小麦染色体2DS雌性育性位点的连锁不平衡分析

新疆农业大学学报２００９，３２（２）：２８￣３３　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　文章编号：１００７—８６１４（２００９）０２—００２８—０６　小麦染色体２　ＤＳ雌性育性位点的连锁不平衡分析　侯北伟　，窦秉德　，张新玲　，王　芳　，朱晓滨　。，徐海明。　（１．淮阴师范学院植物生物技术研究所，江苏省环洪泽湖生态农业生物技术重点实验室，淮安２２３３００；２．新疆农　业大学农学院，乌鲁木齐８３００５２；３．浙江大学农业与生物技术学院，杭州３１００２９）　摘　要：　小麦生态遗传型雌性不育系ＸＮＤ１２６的育性受两对主效基因和微效多基因联合控制。通过ＳＳＲ分子标　记连锁分析，在２ＤＳ上定位了一个主基因位点。为了精细定位该位点，并验证其真实性，在５９个育性正常的普通　小麦品种（系）与ＸＮＤ１２６组成的较小自然群体中，用２ＤＳ参考连锁图上的１４对ＳＳＲ研究了标记与位点间的连锁　不平衡（ＬＤ）程度，发现所有标记均存在ＬＤ现象，并找到了与ＸＮＤ１２６多态性高的品种（系），作为进一步精细定　位的研究材料。依据连锁分析结果，对２６０个品种（系）与ＸＮＤ１２６组成的较大自然群体的连锁不平衡研究发现，　主效基因位点与其最近的标记Ｘｂａｒｃ９５间的ＬＤ值最大，Ｉ　Ｄ衰减在大群体中同样存在，进一步表明雌性育性主基　因位点的确存在于２ＤＳ。提示利用连锁分析和关联分析相结合策略进行ＱＴＩ　精确定位是一种有益的尝试。　关键词：小麦；雌性不育；ＳＳＲ标记；连锁不平衡；自然群体　中图分类号：Ｓ５１２．０３２　文献标识码：Ａ　Ｌｉｎｋａｇｅ　Ｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｆｅｍａｌｅ　Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ　Ｌｏｃｕｓ　ｏｎ　Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　２ＤＳ　ｉｎ　Ｗｈｅａｔ（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ　ａｅｓｔｉｖｕｍ　Ｌ．）　ＨＯＵ　Ｂｅｉ—ｗｅｉ　，ＤＯＵ　Ｂｉｎｇ—ｄｅ　，ＺＮＡＨＧ　Ｘｉｎ—ｌｉｎｇ　，　ＷＡＮＧ　Ｆａｎｇ　。ＺＨＵ　Ｘｉａｏ—ｂｉｎ　。ＸＵ　Ｈａｉ—ｍｉｎｇ。　（１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊｉａｎｇｓｕ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｅｃｏ—Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａ—　ｒｏｕｎｄ　Ｈｏｎｇｚｅ　Ｌａｋｅ，Ｈｕａｉｙｉｎ　Ｔｅａｃｈｅｒｓ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｈｕａｉ’ａｎ　２２３３００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｇｒｏｎｏｍｙ，　Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ　８３００５２，Ｃｈｉｎａ；３．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈ—　ｎｏｌｏｇｙ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ　３１００２９，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｐｒｅｖｉｏｕｓ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ　ｔｈｅ　ｆｅｍａｌｅ　ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ　ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ　ｉｎ　ｗｈｅａｔ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｅｘｐｌａｉｎｅｄ　ｂｙ　ｔｗｏ—　ｍａｊｏｒ—ｇｅｎｅｓ　ｐｌｕｓ　ｐｏｌｙｇｅｎｅｓ　ｍｉｘｅｄ　ｍｏｄｅ１．Ｏｎｅ　ｍａｊｏｒ　ｌｏｃｕｓ，ｔａｆｌ，ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｏｎ　２ＤＳ　ｂｙ　ＳＳＲ　ｌｉｎｋａｇｅ　ａｎａｌ—　ｙｓｉｓ．