CD64+中性粒细胞在烧伤并发感染患者体内变化趋势检测
2021-10-08
来源:乌哈旅游
基因组学与应用生物学,2016年,第35卷,第1l期,第2881—2884页 Genomics and Applied Biology,2016,Vo1.35,No.1 1,288卜2884 研究论文 Research Article CD64+中性粒细胞在烧伤并发感染患者体内变化趋势检测 高兴新杨磊杜刚 广西医科大学第一附属医院,南宁,530021 通讯作者。leiyangMethod@126.com 摘 要本研究旨在探讨CD64+中性粒细胞在烧伤并发感染患者体内的变化趋势。在2015年3月至2016年 3月期间在广西医科大学附属第~临床医学院烧伤科就诊的患者共100例,男性73例,女性27例;其中观 察组(并发感染)50例,对照组(未发生感染)患者5O例。对两组患者进行血常规检测、烧伤面积统计,流式细 胞仪检测两组患者体内CD64+中性粒细胞在外周血中的比例,并通过荧光显微镜观察两组患者中性粒细胞 CD64表达强度的差异性。我们发现观察组患者外周血CD64+中性粒细胞比例平均高达(41.5±7.6)%,明显高 于对照组的(7.2+5.1)o/0,差异有统计学意义60<0.05);荧光显微镜下观察结果显示,观察组患者中性粒细胞表 面CD64分子表达强度明显高于对照组。因此我们得出结论,烧伤并发感染患者体内CD64+中性粒细胞比例 明显升高,且表达强度明显高于未感染患者,可以用于日后患者感染的诊断及预测。 关键词 烧伤,感染,CD64,表达强度 Detection of Trendency of the CD64 Neutrophils in the Patients with Infec— tion Complicated by Bums Gao Xingxin Yang Lei Du Gang Department ofBurns and Plastic,the First Hospital ofGuangxi Medical University,Nanning,53002 1 Corresponding author,leiyangMethod@126.com DOI:10.134178.gab.035.002881 Abstract The aim of this study was to investigate the trendency of the CD64 neutrophils in the patients with infection complicated by bums.A total of one hundred patients(73 male and 27 female)admitted to our hospital arranged from March 20 1 5 to March 20 1 6 were enrolled in this study.The 1 00 cases were divided into two groups, 50 cases in observer group and the others in control group,based on whether complicated infection or not.The blood samples and the burn area were detected,and the percentage of CD64 neutrophils in the peripheral blood of the two roupsg were tested by the flow cytometry,and observed the difference of CD64 expression intensity on the surface ofthe neutrophils bewteen the two groups.We found that in the result the percentage of CD64 neutrophils in the observer group reached(41.5-+7.6)%,signiifcantly higher than that in the control group with a percentage of (7.2-+5.1)%.Fluorescence microscopy showed that the expression intensity of CD64 on the srface ofneuturophils in the observer group was signiifcantly higher than that in the control group.In conclusion,the percentage of CD64 neutrophils was significantly increased in the patients with infection complicated by bums,and the expression intensiy wast sinigifcantly stronger than those without infection.So the CD64 neutrophils could be used for the prediction and diagnosis of infection. Keywords Bums,Infection,CD64,Expression intensity 烧伤,尤其是大面积烧伤通常会导致比较严重 每10 000个人中就有55个人是由于烧伤所导致的 Hemeda et 的后果,预后较差。