）一卜丁酮（ＮＮＫ）四种烟草特有亚硝胺的测定方法。本标准适用于卷烟烟气总粒相物中以上四种烟草特有亚硝胺的测定。２规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最瓤版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。ＧＢ／Ｔ５６０６．１卷烟第１部分：抽样ＧＢ／Ｔ１９６０９卷烟用常规分析用吸烟机测定总粒相物和焦油（ＧＢ／Ｔ１９６０９－－２００４，ＩＳＯ４３８７：２０００．ＭＯＤ）３术语和定义下列术语和定义适用于本标准。３．１烟草特有亚硝胺ｔｏｂａｃｃｏｓｐｅｃｉｆｉｃｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅｓ（１ｓＮＡｓ）仅在烟草及烟草铷品中存在的Ｎ一亚硝胺。４原理用玻璃纤维滤片捕集卷烟主流烟气中的总粒相物，用二氯甲烷萃取粒相物中的ＴＳＮＡｓ，浓缩萃取物并采用碱性氧化铝层析柱进行纯化。通过气相色谱一热能分析联用仪（ＧＣＴＥＡ）检测萃取物中亚硝胺的浓度，对主流烟气总粒相物中ＴＳＮＡｓ进行定量分析。５试剂与材料除特别要求以外，均应使用分析纯级试剂。水应为蒸馏水或同等纯度的水。５．１二氯甲烷，色谱纯（或分析纯经重蒸后使用）。５．２甲醇，色谱纯（或分析纯经重蒸后使用）。５．３无水硫酸钠。５．４碱性氧化铝，２００目～３００目。５．５Ⅳ＿戊基一（３一甲基吡啶基）亚硝胺、ＮＮＮ、ＮＡＴ、ＮＡＢ、ＮＮＫ，纯度应大于９７％。５．６内标溶液５．６．１内标储备液准确称量１０ｍｇＮ一戊基一（３一甲基吡啶基）亚硝胺，加入约５０ｍＬ二氯甲烷（５．１）完全溶解后，转移１ＧＢ／Ｔ２３２２８－－２００８至１００ｍＬ的棕色容量瓶中，用二氯甲烷（５．１）定容至刻度。该内标储备液在一２０℃冰箱内存放，有效期为６个月。５．６．２一级内标溶液准确移取２ｍＬ内标储备液（５．６．１）至５０ｍＬ棕色容量瓶中，用二氯甲烷（５．１）定容至刻度。该一级内标溶液在－－２０℃冰箱内存放，有效期为６个月。５．６．３二级内标溶液准确移取ｉ０ｍＬ一级内标溶液（５．６．２）至１００ｍＬ棕色容量瓶中，用二氯甲烷（５．１）定容至刻度。该二级内标溶液在一２０℃冰箱内存放，有效期为３个月。５．７ＴＳＮＡｓ标准溶液分别准确称量１０ＮＮＮ、ＮＡＴ、ＮＡＢ和ＮＮＫ，加入约５ｍＬ二氯甲烷（５．１）完全溶解后，转移至５．７．１标准储备液ｍｇ１０ｍＬ的棕色容量瓶中，用二氯甲烷（５．１）定容至刻度。该标准储备液在一２０℃冰箱内存放，有效期为６个月。５．７．２一级标准溶液准确移取１ｍＬ标准储备液（５．７．１）至１００ｍＬ棕色容量瓶中，用二氯甲烷（５．１）定容至刻度。该一级标准溶液在一２０℃冰箱内存放，有效期为６个月。５．７．３二级标准溶液准确移取１ｍＬ一级标准溶液（５．７．２）至１０ｍＬ棕色容量瓶中，用二氯甲烷（５．１）定容至刻度。该二级标准溶液在２０℃冰箱内存放，有效期为３个月。５．８ＴＳＮＡｓ校准溶液：分别准确移取０．５ｍＬ、１ｍＬ、２ｍＬ、５ｍＬ二级标准溶液（５．７．３）和１ｍＬ、２ｍＬ一级标准溶液（５．７．２）至１０ｍＬ棕色容量瓶中，准确加入１ｍＬ一级内标溶液（５．６．２），最后用二氯甲烷（５．１）定容至刻度，此六个标准溶液为系列标准校准溶液。该ＴＳＮＡｓ校准溶液应在使用前配制。注：烟草特有亚硝胺是强烈致癌物质。所有前处理操作应在通风橱内进行，实验人员应佩带防护手套、面具以保证安全。实验废液收集后应统一处理。６仪器设备常用实验仪器以及下述各项。６．１分析天平，精确至０．１６．３超声波发生器。６．４旋转蒸发仪。６．５色谱柱，弹性毛细管柱３０ｎｌ×０．５３ｍｍ×１ｍＸ０．５３ｍｇ。６．２气相色谱一热能分析联用仪。ｐｍ，建议固定液：ＨＰ一５０＋。６．６保护柱，弹性石英毛细管柱１ｍｍ，应经脱活处理。ｍｍ。６．７玻璃层析柱，具塞，内径为２０ｍｍ，长度为３００７抽样按照ＧＢ／Ｔ５６０６．１的规定抽取实验室样品。８分析步骤８．１卷烟的抽吸按照ＧＢ／Ｔ１９６０９的规定收集２０支卷烟的粒相物。