黄瓜灰霉病拮抗菌7-16发酵液理化性质的测定

杨迪

【摘 要】黄瓜灰霉病拮抗菌株7-16具有良好的抑菌效果,但理化性质的稳定性对后期的开发应用有着至关重要的影响.经试验测定其无菌发酵液表现出了较好的抑菌效果和稳定性,它不仅对温度、光照及酸碱度耐受性优良,且发酵液有良好的耐贮存性.传代试验也表明该菌株遗传性能稳定,产生抗菌物质的能力保持了很高的水平. 【期刊名称】《价值工程》 【年(卷),期】2018(037)026 【总页数】2页(P191-192)

【关键词】拮抗放线菌;理化性质;稳定性;抑菌效果 【作 者】杨迪

【作者单位】辽宁地质工程职业学院,丹东118003 【正文语种】中 文 【中图分类】S476

1 文献综述

黄瓜灰霉病是流行性强，再侵染频繁的病害，历年发生为害严重，给黄瓜生产造成严重的损失。农用抗生素（Agricultural antibiotics）是由微生物发酵代谢产生的、与农药有相同功能，可以应用于农业生产，抑制作物病害、防止病虫害威胁等的次生代谢产物。随着科技的发展，人们的环保意识不断提高。世界各国已经意识到传

统化学农药对环境的危害，并已严格规范，制定严格的生产及使用要求，大量传统化学农药已被禁止。生物农药的研究已经是各国研究人员的重点研究对象。全球每年新研制和登记的生物农药品种正以4%的速度递增[1]。就目前的发展趋势来看，传统的生物农药势必要被农用抗生素代替。已研制开发的放线菌酮、井冈霉素、多抗霉素等[2]农用抗生素，其效果已在实际应用中获得了很好的验证。 2 材料方法 2.1 材料

经多重筛选得到的黄瓜灰霉病拮抗链霉菌菌7-16。 2.2 实验方法

将黄瓜灰霉病拮抗链霉菌菌7-16发酵液分别进行以下处理，测定其抑菌活性。 ①热稳定性测定[3-4]。

1）处理温度为100℃，处理时间分别为10、30、60、120min。2）处理时间为 30min，处理温度分别为 30、50、70、90、121℃。 ②光照稳定性测定[5]。

1）自然光照射，照射时间分别为 3、6、12h。2）紫外光照射，照射时间分别为 1、2、4h。

③酸碱稳定性测定[6]。

分别用1.0mol/L HCl、1.0mol/L NaOH，分别将发酵液样品调pH至2～11，进行下列处理后。1）室温处理，静置24h。2）100℃水浴加热，处理时间分别为 10、30、60、120min。

④耐贮性测定 发酵液分别于54℃和-20℃保存15。

⑤遗传稳定性测定 将原始纯化菌F1进行传代培养，直至F5代，测定1～5代菌株抑菌活性。 3 实验结果

3.1 热稳定性测定

在热处理时间相同的条件下，随着温度的升高，拮抗菌的抑菌活性逐渐下降。菌株7-16的发酵液在30℃下处理30min仍保持较好的抑菌活性，抑菌圈直径为45.8mm，121℃下处理30min没有抑菌活性（如图1）。 图1 不同温度下处理30min对发酵液稳定性的影响

菌株7-16在100℃下处理10min时，其抑菌圈直径为42.0mm，100℃处理120min抑菌活性丧失（如图2）。其抑菌活性随着处理时间的增加而逐渐下降。 图2 100℃下处理不同时间对发酵液稳定性的影响 3.2 对紫外光及自然光稳定性测定

在紫外光照射1h、2h和4h后，菌株7-16的抑菌圈直径分别为60.2mm、57.0mm和53.9mm，抑菌活性下降很小（如图3）。菌株7-16在自然光照射12h后的抑菌圈直径仍为60.0mm，活性没有下降（如图4）。发酵液无论是在自然光照射下，还是紫外光照射下，抑菌活性均未发生明显下降，表明其具有良好的光照稳定性。 3.3 酸碱稳定性测定

图3 紫外光对发酵液稳定性的影响

图4 菌株7-16在自然光下处理不同时间的抑菌效果

拮抗菌7-16的发酵液对酸碱的耐受性较差。发酵液在偏酸性和中性的条件下活性较高。室温下，菌株7-16的抑菌活性最大值出现在pH为6时，然后随pH值的增大而减小；100℃热处理时随着时间的延长同一pH的发酵液抑菌活性逐渐下降，处理10min时，pH值为6的拮抗菌发酵液抑菌圈直径为42.1mm。随着热处理时间的延长，抑菌活性逐渐消失，热处理1h和2h的发酵液完全没有抑菌活性（如图5）。

图5 菌株7-16发酵液对酸碱的稳定性

3.4 耐贮性测定

拮抗菌株的发酵液经-20℃、15d处理后，基本保持了原有的抑菌活性；而经54℃处理的发酵液几乎全部丧失抑菌活性。 3.5 遗传稳定性测定

与出发菌株相比，菌株7-16传代培养的发酵液抑菌效果稍有下降，但排除试验误差，仍然表现出稳定的遗传性。 4 结论

菌株7-16的无菌发酵液表现出了较好的抑菌效果和稳定性，它不仅对温度、光照及酸碱度耐受性优良，且发酵液有良好的耐贮存性。传代试验也表明该菌株遗传性能稳定，产生抗菌物质的能力保持了很高的水平，预示着该菌株在开发为生物农药方面有着很好的前景。 参考文献：

【相关文献】

[1]朱昌雄，等.生物农药的发展现状及前景展望[M].上海环境科学，2002，21（11）：654-658. [2]于婷，尚玉珂，李艳芳，慕卫，刘峰.植物保护学报[J].2009，36（1）：65-69.

[3]赵刚，吴元华.一株链霉菌发酵液的抗菌谱及稳定性[J].农药，2006，45（8）：525-526，528. [4]张婷婷.海洋虾壳的放线菌分离鉴定筛选及抑菌活性物质提取[D].福州:福建农林大学硕士学位论文，2011.

[5]房耀维，王淑军，刘姝，等.一株海洋专性放线菌的分类鉴定及其抑菌活性[J].农药，2014，53（2）:136-139.

[6]龙建友，姬志勤，师宝君，等.一株抗生素产生菌No.24菌株发酵液抗菌谱及稳定性测定研究[J].西北农林科技大学学报:自然科学版，2004，32（S1）:61-64.