Ｔｏ　ｆｉｎｅ　ｍａｐ　ｔｈｅ　ｍａｊｏｒ　ｌｏｃｕｓ　ａｎｄ　ｃｏｎｆｉｒｍ　ｔｈｅ　ｌｉｎｋａｇｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｒｅｓｕｌｔ，ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ＸＮＤ１２６　ａｎｄ　５９　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｏｆ　ｃｏｍｍｏｎ　ｗｈｅａｔ　ｗｅｒｅ　ａｓｓａｙｅｄ　ｗｉｔｈ　１４　ＳＳＲ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｏｎ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｍａｐ．Ａｓ　ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ，ｔｈｅ　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｌｉｎｅｓ　ｈｉｇｈｌｙ　ｄｉｖｅｒｓｅ　ｗｉｔｈ　ＸＮＤ１２６　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ａｎｄ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｆｉｎｅ　ｍａｐｐｉｎｇ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ．Ｉｎｔｅｒｅｓｔｉｎｇｌｙ，ａｌｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　１４　ｍａｒｋｅｒｓ　ｄｉｓｐｌａｙｅｄ　ｌｉｎｋａｇｅ　ｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ（ＬＤ）ｗｉｔｈ　ｔｒａｉｔ　ｌｏｃｕｓ　ｔａｆ１．Ｔｈｅ　ＬＤ　ｗａｓ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ａ　ｌａｒｇｅｒ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　２６　１　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｔｈｅ　ｆｅｍａｌｅ　ｓｔｅｒｉｌｅ　ｌｉｎｅ．Ｔｈｅ　ｍａｘｉｍｕｍ　ｄｅｇｒｅｅ　ｏｆ　ＬＤ　ｗａｓ　ｆｏｕｎｄ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｌＯＣＵＳ　ｔａｆｌ　ａｎｄ　Ｘｂａｒｃ９５．ｔｈｅ　ｎｅａｒｅｓｔ　ｍａｒｋｅｒ　ｔｏ　ｔａｆｌ，ａｎｄ　ＬＤ　ｄｅｃａｙ　ｗａｓ　ｆｏｕｎｄ　ｂｏｔｈ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂｉｇｇｅｒ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｍａｌｌｅｒ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｔｈｅｓｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｔａｆｌ　ｗａｓ　ｈａｒｂｏｒｅｄ　ｏｎ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　２ＤＳ　ｉｎ　ｗｈｅａｔ．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ　ｔｈｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｃｏｍｂｉｎａ—　ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｉｎｋａｇｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ａｎｄ　ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｍａｙ　ｂｅ　ａｎ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｔｏｏｌ　ｆｏｒ　ＱＴＬ　ｆｉｎｅ　ｍａｐｐｉｎｇ　ａｎｄ　ｕｎｄｅｒ—　ｓｔａｎｄｉｎｇ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｆｅｍａｌｅ　ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ　ｉｎ　ｗｈｅａｔ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：　ｗｈｅａｔ；ｆｅｍａｌｅ　ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ；ＳＳＲ　ｍａｒｋｅｒ；ｌｉｎｋａｇｅ　ｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ；ｎａｔｕｒａｌ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　收稿日期：２００８—１２—２５　基金项目：国家自然科学基金项目（３０７７１３８０）　通讯作者：窦秉德，Ｅ—ｍａｉｌ：ｄｏｕｂｄ＠１６３．