银芩胶囊HPLC指纹图谱研究

药物研究

银芩胶囊HPLC指纹图谱研究

张晓蕾

1，2

朱常成

2

李宁

2

杨兆祥

2*

1．昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室，云南

2．昆药集团股份有限公司，云南

【摘

要】

昆明650100

昆明650500;

目的:采用高效液相色谱法对银芩胶囊中主要化学成分的指纹图谱进行研究。方法:以乙腈－0.1%甲酸

水溶液为流动相进行梯度洗脱，流速为1mL/min，检测波长280nm，柱温25℃，色谱柱XBridgeC18(4.6mm×250mm，5μm)，并对精密度、重复性、溶液稳定性进行了考察。结果:以黄芩苷为参照峰建立了银芩胶囊指纹图谱共有模式，标定8个共有峰，构建的十批银芩胶囊样品指纹图谱的相似度＞0.98，且精密度、重复性及稳定性良好。结论:该方法对银芩胶囊指纹图谱专一性强，准确，高效，可为银芩胶囊的内在质量控制提供依据与评价。

【关键词】

银芩胶囊;指纹图谱;相似度分析;质量评价

【文献标志码】A

【文章编号】1007－8517(2019)8－0036－04

【中图分类号】Ｒ286.0

StudyonHPLCFingerprintsofYinqinCapsules

2

ZHANGXiaolei1，

ZHUChangcheng2LINing2YANGZhaoxiang2*

1．SchoolofPharmaceuticalScience＆YunnanKeyLaboratoryofPharmacologyforNaturalProducts，

KunmingMedicalUniversity，Kunming650500，China;2．KPCPharmaceuticals，Inc，Kunming650100，ChinaAbstract:ObjectiveToestablishthefingerprintsofmainchemicalcomponentsinYinqincapsulesbyHPLC．MethodsThemo-bilephasewasacetonitrile－0.1%formicacidaqueoussolutioningradientelution，theflowratewas1.0mL/min，thedetectionwavelengthwas280nm，thecolumntemperaturewas25℃，thechromatographicseparationwasperformedonanXBridgeC18column(4.6mm×250mm，5μm)．Theprecision，repeatability，stabilityofthesolutionwasinvestigated．ＲesultsThebaicalinwasusedasthereferencepeaktoestablishthecommonfingerprintpatternofYinqincapsules，andtheeightcommonpeakswerecalibrated．Thewithgoodprecision，repeatabilityandstability．ConclusionsimilarityofthefingerprintsoftenbatchesofYinqincapsuleswas＞0.98，

Thismethodisspecific，accurateandefficientforthefingerprintofYinqincapsules，andcanprovidethebasisandevaluationfortheinternalqualitycontrolofYinqincapsules．

Keywords:YinqinCapsule;Fingerprint;SimilarityAnalysis;QualityEvaluation;

银芩胶囊是在傣族“雅哇黄”方基础上开发的现代制剂

［1］

分较少，非挥发性成分主要有槲皮苷、芦丁、金丝桃苷等

［6］

，其主要由黄芩、金银花、鱼腥草、。中药复方制剂通常由多味药组成，

［7］

三七叶合理配伍而成，其内容物为黄色至黄褐色颗粒和粉末，气微、味苦。本品具有清热解毒之功效，用于治疗外感风热所致的发热、咳嗽、咽痛及呼吸道感染、扁桃体感染和咽炎黄酮及其苷类是其主要的药效成分

［2］

其中所包含的化学成分上百种，这给复方制剂的研究带来一定的困难。中药指纹图谱

是一种综

合的、可量化的分析手段，是目前符合中药特点、评价中药质量的控制模式之一。指纹图谱能反映中药制剂的整体特征，提高中药复方制剂质量控制的专属性，在鉴别和评价药品内在质量方面的作用远大于选择一个指标成分测定含量的作用

［8－9］

。黄芩中

［3］

，金银花化

学成分主要包括有机酸、黄酮类、三萜皂苷类、环烯醚萜类、挥发油及微量元素等，其中有机酸以绿原酸类化合物为主成分

［5］

［1，4］

。三七叶中富含皂苷类。因此更为科学和合理，也更符合中药的多

。鱼腥草中挥发类成分较多，非挥发性成途径协调作用的药理特点。

作者简介:张晓蕾(1993－)，女，汉族，硕士研究生在读，研究方向为药物分析。E－mail:zhangxiaoleihcg@163.com

通信作者:杨兆祥(1962－)，男，白族，本科，高级工程师，研究方向为药物化学。E－mail:yangzxky@163.com

2019，Vol.28，No.8中国民族民间医药2019年4月第28卷第8期ChineseJournalofEthnomedicineandEthnopharmacy，·37·

