人血浆中尿酸及嘌呤物质的含量测定

尿酸是体内嘌呤和核酸物质的最终代谢产物，正常情况下血中尿酸浓度为20-60mg/L，当尿酸浓度过高时，常常引起痛风、肾结石、高血压和冠心病等，因此监测体内尿酸的浓度是非常必要。目前临床上测定尿酸的含量多采用尿酸酶法，但由于血浆中黄嘌呤、抗坏血酸和自由基的影响，使尿酸浓度测定结果误差较大，本文建立了高效液相色谱法和液相色谱/同位素稀释质谱法同时测定人血浆中尿酸和嘌呤物质的含量。

第一部分反相高效液相色谱法同时测定人血浆六种嘌呤物质的含量目的：建立同时测定血浆中6种嘌呤物质的高效液相色谱法，比较正常人与白血病和肝硬化患者血浆中6种嘌呤的含量差异，考察它们与白血病（Leukemia）和肝硬化（liver cirrhosis）疾病的关系。方法：色谱柱：Phenomenex C18(250mm×4.6mm,5μm)；流动相：50mmol/L醋酸铵（pH4.65）-甲醇（99:1，v/v）；流速：1mL/min；检测波长：254nm；柱温：30℃；进样量：100μL。

结果：尿酸、次黄嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤、别嘌呤醇、腺嘌呤相邻峰之间的分离度分别为：5.39、1.64、3.56、5.45、5.39。尿酸在0.5-20μg/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数r=0.9997；次黄嘌呤、腺嘌呤、黄嘌呤和别嘌呤醇在0.005-0.3μg/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数r分别为0.9998、0.9993、0.9999和0.9993；鸟嘌呤在0.015-0.3μg/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数r=0.9971。

结论：白血病和肝硬化患者血浆中的尿酸、次黄嘌呤和黄嘌呤含量明显高于正常人，腺嘌呤和鸟嘌呤无明显差异。第二部分高效液相/同位素稀释质谱法测定血浆中的尿酸及嘌呤物质目的：建立液相色谱/同位素稀释质谱法同时测定人

血浆中尿酸、黄嘌呤和别嘌呤醇含量的方法。

方法：以[1,3-15N2]尿酸和[1,3-15N2]黄嘌呤为内标，乙腈为血浆蛋白沉淀剂，用电喷雾离子源的三重四极杆质谱仪，选择离子监测(SIM)模式检测目标离子（负离子模式，[1,3-15N2]尿酸:M/Z169；尿酸M/Z:167；[1,3-15N2]黄嘌呤:153；黄嘌呤M/Z：151；别嘌呤醇M/Z：135）,用峰高内标法定量。结果：尿酸在25-1028μmol/L浓度范围内线性关系良好，相关系数r=0.9989；黄嘌呤和别嘌呤醇在10-400μmol/L浓度范围内线性关系良好，相关系数r分别为0.9985、0.9951。

用建立的两种方法对5个相同样品进行测定，测定结果基本一致。结论：高效液相色谱法可准确测定血浆中的尿酸及嘌呤物质的含量。