ｃｏｍ　第２期　侯北伟，等．／Ｊ、麦染色体２ＤＳ雌性育性位点的连锁不平衡分析　２９　小麦是雌雄同花的自交植物，雌雄育性都是重　要的生殖性状。雌雄不育性对于性别分化研究具有　重要的理论意义，对于杂种优势利用具有潜在的实　践意义＿１　］。对小麦雄性不育性的研究起步较早，　木原均　首次报道了合成的异源细胞质雄性不育　系。随后各类细胞核雄性不育（ＧＭＳ）、细胞质雄性　不育（ＣＭＳ）、光温敏感雄性不育等雄性不育材料相　继被发现报道ｌ６　］。而小麦雌性不育性发现的较　ｔａｆｌ间连锁不平衡值（，一　），试图认识分子标记与小　麦雌性育性位点间连锁不平衡关系。同时比较了正　常品种（系）与小麦雌性不育系ＸＮＤ１２６的多态性，　了解连锁分析与关联分析的相关性，以便分别在品　种组成的自然群体和杂交构建的实验群体中对小麦　雌性育性位点进行剖析，为小麦雌性育性的遗传研　究奠定基础。　晚，窦秉德等　报道了可自繁保种的小麦雌性不育　系ＸＮＤ１２６。它与育性正常小麦品种（系）杂交，其　Ｆ　育性正常，经自交Ｆ。育性分离，育性频数呈双峰　连续分布。用盖钧镒等的数量性状分离分析法４世　代联合分析表明，在３种不同生态型的小麦与雌性　不育系所配制的杂交组合中，小麦雌性育性均受两　对主效基因控制并有微效多基因修饰　］。选用冬性　杂交组合（藁城８９０１与ＸＮＤ１２６）的Ｆ　群体，基于　ＳＳＲ标记利用贝叶斯法对小麦雌性育性ＱＴＬ进行　了初步定位，在２ＤＳ连锁图谱上发现一个主效　ＱＴＬ位点ｔａｌｌ，位于Ｘｂａｒｃ９５和Ｘｇｗｍ２９６标记之　间，与Ｘｂａｒｅ９５标记紧密连锁，遗传距离３．４　ｃＭ。解　释２２．３５　的遗传变异【】　。随后通过增加连锁标记　继续分析，主效基因ｔａｆｌ的置信区间降到了　２．４　ｃＭ，遗传效应占表型效应的４４．９　Ｅｌ１　３。但是　标记与ｔａｌｌ的距离仍然过大，成为研究该位点的遗　传效应的主要障碍。　自Ｔｈｏｒｎｓｅｒｒｙ等＿Ｊ　首次突破植物群体结构的　障碍将关联分析成功引入玉米开花期变异的研究以　来，关联分析是新近开始在植物数量性状研究和植　物育种中应用的一种分析方法，具有周期短、广度　大、精确度高、发现力强等特点Ⅲ１　］。它是以连锁　不平衡为基础鉴定某一自然群体内性状与遗传标记　或候选基因间的关系。连锁分析与关联分析在　ＱＴＬ定位的精度和广度、提供的信息量、统计分析　方法等方面具有明显的互补性。连锁分析是通过实　验设计的分离群体，初步定位控制目标性状等位基　因的位置，由于重组率有限，精确度不高，对于遗传　效应较小的位点发现力不足；而关联分析则是利用　历史上有效重组对目标基因进行定位，精确度高，发　现力强，但是由于群体结构的影响，容易出现假阳性　结果。结合两者的优点，分别从纵向和横向对数量　性状进行剖析，是ＱＴＬ精确定位的有效方法。　本研究选取我国不同小麦生态区的部分代表性　品种（系），构成由品种（系）组成的“自然”群体。在　基因组中雌性育性主效位点所在染色体区域进行分　子标记的多态性筛选，分别计算分子标记与位点　１材料与方法　１．１供试材料　小麦雌性不育系ＸＮＤ１２６，以及来自国内各生　态区的分属春性、冬性和强冬性３种不同生态型的　５９个育性正常的普通小麦品种（系）（表１）。另外增　加２０１个参试品种（系），分别来自淮阴师范学院植　物生物技术研究所和淮安市农科院所收集的全国各　地品种（系）。　表１参试的普通小麦品种（系）及其来源　Ｔａｂｌｅｌ　Ｔｈｅ　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ（１ｉｎｅｓ）ｉｎ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ’ｓｏｕｒｃｅ　生态型　普通小麦品种　来源　强冬性盏警　。　，　，冬新疆农科院　３Ｏ　新疆农业大学学报　２００９年　１．２供试标记　２００５年定位组合（藁城８９０１×ＸＮＤ１２６）的双　亲间在２ＤＳ连锁图上共发现５个多态性标记，目标　位点ｔａｆｌ位于Ｘｂａｒｅ９５和Ｘｇｗｍ２９６标记之间，在　Ｘｂａｒｃ９５标记一侧由近而远分别为Ｘｇｗｍ２６１、　Ｘｗｍｃ５０３、Ｘｃｆｄ５３标记（图１）。根据Ｒｏｄｅｒ实验室　发表的ＳＳＲ标记引物序列及小麦资源网（ｈｔｔｐ：／／　ｗｈｅａｔ．ｐｗ．ｕｓｄａ．ｇｏｖ）２Ｄ染色体的参考遗传图　谱口　，以与ｔａｆｌ相连锁的５个标记为对象分别向两　侧１０　ｅＭ区域内选取ＳＳＲ标记。连同５个已有的　连锁标记共计选取了１４个ＳＳＲ标记进行分析（表　２）。引物由上海生工合成。　０．０　Ｘｃｆｄ５３　２４．７　Ｘｗｍｃ５０３　３０．９　Ｘｇｗｍ２６１　４２．０　Ｘｂａｒｅ９５　７８．６　Ｘｇｗｍ２９６　图１藁城８９０１×ＸＮＤ１２６所配组合所构建的染色体２ＤＳ　遗传图谱　Ｆｉｇ．