1实验材料

1.1

仪器与试药WatersＲD.LC高效液相色谱仪，美国Agilent公司;Milli－Q超纯水器，Milli-

pone公司;XP205分析电子天平，梅特勒－托利多公司;XBridgeC18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)。黄芩苷对照品(批号MUST－18010410，Purity98.58%，HPLC)，中国科学院成都生物研究所;银芩胶囊(批号:161009－01、161009－02、170605－01、170605－02、180401－01、180401－02、180206－01、180206－02、180307－01、180307－02)，昆药集团股份有限公司;2方法与结果

2.1

供试品溶液的制备

精密称取芩胶囊内容物

0.5g，置于具塞锥形瓶中，加70%甲醇10mL，超声处理20min(功率250W，频率350Hz)，进行提取两次，再倒入10mL离心管中离心15min，经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液即得。

2.2对照品溶液的制备取黄芩苷对照品，加70%甲醇制成每1mL中含100μg的溶液，即得。2.3色谱条件色谱柱:XBridgeC18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm);流动相:乙腈(A)－0.1%甲酸水(B)，以表1中梯度洗脱条件洗脱;柱温25℃;检测波长:280nm;流速1.0mL/min。

表1

梯度洗脱表

时间/min

0.1%甲酸水

乙腈095529555901010802020802030703060455565

45

55

2.4方法学考察2.4.1

仪器精密度试验

取同一供试品溶液，按

2.3”项下色谱条件进样6次，测得各共有峰的相对保留时间ＲSD＜0.3%，各共有峰相对峰面积＜0.13%合指纹图谱技术标准的要求，结果显示方法的精密度好。见表2。

2.4.2重复性实验取同一批银芩胶囊样品，按2.1”项下方法制备6份供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件进样测定，测得各共有峰的相对保

留时间ＲSD＜2.1%，各共有峰的相对峰面积ＲSD

＜0.12%。表明该方法重复性良好，符合指纹图谱的测定要求。见表3。

2.4.3稳定性试验取同一批供试品溶液，分别于0、6、12、24、36、48h进行指纹图谱测定，测定各共有峰的相对保留时间ＲSD＜0.32%，各共有峰的相对峰面积ＲSD＜0.89%，表明供试品溶液在48h内稳定性良好。见表4。

表2

银芩胶囊共有峰精密度色谱峰相对保留时间相对峰面积ＲSD/%ＲSD/%10.10760.052620.10210.07813

0.20130.07134－－50.08270.125160.30120.093570.08360.05638

0.0521

0.0842

注:4号峰(黄芩苷)为参照峰。

表3

银芩胶囊共有峰重复性

色谱峰相对保留时间ＲSD/%相对峰面积ＲSD/%

12.0910.0839721.8640.0796131.5970.1032

4－－51.68310.0744561.12280.124170.71040.09518

0.8642

0.0906

注:4号峰(黄芩苷)为参照峰

表4

银芩胶囊共有峰稳定性色谱峰相对保留时间相对峰面积ＲSD/%ＲSD/%10.14260.857420.10280.893130.31870.615740.000.0050.20510.463160.15340.422570.21810.62138

0.2425

0.6751

注:4号峰(黄芩苷)为参照峰。

““·38·2019，Vol.28，No.8中国民族民间医药2019年4月第28卷第8期ChineseJournalofEthnomedicineandEthnopharmacy，

2.5

分别制备

10批昆药集团生产的银芩胶囊供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件进行测定，色谱图如图1所示;各批银芩胶囊指纹图谱概貌一致，相似度值均大于0.98，总体相似度较高，见表5;选取8个共有峰作为特征指纹峰，建立银芩胶囊对照指纹

指纹图谱的建立及共有峰的标记图谱，如图2所示。

分析十批银芩胶囊HPLC色谱图，峰4为黄芩苷，峰6为汉黄芩苷，峰7为黄芩素，峰8为汉黄芩素，其中峰4在色谱图中分离效果较好，含量高，且为银芩胶囊中药的质量控制指标成分，故确定峰4黄芩苷为参照峰。

