基因工程习题与考纲

第一章

1、基因工程的含义及其基本环节包括哪些

2、基因工程的基本条件及各自的作用有哪些

3、基因工程的基本技术策略及其具体实施方案

第二章

1、限制修饰系统及其在基因工程中的应用

2、限制性内切酶含义及其类型

3、限制性内切酶II为何是DNA重组技术中最常用的工具酶？它具有哪些特性？

4、同切点酶、同尾酶的含义及其在基因工程中的应用

5、限制性内切酶的星活性及其在使用过程中如何加以避免

6、DNA分子的完全酶切消化和部分酶切消化含义及其应用

7、DNA连接酶含义及其催化的连接反应特点有哪些

8、大肠杆菌DNA聚合酶I有哪些不同的酶活力特性，各有何利用价值？

9、Klenow片段和DNA poly I 有何异同

10、为什么说反转录酶是一种特殊的DNA聚合酶，其主要作用是什么

11、末端脱氧核苷酸转移酶、T4多核苷酸激酶以及碱性磷酸酶的含义及其在基因工程中的应用

12、核糖核酸酶H的含义及其应用

13、如何正确利用各种核酸酶从mRNA获得双链cDNA

第三章

1、载体的含义及其功能类型

2、克隆载体的基本条件及其主要类型

3、根据质粒在宿主细胞中的拷贝数，可将质粒的复制方式分为哪些类型，在应用上有何区别？

4、质粒的不相容性的含义

5、天然质粒往往需要哪些方面的改造才能成为合适的克隆载体

6、指出常用质粒载体pBR322与PUC18之间的差异，并列出pUC18载体的优点

7、TA载体的含义及其应用

8、λ噬菌体载体类型及其应用上的差别

9、cosmid载体由哪些要素组成，如何使用该载体？

10、表达载体的含义及其主要类型

11、原核表达载体包括哪些表达元件，各有何作用

12、穿梭载体的含义，为什么说真核表达载体多为穿梭载体

13、Ti质粒表达载体的含义以及双元Ti质粒表达载体的使用程序

14、RNAi的含义以及转基因RNAi载体和VIGS载体结构上有哪些不同，

第四章

1、凝胶电泳的含义及其影响因素

2、聚丙烯酰胺凝胶电泳与脉冲电场凝胶电泳的含义以及二者之间的主要差异

3、核酸分子杂交的含义及其意义

4、如何采用切口平移法均匀标记探针

5、在核酸分子杂交中，非放射性标记物有哪些，如何进行检测

6、Southern杂交与Northern杂交的含义及其异同点

7、PCR技术原理及其基本成分与基本过程如何

8、PCR平台效应及其影响因素

9、引物的含义与设计原则

10、逆转录PCR、锚定PCR、反向PCR、巢式PCR、原位PCR、多重PCR、不对称PCR、实时定量PCR的含义

11、Sanger双脱氧链终止法测序的基本原理

12、基因定点诱变的含义以及重组PCR定点突变的具体过程

13、酵母单杂交系统、凝胶阻滞试验、DNAaseI足迹试验

第五章

1、简并序列的含义以及如何减低一段氨基酸序列的简并度

2、基因文库的含义及两种不同基因文库类型之间的区别

3、构建基因组文库时为何要考虑基因组信息的可重建性以及如何才能满足这一条件。

4、λ噬菌体载体文库的构建应包括哪些步骤，λDNA离体包装蛋白是怎样制备的，为什么包装蛋白要分成两个部分

5、已知某一个DNA的部分核苷酸序列，如何从含有百万个重组克隆的基因组文库中筛选一个含有特定目的基因的重组克隆？

6、如果已知了某一蛋白的氨基酸序列，请设计几种方法分离该蛋白质的cDNA序列。

7、具体描述一种根据基因差异表达获得目的基因的方法

第六章

1、DNA体外重组的含义

2、如何将一平末端的DNA与BamHI形成的粘性末端连接

3、某一质粒载体有Tetr和ampr的表型，在Ampr中有一个EcoRI的酶切位点，先用EcoRI切割载体进行基因重组，那么如何用抗性变化筛选含有插入片段的重组体

第七章

1、启动子、增强子、沉默子、终止子、衰减子、核基质结合区以及SD序列

2、启动子和增强子有哪些异同点

3、能影响染色体上DNA结构的三种顺式作用元件是什么，能影响基因转录起始的顺

式作用元件是哪些，影响基因转录终止的顺式作用元件是哪些

4、什么是密码子的偏爱性，在外源基因的表达中有什么应用

5、按功能和作用方式分，启动子可以分为几种类型，每一种类型的启动子各有什么特点

第十章

1、基因漂移、生物安全性评价、实质等同性原则、个案分析原则

基因漂移：指转基因生物中的目标基因，在生物的个体、种群甚至是物种间自发移动的过程。

生物安全：指转基因技术及遗传修饰体对动植物、人类健康及遗传资源和环境造成不利影响甚至危害的安全问题。

实质等同性原则：是安全评价的起点，是指以有安全食用历史的传统食品为基础，要求转基因食品和它所替代的传统食品至少要同样安全。

个案分析原则：个案分析原则主要针对不同基因、不同转化事件、不同环境条件的个案分析。

2、 什么是生物安全管理？目前有哪些管理模式，各有什么特点

转基因技术及遗传修饰体会对动植物、人类健康及遗传资源和环境造成不利影响甚至

危害，为了预防和控制这些不利影响采取的一系列措施就是生物安全管理。

① 宽松型的管理模式：以美国和加拿大为代表，其管理原则是转基因生物及其产品与非转基因生物及其产品没有本质的区别。

② 严厉性的管理模式：以欧盟国家为代表，其管理原则是首先假定转基因生物及其产品有潜在的危险，所有与其有关的活动都要进行严格的管理，并针对基因工程技术制定新的法规。

③ 中庸型的管理模式：除上述国家外，世界上大多数国家的管理法则和条例处于正在逐步建立的过程中，既不宽松也不严厉。