１　Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｍａｐ　ｏｆ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　２ＤＳ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｃｒｏｓｓ　Ｇａｏｃｈｅｎｇ８９０１×ＸＮＤ１２６　襄２　１４对ＳＳＲ标记与雌性育性位点ｔａｆｔ问ＬＤ值　Ｔａｂｌｅ　２　Ｔｈｅ　ｄｅｇｒｅｅ　ｏｆ　ＬＤ　ｂｅｔｗｅｅｎ　１４　ｐａｉｒｓ　ｏｆ　ＳＳＲ　ｍａｒｋｅｒｓ　ａｎｄ　ｆｅｍａｌｅ　ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ　ＱＴＬ　ｔａｆｔ　＊：为２００５年原组合（藁城８９０１×ＸＮＤ１２６）所作连锁图上　的标记。　１．３方法　１．３．１　ＤＮＡ提取　采取ＣＴＡＢ法提取基因组ＤＮＡ，将雌性不育　系ＸＮＤ１２６及共２６０个（含表１所示５９个）普通小　麦品种（系）的叶片分别用液氮在研钵中磨碎，分别　装在１．５ｍＬ的ＥＰ管中（不超过ＥＰ管的２／３），参　照Ｈｏｉｓｉｎｇｔｏｎ的程序，提取ＤＮＡ，用紫外分光光度　计测Ａ　。　／Ａ　‰　的光吸收值，计算ＤＮＡ的浓度并　分析其纯度［１　。　１．３．２　ＳＳＲ分析　ＰＣＲ反应在１０　Ｉ二的体系中进行，其中包含　１０　ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｔｒｉｓ—ＨＣ１，ｐＨ８．３；５Ｏ　ｍｍｏｌ／Ｌ　ＫＣＩ；　２．０　ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣ１２；２００／￣ｍｏｌ／Ｌ　ｄＮＴＰｓ；５０　ｎｇ引　物；５Ｏ　ｎｇ模板ＤＮＡ和１　Ｕ　Ｔａｑ酶。ＰＣＲ反应在　Ｍｏｄｅｌ　Ｍｙ　Ｇｒａｄｉｅｎｔ上进行。　ＰＣＲ扩增程序为　以９４℃预变性４　ｍｉｎ；然后　９４℃变性１　ｍｉｎ，５０￣６０℃退火（因不同引物而异）　１　ｍｉｎ，７２℃延伸２ｍｉｎ进行４５个循环；之后７２℃延　伸１０　ｒａｉｎ；最后４℃保存。　采用８　（ｗ／ｖ）聚丙烯酰胺凝胶（Ａｃｒ：Ｂｉｓ＝　３９：１）电泳和银染显色检测ＤＮＡ条带多态性［１引。　１．４数据处理　１．４．１　多态性分析　统计２ＤＳ染色体上１４个ＳＳＲ参考标记在５９　个普通小麦品种（系）与雌性不育系ＸＮＤ１２６之间　的带型差异，无差异赋值为“０”，有差异赋值为“１”，　通过Ｅｘｃｅｌ软件统计参试品种（系）与雌性不育系　ＸＮＤ１２６间的多态性标记数目。　１．４．２连锁不平衡（ＬＤ）值计算　连锁不平衡值（ｒ２）计算时，Ｄ是基本成分。若　连锁的两个座位上的等位基因和标记分别为Ｑ，ｑ　和Ｍ，ｍ，组成的单倍型有ＱＭ，　，ｑＭ和ｑｍ共４　种，－厂（ｚ）为各种等位基因和单倍型的频率口　，则：　Ｄ＝ｆ（ＱＭ）一ｆ（Ｑ）×ｆ（Ｍ）　（１）　ｒ　一Ｄ。／（户Ｑ×Ｐ　×Ｐ．Ｍ×Ｐ．　）　（２）　参照公式（１）、（２），假设育性正常的小麦目标位　点ｔａｆｌ的基因型为ＱＱ，而雌性不育系基因型为　ｑｑ，分别计算各分子标记与目标位点的ＬＤ值（ｒ。）。　２结果与分析　由组合（藁城８９０１×ＸＮＤ１２６）Ｆ２于２ＯＯ５年所　构建的２ＤＳ遗传连锁图谱上标记之间的遗传距离　均比较大（图１，＞５　ｃＭ）。根据各对引物扩增产物　在各品种（系）与ＸＮＤ１２６带型的差异，对标记及品　种（系）的多态性分别分析。　２．１标记的多态性分析　２．１．１　分子标记与ｔａｆｌ的ＬＤ值　在包含ＸＮＤ１２６的６Ｏ个品种（系）组成的小群　第２期　侯北伟，等：小麦染色体２ＤＳ雌性育性位点的连锁不平衡分析　１　０　０　０　Ｏ　０　３１　体中，ｌ４个标记在小麦雌性不育系ＸＮＤ１２６和育性　正常材料间的多态性大部分都较高（表２），多数标　记的多态性品种（系）数目都超过一半，只有　Ｘｃｆｄ５３、Ｘｗｍｃｌ１２两个标记多态性品种（系）数相对　较低（≤５０　），Ｉ　Ｄ值较小；而Ｘｂａｒｃ９５及Ｘｇ—　ｗｍ２９６多态性品种（系）数最高（９８．３　），ＬＤ值亦　较大。　可以看出，离目标ＱＴＬ位点较近的标记（如　Ｘｂａｒｃ９５）则有较多的多态性品种（系）（９８．３　），标　记与位点ｔａｆｌ间ＬＤ值也相对较大，而原连锁图上　较远的标记（如Ｘｃｄｆ５３）则ＬＤ值较小，连锁不平衡　程度也较低，但所有２ＤＳ上的标记都存在连锁不平　衡现象，说明位点ｔａｆｌ存在于染色体２ＤＳ。　２．１．２　分子标记的连锁不平衡衰减　选取原连锁图上的５个标记，另外增加２０１个　品种（系），构成了一个２６１个品种（系）的大群体，　在２６０个普通小麦品种（系）与雌性不育系间观察标　记的多态性，计算ＬＤ值并与小群体作图比较　（图２）。　＋２６１个品种（系）大群体ＬＤ衰减　＋６０个品种（系）小群体ＬＤ衰减　一４５．４　—２０．７　一ｌ４．５　—３．４　０　３３．２　各标记与ｔａｆｌ位点间的遗传距离（ｃＭ）　图２大小样本自然群体的Ｉ　Ｄ衰减图　Ｆｉｇ．２　Ｄｅｃａｙ　ｏｆ　ＬＤ　ｗｉｔｈ　ｔｗｏ　ｎａｔｕｒａｌ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　实验发现大群体中Ｘｗｍｃ５０３标记的多态性品　种（系）数目最小（８１），ＬＤ值为０．