表5

编号S1S2S3S4S5S6S7S8S9S10对照图谱

S11.0000.9980.9890.9960.9930.9870.9910.9930.9930.9940.997

S20.9981.0000.9860.9940.9930.9880.9910.9920.9930.9940.997

S30.9890.9861.0000.9960.9720.9660.9770.9820.9740.9750.985

十批银芩胶囊指纹图谱相似度评价

S50.9930.9930.9720.9861.0000.9960.9940.9910.9970.9960.996

S60.9870.9880.9660.9810.9961.0000.9960.9920.9950.9940.994

S70.9910.9910.9770.9890.9940.9961.0000.9970.9960.9950.997

S80.9930.9920.9820.9930.9910.9920.9971.0000.9950.9940.997

S90.9930.9930.9740.9880.9970.9950.9960.9951.0000.9980.997

S100.9940.9940.9750.9960.9960.9940.9950.9940.9981.0000.997

对照图谱0.9970.9970.9850.9950.9960.9940.9970.9970.9970.9971.000

S40.9960.9940.9961.0000.9860.9810.9890.9930.9880.9960.995

2019，Vol.28，No.8中国民族民间医药2019年4月第28卷第8期ChineseJournalofEthnomedicineandEthnopharmacy，·39·

3讨论

3.1

固定相的选择本试验比较了不同厂家不同

型号的3种色谱柱:①UlatimateAQC18(4.6mm×250mm，5μm);②LUNAC18(4.6mm×

250mm，5μm);③XBridgeC－18(4.6mm×250mm，5μm);结果表明色谱柱①的分离效果较差，黄芩苷未能和小峰分离，且峰形不好。色谱柱③的黄芩苷峰也未能达到分离;色谱柱②的分离效果均良好，故选择XBridgeC18色谱柱。3.2

流动相体系的选择

取同一供试品溶液，考察

不同流动相体系对色谱峰分离效果的影响，采用甲醇－水流动相体系，因甲醇洗脱能力较弱，色谱峰

峰形不好且出峰不完全。故考察了乙腈－水流动相体系，乙腈－0.1%甲酸水流动相体系、乙腈－0.1%乙酸水流动相体系。试验过程中，采用梯度洗脱分离银芩胶囊中的有效成分，结果表明，当流动相为乙腈－0.1%甲酸水时，色谱峰出峰完全且峰形较好。故选择乙腈－0.1%甲酸水溶液。

3.3梯度的选择取同一供试品溶液，分别考察了三个梯度洗脱条件对色谱峰分离效果的影响，发现只有在表1梯度洗脱条件下，黄芩苷的峰能与其他小峰分开。因此选择表1中的梯度条件进行洗脱。3.4检测波长的选择取同一供试品溶液，以表1中梯度洗脱条件洗脱，进行检测波长的选择考察，取同一供试品溶液，测定某一特定成分含量的检测波长通常不一定适合指纹图谱的需要，为了获得多层次的信息，需要选择数个不同的检测波长，同时银芩胶囊为复方制剂，其所含化学成分较多。因此，在试验中应使用PDA检测器全波长检测获得3D指纹图谱

［10］

。结果表明280nm处

可以得到较多的化学信息，故选择280nm作为检测波长。3.5柱温的选择取同一供试品溶液，考察不同色谱柱温度(20℃、25℃、30℃)的色谱峰分离情况，测得三种不同温度下色谱分离效果相似，因为25℃接近室温，最终确定25℃为测定用柱温。4

结论

本试验通过供试品前处理方法的研究，色谱条件的研究，最终确定银芩胶囊指纹图谱的分析

方法，因目前银芩胶囊仅在昆药集团生产，因此产品批数较单一，后续还需大量样品的质量跟踪，数据积累，初步暂定银芩胶囊的指纹图谱相似度在0.90以上为合格。本研究尝试了多种不同梯度的洗脱条件，最终确定了银芩胶囊的指纹图谱分析的色谱条件，考察确定了8个共有峰的对照指纹图谱，方法快速、简便、重复性好，经方法学验证满足其相关要求。本研究建立的一种银芩胶囊的指纹图谱分析方法适用性强，能够全面反映产品的质量状况。

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(收稿日期:2019－02－25

编辑:程鹏飞)