在发达国家,每年死亡的人当中, 死亡,而且这个数据在发展中国家会更高(基金项目:本研究由广西自然基金(2014GXNSFBA118177) ̄广西教育JT(KY2015YB071)共同资助 基因组学与应用生物学 2882 Genom’ ana -.enomlcs Apptlilea d Bi151 101 gY0 .一图3),但观察组细胞CD64 a1..2003;Olawoye et a1.,2014)。烧伤可以导致生理代 量及荧光强度基本一致(Merge) 谢反应亢进,进而加剧蛋白质和能量的消耗,机体 的荧光强度明显强于对照组,而在合并通道(PE)与绿色(FITC) ̄并后所形成的黄 新陈代谢的过度活跃还可能会导致患者肌肉容积 图片中,红色( 和伤口延迟愈合(Hart et a1.,2000)。在此过程中,机 色,在观察组细胞中也明显多于对照组。体器官功能严重受损,功能障碍,从而导致机体免 疫机能严重受损,最终导致严重感染的发生。本研 2讨论 感染,一直是影响烧伤患者预后的一个严重 究旨在探讨一种新的指标,能够在烧伤患者即将发 生感染或发生感染之前进行有效的预测,从而指导 因素,甚至威胁到患者的生命。在过去的30年中, 临床进行有效的药物干预,避免严重感染的发生, 感染一直在烧伤患者病死率居高不下中扮演着重 改善烧伤患者预后。 要角色,主要是由于其发病率高、病情恶化迅速、 发病前比较隐匿不易被发现等特点,引起了世界 1结果与分析 1.1一般临床资料 范围内的广泛重视(Tao et a1.,2015)。因此,在临床 上是否能够对潜在的感染早期诊断和发现,并及 时制订治疗方案,成为改善烧伤并发感染患者预 首先对患者进行常规检查及应用五分类血球分 后的关键所在。 析仪对患者进行血常规检查(表1),两组患者在年 CD64分子,是免疫球蛋白IgG的Fc段受体 龄、性别方面无明显差异(p>0.05);在CD64 、WBCs 之一,在单核、巨噬细胞等表面表达,但是却在未 计数方面,观察组明显高于对照 ̄Jl(p<o.05)。 对照组 观察组 Observation group IV! _ 1.2流式细胞仪检测两组患者外周血中CD64+细胞 比例 ‘J 一Control group : ●lo21 7_2 l021 : 41.5 观察组患者白膜层细胞中CD64+中性粒细胞 平均达到40%以上(图1),而对照组均值仅仅不足 : :: 101 1 10 1 1 10%,两组患者外周血样本中CD64+中性粒细胞比例 经t检验比较p<0.05,差异有统计学意义(图2)。 1.3荧光显微镜下观察两组患者CD64+细胞荧光 强度 0 U l0。 j : -蠢≯ … …’ … … CDl5 10oj一 ≯ : … …。¨10・…一102 1(I 图1流式细胞术检测CD15+CD64+细胞百分比 Figure 1 Percentage ofCD15+CD64 cells ofthe two groups 在两组患者外周血白膜层细胞中,CD15的表达 表1一般资料 Table 1 GeneraI information CD64 中性粒细胞在烧伤并发感染患者体内变化趋势检测 ndency ofthe CD64+Neutr。phils in the Patients with Infection Complicated by Bums 2883 Detection ofTre—观察组 Observation group 对照组 Control group 图3采用免疫染色方法来确定中性粒细胞 Figure 3 An immunostaining method was used to identify neutrophils 口6o 观察纰Observation group ■一对照纡I Control group 度明显强于对照组,差异显著。 综上所述,如何早期诊断烧伤患者并发感染是 3 c ’改善患者预后的关键,而CD64+中性粒细胞的检测 则是一种对感染早期诊断的重要手段,目前的研究 均显示CD64分子的表达对感染的诊断具有重要的 研究和应用价值,值得广泛应用及推广。 蔓 40 求g 妻萤20 寸十薹 。 图2两组患者血液样本中CD64+表达量统 ‘分析 Figure 2 Statistical analysis for the percentage of CD64 cells of two groups 3材料与方法 3.1研究对象 选取2015年3月至2016年3月期间就诊于广 活化的中性粒细胞表面呈低表达状态,然而,中性 粒细胞一经外源性病原体刺激活化后,其表面的 CD64分子则迅速升高(Yang et al。,2016)。近些年 西医科大学附属第一临床医学院烧伤科患者共 100例,其中观察组(并发感染)50例,对照组(未发生 感染)患者50例。两组患者在性别、年龄方面无明显 统计学差异(p>O.05)。两组患者及家属均与本研究签 署知情同意书,表示愿意为本研究提供血液样本。