００２，Ｘｇｗｍ２６１，　Ｘｃｆｄ５３标记的ＬＤ值分别为０．００３，０．００６，与　Ｘｗｍｃ５０３标记处于相同的ＬＤ数量级。而Ｘｇ—　ｗｍ２９６，Ｘｂａｒｃ９５的ＬＤ值相对较高，分别为０．１９８，　０．２４８。在大群体中仍然发现，离目标基因位点较近　的标记（Ｘｂａｒｃ９５）ＬＤ值较大，反之亦然。由于自然　群体的种质构成，群体大小的差异及群体结构的影　响，ＬＤ衰减速度不同（即同一标记在不同群体中的　ＬＤ值有一定的差异），可能是导致大群体Ｉ　Ｄ衰减　比小群体快的主要原因，但两群体ＬＤ衰减总体趋　势是一致的（图２），验证了ｔａｆｌ存在于２ＤＳ上各标　记间的真实性。同时说明了选择适当的群体，较合　０∞　∞　∞　∞　加　∞　　０　０　０　Ｏ　０　适的群体大小以及群体结构对校正ＬＤ分析的必要　性。实验群体分析中得到的与位点ｔａｌｌ最近的标　记，在自然群体中的Ｉ　Ｄ值仍不是太大，故有必要寻　找具有更大ＬＤ值的标记，结合连锁分析进行精细　定位。　２．２品种（系）的多态性分析　由ＰＣＲ扩增结果可知，各品种（系）与雌性不育　系间多态性分子标记数差异明显，有些品种（系）多　态性分子标记数目相对较高，而有些品种（系）相对　较低。对３类生态型小麦品种（系），分别依据多态　性标记数，比较了品种（系）之间的多态性，多态性较　高的品种（系）见表３。　表３　小麦不同生态类型中与雌性不育系多态性相对较高　的品种（系）　Ｔａｂｌｅ　３　Ｔｈｅ　ｈｉｇｈ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｃｏｔｙｐｅ　ｃｏｍ－　ｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｆｅｍａｌｅ　ｓｔｅｒｉｌｅ　ｌｉｎｅ　ｉｎ　ｗｈｅａｔ　在１５个春性品种（系）中有４个品种（系）的多　态性较高，１４个标记中有１２个标记呈现多态性（占　８５．７　）。在３６个冬性品种（系）中有６个品种（系）　的多态性较高，其中４个品种（系）有１３个标记呈现　多态性（占９２．９　），２个品种（系）有１２个标记呈现　多态性（占８５．７　）。而在８个强冬性品种（系）中　只有２个品种（系）的多态性较高，１２个标记呈现多　态性，多态性标记达８５．７　。　２００７年组合（藁城８９０１×ＸＮＤ１２６）定位的结　果表明，连锁的９个标记使得主效基因ｔａｆｌ的置信　区间降到了２．４　ｃＭ，遗传效应占表型效应的　４４．９　＿１　。本次实验选出的１２个生态型的品种　（系），与雌性不育系有更大的遗传差异。显然，利用　这些品种（系）与ＸＮＤ１２６构建的群体将有助于构　ｎｎ　新疆农业大学学报　２００９年　建更高密度的遗传图谱，从而对主效基因位点ｔａｌｌ　最近，而与标记Ｘｃｆｄ５３最远［１。。。本实验利用包括　的位点和效应做更准确深入研究。　雌性不育系和５９个品种（系）组成的自然群体共　６Ｏ份材料，在分子标记的分析结果中发现，标记　３讨论　Ｘｂａｒｃ９５与雌性育性位点ｔａｆｌ之间连锁不平衡程度　基因的精细定位与诸多关键因素有关，选择在　较大，而标记Ｘｃｆｄ５３与位点之间ＬＤ程度较小，这　目标区段多态性的亲本是关键。ＱＴＬ发现能力和　种标记的多态性分布规律在较大的自然群体（包括　图谱的分辨率则是ＱＴＬ分析的两个关键因子　。　雌性不育系的２６１个品种（系））中同样存在，这种标　Ｎａｄｅａｕ等＿２　报道了ＱＴＬ估计的精确度与图谱分　记与雌性育性主效基因位点连锁不平衡程度的大小　辨率直接相关，试验杂交的设计可能影响精确度。　在一定程度上说明了在品种（系）演化过程中标记位　Ｐａｔｅｒｓｏｎ等＿２　认为增加标记数，缩短目标区段内标　点和基因位点间可能的紧密连锁关系，尽管雌性不　记的间距是基因精确定位的基础。阮成江等＿２。　提　育突变等位基因位点在群体中以较低频率出现，但　出选择数量性状差异大的亲本，着眼于重要染色体　其较高的外现率同样哥被检测到。突变和重组是形　区间的检测，可能提高ＱＴＬ定位精确性的途径。　成ＬＤ的重要因素，生物因素和历史因素则影响ＬＤ　本研究通过比较品种（系）与ＸＮＤ１２６之间多态性，　的程度和分布。例如物种的异交率，即交配体系、染　５９个正常品种（系）中有１２个品种（系）的多态性较　色体位置、群体大小、基因或染色体片段所受的选择　高。杂交亲本间ＱＴＬ主效位点ｔａｆｌ区段多态性越　强度、遗传漂变等均能影响ＬＤ程度＿２　。尽管群体　高，多态性标记越多，遗传图谱就越密。通过２００５　结构影响结果真实性，同一标记在不同群体中的　年实验群体（藁城８９０１　Ｘ　ＸＮＤ１２６）Ｆ　构建的２ＤＳ　ＬＤ值有差异，但由于本实验基因位点信息来自于　遗传图谱只有５个多态性标记，而经过筛选的多态　实验群体，可以认为不存在假阳性，只是说明群体大　性高的品种（系）一般都有１２～１３个多态性参考标　小和结构需要调整而已，故认为ｔａｆｌ存在于染色体　记，这将大大提高图谱的分辨率，进而提高ｔａｌｌ位　２ＤＳ是真实的。同时发现，最近的标记在两群体中　点定位的精确度，这一结论在２００７年实验群体（藁　的ＬＤ值都不接近１，因此为了能精确定位ＱＴＬ主　城８９０１ＸＸＮＤ１２６）Ｆ２中得到了验证。