过氧化物酶(POD)试剂盒说明书

一、测定原理：

利用过氧化物酶(POD)催化过氧化氢反应的原理，通过测定420nm处吸光度的变化得出其酶活性。

二、实际的组成和配置

试剂一：液体60ml×4瓶，4℃保存6个月 试剂二：粉剂×3瓶，4℃保存6个月

试剂二应用液的配置：临用每瓶粉剂加入10ml的双蒸水溶解，4℃避光保存 试剂三：液体5ml×1瓶，4℃保存6个月

试剂三应用液的配制：临用前用双蒸水15倍稀释，使得1cm光径，双蒸水调零时

A240保持在0.4左右，现用现配。若A值太高，则加双蒸水稀释，若A值太低，则加入适量试剂三。（一般在25倍左右稀释）

试剂四：液体50ml×2瓶，4℃保存6个月。 三、操作步骤：

1、前处理：

植物组织匀浆的制备：准确称取组织重量，按照重量(g):体积(ml)=1:9的比列加入9倍体积的匀浆介质(推荐使用生理盐水或磷酸盐缓冲液:0.1 mol/L pH 7-7.4)，冰水浴条件下制备成10%的组织匀浆液，3500r/min 离心10min，取上清液进行测定。

2、操作表： 试剂一(ml) 试剂二应用液(ml) 试剂三应用液(ml) 双蒸水(ml) 样本(ml) 试剂四(ml) 测定管 2.4 0.3 0.2 0.1 37℃水浴准确反映30min 1.0 1.0 混匀后，3500r/min离心10min，取上清于波长420nm处，1cm光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。 四、计算及举例

1、定义：在37℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟催化1ug底物的酶量定义为一个酶活力单位。

2、植物组织中过氧化物酶(POD)活力计算公式：

POD活力(U/mgprot)对照管 2.4 0.3 0.2 0.1 测定OD值-对照OD值反应液总体积(ml)反应时间(30min)匀浆蛋白浓度(mgprot/ml)1012比色光经(1cm)样本量(ml) 3.计算举例

取新鲜桑叶，制备成10%匀浆，取100ul匀浆上清，按照操作表进行操作，测得数据如下：对照OD 0.237；测定OD 0.665；同时测得10%桑叶匀浆蛋白浓度是1.80mgprot/ml根据公式计算如下:

POD活力(U/mgprot)测定OD值-对照OD值反应液总体积(ml)反应时间(30min)匀浆蛋白浓度(mgprot/ml)100012比色光经(1cm)样本量(ml)0.665-0.2374.0301.8010001210.126.420 U/mgprot