高效液相色谱仪流动相及样品的预处理

２０１０年第２３期　ＳＣＩＥＮＣＥ＆ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ　ＩＮＦＯＲＭＡＴＩＯＮ　Ｏ环保论坛０　科技信息　高效液相色谱仪流动相及样品的预处理　武开业　（榆林市环境监测总站陕西榆林７１９０００）　【摘要】液相色谱法是一种快速有效的有机化合物分析技术，在分析测定有机化合物方面，以其快速、灵敏、选择性好的特点，倍受分析工　作者青睐，是环境监测、卫生防疫、石油化工、食品生产等行业作为水质分析的标准仪器。但是，由于液相色谱分析技术涉及的样品种类繁多、样　品组成及其浓度复杂，样品物理形态多变，对液相色谱仪的正常分析测定造成一些干扰因素，如果不注意流动相及样品的预处理，会对日常的　分析测定带来不便．所以需要对流动相及样品的预处理进行专门的学习才能熟练掌握这种分析技术，得到让大家都满意的分析数据。　Ｉ关键词】液相色谱仪；流动相；样品；预处理　１　高效液相色谱仪的结构和原理　高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上．引用了气相色谱的理　３固相萃取ＳＰＥ技术　固相萃取技术是基于同液相色谱同样技术开发的分离复杂样品　论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达４．９　１０７Ｐａ）；色　中的不同组份的一种方法，一般实验室中６０—８０％的成本及工作量在　谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成．从而使柱效大大高于　样品制备上．若采用固相萃取技术可以加速样品的制备时间，降低样　经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）：同时桂后连有高灵敏　品前处理的成本，提高分析的准确性及回收率，更容易自动化，减少样　度的检测器，可对流出物进行连续检测。　品处理步骤．降低对不稳定样品的影响。　高效液相色谱仪主要由色谱泵及控制器、进样器、色谱柱、检测器　各种固相萃取小柱可以分为以下三类：　和数据处理及控制五大部分组成，分离原理是一个物理过程，流动相　３．１正相　携带着待分析化合物和其他一些共存物质流过色谱柱，利用不同物质　包括Ｓｉｌｉｃａ／Ｈｏｒｉｓｉｌ，ＮＨ２／Ｄｉｏｌ／ＣＮ，Ａｌｕｍｉｎａ等，可先用６到　１０倍柱体积的非极性溶剂使样品溶液平衡．然后加入样品，用非极性　在固定相上的保留时间不同，从而出峰时间不同而达到分离，利用保　留时间定性。峰高或者峰面积定量，在将分离后的各个成分依次通过　溶剂洗脱不想要的组份。接着用极性溶剂洗脱第一组感兴趣的组份，　一紫外检测器时就可检测出各化合物的浓度来。目前应用最广的是正　最后用极性更强的溶剂洗脱剩下的感兴趣的组份。　相色谱，即固定相的极性大于流动相的极性，它具有高效、快速、准确　３．２反相　包括Ｃｌ８／ｔ　Ｃｌ８／Ｃ８，ｔ　Ｃ　，Ｄｉｏｌ／ＮＨ２／ＣＮ等，可先用６到１Ｏ倍柱　的优点，适合分析各种组成的环境样品，若要分析复杂样品，需要先使　再用６到１Ｏ倍柱体积的水或缓冲液平衡，注　环境样品通过色谱前处理小柱，除去干扰物质以后才能通过色谱柱，　体积的甲醇或乙腈活化，这样才不会损坏柱子，并且平常需要做相关的维护和保养。　意不要让小柱干了，使样品溶解在一些强极性的溶剂中，然后加入样　品，用强极性溶剂洗脱不想要的组份，用极性弱些的溶剂洗脱第一组　２流动相的预处理　感兴趣的组份，最后用极性更弱的溶剂洗脱剩下的感兴趣的组份，确　认回收率。　２．１液相色谱对流动相的要求　３离子交换　除色谱柱对流动相的要求外，还要注意流动相与检测器匹配，流　３．包括Ａｃｃｅｌｌ　Ｐｌｕｓ　ＣＭ／ＡｃｃｅｌｌＨｕｓ　ＱＭＡ／ＮＨ２等，可先用６到１Ｏ　动相的脱气，注意卤素离子的吸附，调节溶剂粘度，防止细菌生长。　倍柱体积的去离子水或弱缓冲液平衡，使样品溶解在去离子水或弱缓　２．２流动相的脱气　用强一些缓冲　可以使色谱泵的输液准确，并且脉动减小，使保留时间以及峰面　冲液中，然后加入样品．用弱缓冲液洗脱不想要的组份，积的重现性提高；提高检测的性能，防止气泡引起的尖峰，使基线稳　液改变ｐＨ或离子强度洗脱第一组感兴趣的组份，最后用更强的缓冲　定，溶剂的紫外吸收本底降低；保护色谱柱，减少死体积，防止填料的　液洗脱剩下的感兴趣的组份　氧化。　流动相脱气的方法有：　加热：特点是简单，若同抽真空一起使用其效果很好，缺点是容易　造成流动相组成的变化　抽真空：特点是简单，一般在溶剂抽滤的同时也有脱气的效果。　４应用　以ｃ　小柱为例来分析固相萃取在样品分离中的应用，样品是一　种叫作Ｋｏｏｌ—Ａｉｄ葡萄饮料的混合物，ｃ　小柱先要用甲醇活化，然后　用水平衡，把样品载人小柱，糖有机酸等极性物质先流出，用乙醇，水　混合物洗出中等极性的红色染料，蓝色染料仍留在柱子内，最后用　超声波：简单但效果不理想　通惰性气体：一般用氦气，可保持连续脱气，多用于低压梯度。　２＿３样品的预处理　１ｏ０％乙醇洗出极性最弱的蓝色染料。ｅ　样品预处理可以除去微粒，减少干扰杂质，浓缩微量的组份，提高　【参考文献】　检测的灵敏度及选择性，改善分离的效果，有利于色谱柱及仪器的保　［１］傅若农，等．近代色谱分析．国防工业出版杜，１９９８．　［２］孙传经，等．毛细管色谱法．化学工业出版社，１９９１．　卢佩章．高效液相色谱．科学出版社。１９９８年１１月　样品预处理常用的方法有高速离心，过滤超滤，选择性沉淀，衍　［３］邹汉法，张玉奎，［４］李发美．医药高效液相色谱技术．人民卫生出版社，２０ｏ２年．　生反应，液一固萃取／液一液萃取，Ｓｅｐ—Ｐａｋ样品处理小柱等。　［５］许国旺．现代实用气相色谱分析法．化学工业出版社，２００４年６月．　护。　预处理的特点是所用时间远大于色谱分离的时间，占分析的消耗　总成本最大，消耗大量的溶剂及其他化学品，是实验的重复性及准确　性最差的环节，也是影响实验结果好坏的最重要因素。　［６］于世林＿高效液相色谱方法及应用．化学工业出版社，２００１年１月．　［责任编辑：常鹏飞］　（上接第１１５页）全竣工。　５＿３严格施工。　做好管道施工和监理队伍的建设，做好培训．按照铺设管道的施　监督机制，水源地保护机制，饮水安全监督机制等管理制度，确保供水　工技术规范，搞好供水管道的施工，沟槽开挖、沟槽尺寸、地质条件、管　基垫层、回填土、回填方式等方面要满足管道的要求，施工结束必须做　５．４供水工程要确权。　供水工程运营前要理顺产权关系，明晰责任，要建立严格的运营　工程长期有效的发挥效益。ｅ　好工程的验收工作。　［责任编辑：曹明明】　Ｉ１２