选择不同生　效位点ｔａｆｌ，有必要寻找具有更大ＬＤ值标记。ＬＤ　态型的１２个多态性较高的品种（系）做杂交亲本，构　是关联分析的基础和前提，选择ＬＤ程度高的群体　建定位群体，将可能会更有利于位点ｔａｆｌ的精细定　如具有瓶颈效应的群体有利于全基因组的检测，结　位，而且在不同生态型的遗传背景下，共有亲本的多　合连锁分析和关联分析的优点，则有利于特定位点　组合定位分析更有利于全面揭示数量性状的遗传基　的发现和精细定位研究口引。因此结合杂交分离群　础　。　体初步定位的结果，同时用品种（系）组成的自然群　自然群体中的关联分析，是发掘可能的目标基　体进行基因定位是一种有益的尝试＿２　，而且这种定　因及其等位变异的有效手段。利用冬性组合藁城　位对于优良亲本的选配及后代的标记辅助选择具有　８９０１×ＸＮＤ１２６衍生的实验群体对小麦雌性育性　更实际的意义。　ＱＴＬ定位结果显示主效位点ｔａｆｌ与标记Ｘｂａｒｃ９５　参考文献：　［１］Ｂｕｄａｒ　Ｆ，Ｔｏｕｚｅｔ　Ｐ，Ｄｅ　Ｐａｅｐｅ　Ｒ．Ｔｈｅ　ｎｕｃｌｅｏ—ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ　ｃｏｎｆｌｉｃｔ　ｉｎ　ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ　ｍａｌｅ　ｓｔｅｒｉｌｉｔｉｅｓ　ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，　２００３，１ｌ７（１）：３－１６．　［２３　Ｇｉａｎｃｏｌａ　Ｓ，Ｒａｏ　Ｙ，Ｃｈａｉｌｌｏｕ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｏｇｕｒａ　ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ　ｍａｌｅ　ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ　ｉｎ　Ｅｕｒｏｐｅａｎ　ｎａｔｕｒａｌ　ｐｏｐ～　ｕｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｒａｐｈａｎｕｓ　ｒａｐｈａｎｉｓｔｒｕｍ［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒ　Ａｐｐｌ　Ｇｅｎｅｔ，２００７，１１４：１３３３—１３４３．　［３］Ｄｅｌｐｈ　Ｌ　Ｆ．Ｓｅｘｕａｌ　ｄｉｍｏｒｐｈｉｓｍ　ｉｎ　ｇｅｎｄｅｒ　ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｆｏｒ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ｓｙｓｔｅｍ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２００３，５（１）：３４—３９．　．　［４］Ｃｈａｒｌｅｓｗｏｒｔｈ　Ｂ．Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｅｘ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９１，２５１：１０３０—１０３３．　［５］Ｋｉｎａｒａ　Ｈ．Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｕｃｌｅｕｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｇｅｎｏｍｅ　ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｃｙｔｏｌｏｇｉａ，１９５１，１６：１７７—１９３．　［６］邓景扬，高忠丽．太谷核不育小麦的发现、鉴定及利用［Ｊ］．山西农业科学，１９８２，（１）：６－１２．　［７］秦娜，张立平，田自华，等．小麦雄性不育遗传及基因工程方面研究进展［Ｊ］．华北农学报，２００５，２０（Ｓ）：１０７—１１２．　［８］窦秉德，张新玲，马林，等．普通小麦中一种雌性不育现象的观察［Ｊ］．作物学报，２００１，２７（６）：１０１３—１０１６．　第２期　侯北伟，等：小麦染色体２ＤＳ雌性育性位点的连锁不平衡分析　３３　［９］　侯北伟，窦秉德，章元明，等．小麦雌性育性的主基因＋多基因混合遗传分析［Ｊ］．遗传，２００６，２８（１２）：１５６７—１５７２．　［１Ｏ］　Ｈｏｕ　Ｂ　Ｗ，Ｙａｎｇ　Ｊ　Ｂ，Ｗａｎｇ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ｂａｙｅｓｉａｎ　ｍａｐｐｉｎｇ　ｏｆ　ＱＴＬ　ｆｏｒ　ｆｅｍａｌｅ　ｓｔｅｒｉｌｅ　ｉｎ　ｗｈｅａｔ（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ　ａｅｓｔｉｖｕｍ　Ｌ．）［Ｒ］．　