本 研究已通过广西医科大学第一附属临床医学院伦理 委员会认证。 来,有许多研究对于CD64分子可以作为一个早期 诊断感染的良好指标作出报道(Wang et a1.,20151, CD64的表达量可以在感染发生2~4 h内就快速升 高fGroselj—Grenc et a1. 2008)。许多研究已经表明 2诊断标准及排除标准 (Kowalik et a1.,2003),相比于其他的诊断指标而 3.言,CD64分子对于感染的诊断具有更高的敏感性 及特异性。 诊断标准:(1)至少3 d存在体温高于39。C或低 于35.5℃的情况:(2)呼吸频率过快,达到28次/min 在本研究中,观察组患者外周血中性粒细胞中 以上;(3)WBCs计数高于12.0×109/L或低于4.0× CD64的阳性率高达41.5%,明显高于对照组:而 109/L:(4)表现出不同程度的抑郁、烦躁、谵妄,或者 CD64表达强度在观察组也明显强于对照组,在对照 腹胀、腹泻等消化道症状;(5)患者血液样本细菌培 组中虽然有7%的细胞表达CD64阳性,而在荧光显 养结果阳性或创面试子细菌培养阳性。排除标准(杨 微镜下观察其荧光强度明显弱于对照组。本研究分 磊等,2016):(1)无发热,体温正常(36.0~37.7℃),血液 析,造成该现象原因主要是在未感染的患者血液中, 及创面试子细菌学培养均呈阴性;(2)无明显的消化道 CD64呈低表达状态,即使一些细胞表面CD64分子 症状,观察期间二便正常;(3 精神状态无明显异常; 表达为阳性,在荧光染色时也仪有少数带有FITC的 f4)患者本人或家属不同意参与本研究。 CD64的抗体可以与细胞结合,镜下显示为暗淡的荧 光。而在观察组中,感染发生后,经外源性病原体刺 增加,不仅CD64分子表达率大幅度上升,而且在细 3.3方法 3.1流式细胞仪检测 激活化后的中性粒细胞表面CD64分子表达量迅速 3_将收集到的患者血液样本取2 mL与Ficol1分 /min进行密度梯度离心, 胞表面CD64荧光抗体的结合率明显增高,荧光强 离液充分混合后,12 000 r基因组学与应用生物学 2884 Genomics and Applied Biology 40 min后将试管取出吸取白膜层,并进行细胞计数。 编号后进行流式抗体的染色(CD64-FITC,天津三箭 公司;CD15-PE,天津三箭公司)。加入相应剂量的流 式荧光抗体后4 ̄C避光9呼育30 min,PBS洗涤细胞 3次后上机检测。 3.3.2荧光显微镜下观察 将染色完成后的细胞用4%多聚甲醛固定15 min, cence intensities and calculated indexes,Mediators lnfl- annn.,2008:202646 Hemeda M.,Maher A.,and Mabrouk A.,2003,Epidemiology of burns admitted to Ain Shams University burns unit,Cairo, Egypt,Burns,29(4):353-358 Hart D.W.,WO1f S.E.,Mlcak R.,Chinkes D.L.,Ramzy P.I., Obeng M.K.,Fe ̄ando A.A.,Wolfe R.R.,and Herndon D.N., 2000,Persistence of muscle catabolism after severe bum, 固定完成后1 500 r/min离心6 min,弃上清后加入 DAPI染液进行核染5-10 min,之后用PBS洗涤 Surgery,128(2):3 12・3 l9 Kowalik K.,Czeszynska M.B.,and Celewicz Z.,2003,Evalua— 1遍后弃上清,用管壁自然回流的液体重悬细胞沉 淀,取l0 LLL细胞悬液滴于载玻片上,用盖玻片铺匀 细胞后进行镜下观察,注意全程避光。 3.3-3统计学分析 采用SPSS 16.0统计学软件进行数据分析,计量 资料采用均数±标准差 )表示,用t检验进行统计 学分析,p<0.05则表示差异有统计学意义。 作者贡献 高兴新是本研究的实验设计和实验研究的执行 人,并完成数据分析,论文初稿的写作;杨磊参与实 验设计、实验结果分析;杜刚是项目的构思者及负责 人,指导实验设计,数据分析,论文写作与修改。全体 作者都阅读并同意最终的文本。 致谢 本研究由广西自然基金(2014GXNSFBA1181771 和广西教育厅(KY2015YB071)共同资助。 参考文献 Groselj—Grenc M.,Ihan A.,and Derganc M.,2008,Neutrophil and monocyte CD64 and CD 1 63 expression in critically ill neonates and children with sepsis:comparison of fluores— tion of diagnostic usefulness of the cord blood TNF—alpha levels as a marker of early onset neonaml infection,Gineko1. 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