８．２测定次数每个样品应平行测定两次。２ＧＢ／Ｔ２３２２８－－２００８８．３样品分析８．３．１样品萃取将捕集有主流烟气粒相物的滤片放人２５０ｍＬ锥形瓶中，置于超声波发生器（６．３）内，用二氯甲烷（５．１）分三次超声波萃取，每次１０ｒａｉｎ，第一次使用１００ｍＬ二氯甲烷，其余两次各使用８０ｍＬ二氯甲烷。将所有萃取液经无水硫酸钠（５．３）过滤，转移至５００ｍＬ磨口圆底烧瓶中。８．３．２萃取液浓缩将盛有萃取液的圆底烧瓶连接旋转蒸发仪（６．４），通高纯氮气旋转蒸发（４０℃水浴），浓缩至５８．３．３样品净化８．３．３．１层析柱的准备ｍＬ。碱性氧化铝（５．４）在１ｌｏ℃下活化２ｈ。玻璃层析柱（６．７）应保持洁净干燥，先加入３０ｍＬ二氯甲烷（５．１），再用湿法将１５ｇ碱性氧化铝（５．４）ｔｌ到层析柱中，充分搅拌并赶走所有气泡。用５０ｍＬ二氯甲烷淋洗层析柱。乳３，３．２层析将浓缩后样品（８．３．２）一次性加入按照８．３．３．１准备的层析柱中，并用二氯甲烷（５．１）分三次洗涤烧瓶壁，每次５ｍＬ。用３０ｍＬ二氯甲烷淋洗层析柱，流速应控制在约２ｍＬ／ｍｉｎ，不收集洗脱液。用１００ｍＬ８％甲醇一二氯甲烷（体积分数）溶渡淋洗层析柱，收集此部分洗脱液。８．３．４洗脱液浓缩在洗脱液中加入１ｍＬ二级内标溶液（５．６．３）后，通高纯氮气浓缩至３０ｍＬ，转移至５０ｍＬ梨形烧瓶中，浓缩至约１ｍＬ后，移至２ｍＬ色谱分析瓶中待分析。８．４分析按照制造商操作手册运行气相色谱一热能分析联用仪。以下分析条件可供参考，采用其他条件应验证其适用性。——程序升温：初始温度１５０℃，保持２ｍｉｎ；以３℃／ｍｉｎ速率升至２３０℃，２０℃／ｒａｉｎ速率升至２６０℃，保持２０ｒａｉｎ；——进样口温度：２３０℃；——载气：氦气，恒流１０ｍＬ／ｍｉｎ；ｍＬ／ｍｉｎ；——进样量２ｐＬ，不分流，不分流时间１ｒａｉｎ，吹扫流量５０一热裂解温度：５５０℃；一一接口温度：２５０℃。８．５测定典型卷烟样品色谱图参见图Ａ．１。用气相色谱一热能分析联用仪测定一系列ＴＳＮＡｓ校准溶液（５．８），用ＴＳＮＡｓ与内标峰面积的比值作为纵坐标，ＴＳＮＡｓ的浓度作为横坐标，分别建立四种ＴＳＮＡｓ成分的校正曲线。对校正数据进行线性回归，Ｒ２应不小于０．９９。测定样品，根据样品中的峰面积计算每一个卷烟烟气样品中四种ＴＳＮＡｓ的浓度（ｎｇ／ｍＬ）。９结果的计算与表述由式（１）计算出样品主流烟气中四种ＴＳＮＡｓ的传输量，以每支卷烟主流烟气ＴＳＮＡｓ传输量来表示，单位为ｎｇ。取两个平行测定的算术平均值作为样品的测试结果，结果精确到ｏ．０１ｎｇ。Ｘ一—ｃ×—Ｖｎ…………………………（１）式中：ｘ——每支卷烟主流烟气ＴＳＮＡｓ的传输量，单位为纳克／每支（ｎｇ／支）；３ＧＢ／Ｔ２３２２８－－２００８ｃ——浓缩液中ＴＳＮＡｓ的浓度，单位为纳克每毫升（ｎｇ／ｍＬ）Ｖ——浓缩液的体积，单位为毫升（ｍＬ）；ｎ——烟支数量，单位为支。１０精密度、回收率和检出限本方法的精密度、回收率和检出限试验研究结果参见表Ｂ．１。１１检验报告检验报告应包括以下内容：——检验环境大气条件；——卷烟的名称、规格、类型、盒标焦油量、盒标烟气烟碱量；——检验结果；——卷烟总粒相物产生量；——总粒相物中烟碱含量（或烟气烟碱量）；——总粒相物中水分含量；一一焦油量；一抽吸口数。ＧＢ／Ｔ２３２２８－－２００８附录Ａ（资料性附录）色谱图示例按照本标准规定的方法对典型卷烟样品进行分析，得到的气相色谱一质谱联用图见图Ａ．１。。４００００§３００００图Ａ．１典型卷烟样品色谱图ＧＢ／Ｔ２３２２８－－２００８附录Ｂ（资料性附录）精密度、回收率和检出隈试验研究结果本方法的精密度、回收率和检出限试验研究结果见表Ｂ．１。表Ｂ．１本方法的精密度、回收率和检出限试验研究结果（ｎ＝５）ＴＳＮＡｓＮＮＮ５．９６９９４３ＮＡＴ４．７５３ＮＡＢ５．３９９ＮＮＫ５２混合型卷烟测定变异系数／蹦烤烟型卷烟测定变异系数／％回收率／％检测限／（ｒｉｇ／支）６２９５．９０．４２９２．３０．２４９４．２０．７９０．７０６