Ｔｈｅ　３ｒｄ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（Ａｂｓｔｒａｃｔ）．Ｈａｎｇｚｈｏｕ　Ｃｈｉｎａ，２００７：５３．　［１１］　Ｈｏｕ　Ｂ，Ｄｏｕ　Ｂ，Ｙａｎｇ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｍｉｎｉｎｇ　ｔｈｅ　ｆｅｍａｌｅ　ｓｔｅｒｉｌｅ　ｇｅｎｅ　ｉｎ　ｗｈｅａｔ（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍ　Ｌ．）［Ｒ］．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｎｇｒｅｓｓ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（Ａｂｓｔｒａｃｔ）．Ｂｅｒｌｉｎ　Ｇｅｒｍａｎｙ，２００８：Ａ一０６５—００３９—００７２４．　［１２］　Ｔｈｏｒｎｓｂｅｒｒｙ　Ｊ　Ｍ，Ｇｏｏｄｍａｎ　Ｍ　Ｍ，Ｄｏｅｂｌｅｙ　Ｊ，ａｔ　ａ１．Ｄｗａｒｆ　８　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅ　ｗｉｔｈ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｔｉｍｅ［Ｊ］．　Ｎａｔｕｒｅ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００１，２８：２８６—２８９．　ｎｔ—Ｇａｒｃｉａ　Ｓ　Ａ，Ｔｈｕｉｌｌｅｔ　Ａ　Ｃ，Ｙｕ　Ｊ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｍａｉｚｅ　ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ：ａ　ｈｉｇｈ—ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｐｌａｔｆｏｒｍ　ｆｏｒ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　［１３］　Ｆｌｉｔｒａｉｔ　ｌｏｃｕｓ　ｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｊ，２００５，４４：１０５４—１０６４．　［１４］　Ｆｌｉｎｔ—Ｇａｒｃｉａ　Ｓ　Ａ，Ｔｈｏｒｎｓｂｅｒｒｙ　Ｊ　Ｍ，Ｂｕｃｋｌｅｒ　Ｅ　Ｓ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｌｉｎｋａｇｅ　ｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ　ｉｎ　ｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ａｎｎｕ　Ｒｅｖ　Ｐｌａｎｔ　Ｂｉｏｌ，　２００３，５４：３５７—３７４．　Ｊ　Ｍ，Ｂｕｃｋｌｅｒ　Ｅ　Ｓ．Ｇｅｎｅｔｉｃ　ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｍａｐｐｉｎｇ　ａｎｄ　ｇｅｎｏｍｅ　ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍａｉｚｅ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ　Ｏｐｉｎ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００６，１７：　［１５］　Ｙｕ　１６．　．　［１６］　Ｒｏｄｅｒ　ＭＳ，Ｋｏｒｚｕｎ　Ｖ，Ｗｅｎｄｅｈａｋｅ　Ｋ．Ａ　ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ　ｍａｐ　ｏｆ　ｗｈｅａｔ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９９８，１４９：２００７—２０２３．　［１７］　Ｈｏｉｓｉｎｇｔｏｎ　Ｄ，Ｋｈａｉｒａｌｌａｈ　Ｍ，Ｇｏｎｚｄｌｅｚ　Ｄ　Ｌ　Ｄ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：ＣＩＭＭＹＴ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　［Ｐ］．ＣＩＭＭＹＴ，Ｍｅｘｉｃｏ．Ｄ　Ｆ，１９９４．　Ｓ　Ｂ，Ｔａｏ　Ｙ　Ｆ，Ｙａｎｇ　Ｚ　Ｑ，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｒａｐｉｄ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｓｉｌｖｅｒ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｇｅｌ　ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｈｅｒｅｄｉ—　［１８］　Ｘｕ　ｔａｓ，２００２，２４：３３５－３３６．　［１９］　Ｏｒａｇｕｚｉｅ　Ｎ　Ｃ，Ｒｉｋｋｅｒｉｎｋ　Ｅ　Ｈ　Ａ，Ｇａｒｄｉｎｅｒ　Ｓ　Ｅ，ｅｔ　ａ１．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｍａｐｐｉｎｇ　ｉｎ　ｐｌａｎｔｓ［Ｍ］．Ｎｅｗ　Ｚｅａｌａｎｄ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２００７．　ａ　Ａ　Ｂ，Ｒｏｎｉｎａ　Ｙ　Ｉ，Ｉｔｓｋｏｖｉｃｈａ　Ａ　Ｍ．Ｅｎｈａｎｃｅｄ　Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｏｆ　Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　Ｔｒａｉｔ　Ｌｏｃｉ　Ｍａｐｐｉｎｇ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　Ｂａｓｅｄ　ｏｎ　［２０］　ＫｏｒｏｌＭｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ　Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ　ｏｆ　Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　Ｔｒａｉｔｓ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００１，１５７：１７８９—１８０３．　［２１］　Ｎａｄｅａｕ　Ｊ　Ｈ，Ｆｒａｎｋｅｌ　Ｄ．Ｔｈｅ　ｒｏａｄｓ　ｆｒｏｍ　ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｔｏ　ｇｅｎｅ　ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ：ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ　ｖｅｒｓｕｓ　ＱＴＬ［Ｊ］．Ｎａｔ．Ｇｅｎ—　ｅｔ．，２０Ｏ０，２５：３８１—３８４．　ｎｉ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．Ｆｉｎｅ　Ｍａｐｐｉｎｇ　ｏｆ　Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　Ｔｒａｉｔ　Ｌｏｃｉ　Ｕｓｉｎｇ　Ｓｅｌｅｃｔｅｄ　Ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ　Ｒｅ—　［２２］　Ｐａｔｅｒｓｏｎ　Ａ　Ｈ，ＤｅＶｅｒｎａ　Ｊ　Ｗ，Ｌａｎｉｃｏｍｂｉｎａｎｔ　Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ，ｉｎ　ａｎ　Ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ　Ｃｒｏｓｓ　ｏｆ　Ｔｏｍａｔｏ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９９０，１２４：７９５—７４２．　［２３］　阮成江，何祯祥，钦佩．我国农作物ＱＴＩ　定位研究的现状和进展［Ｊ］．植物学通报，２００３，２０（１）：１０—２２．　　Ａ，Ｍａｎｇｉｎ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｎｎｅｃｔｅｄ　Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　Ｔｒａｉｔ　ｌｏｃｉ　ａｎｄ　Ｔｅｓｔｉｎｇ　ｆｏｒ　Ｅｐｉｓ—　［２４］　Ｂｌａｎｃ　Ｇ，Ｃｈａｒｃｏｓｓｅｔｔａｓｉｓ：ａｎ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｍａｉｚｅ［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒ　Ａｐｐｌ　Ｇｅｎｅｔ，２００６，ｌ１３：２０６—２２４．　［２５］　杨小红，严建兵，郑艳萍，等．植物数量性状关联分析研究进展［Ｊ］．作物学报，２００７，３３（４）：５２３—５３０．　［２６］　Ｉａｎ　Ｍａｃｋａｙ，Ｗａｙｎｅ　Ｐｏｗｅｌ１．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　Ｌｉｎｋａｇｅ　Ｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ　Ｍａｐｐｉｎｇ　ｉｎ　Ｃｒｏｐｓ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ　ｉｎ　Ｐｌａｎｔ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００７，　１２：１３６Ｏ一１３８５．