氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮比色法)

氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮比色法)简介：

氨基酸(Aminoacid，AA)是组成蛋白质的基本单位，也是蛋白质的分解产物。动物肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官，氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮比色法)(AminoAcidAssaykit)检测原理是在弱酸条件下，氨基酸与茚三酮共热情况下，能定量的产生蓝紫色的二酮茚胺(又称Ruhemans紫)，其吸收峰在波长570nm处，在一定范围内颜色深浅(即吸光度)与氨基酸浓度成正比。该试剂盒主要用于检测血清、尿液、植物组织、食品、药品等中的总游离氨基酸含量。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。组成：

编号名称TC2153100T1ml250ml120ml10.5ml2支Storage试剂(A):氨基酸标准(50μg/ml)试剂(B):AALysisbuffer试剂(C):茚三酮显色液试剂(D):AAAssaybuffer试剂(E):维生素C使用说明书4℃RTRT避光RTRT1份操作步骤(仅供参考)：

1、准备样品：①植物样品：取新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，按植物组织：AALysisbuffer=的比例加入AALysisbuffer匀浆或研磨，用去离子水稀释至，混匀，用滤纸过滤，滤液即为氨基酸粗提液，4℃保存备用。②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于氨基酸的检测。③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用AALysisbuffer进行适当匀浆，离心5min，留取上清即为氨基酸粗提液，4℃保存备用，用于氨基酸的检测。④高活性样品：如果样品中含有较高浓度的氨基酸，可以使用AALysisbuffer进行恰当的稀释。2、配制茚三酮工作液:取适量的茚三酮显色液、AAAssaybuffer，按茚三酮显色液：AAAssaybuffer=的比例混合，即为茚三酮工作液。4℃避光密闭保存，2周有效。3、配制维生素C工作液:取出1支维生素C，准确溶解于10ml去离子水，混匀。4℃预冷备用。-20℃保存1周有效。注意：该试剂盒提供的维生素C及其配制的工作液为过北京雷根生物技术有限公司

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4、配制系列氨基酸标准溶液：取出氨基酸标准(50μg/ml)恢复至室温后，以氨基酸标准(50μg/ml)按下表继续稀释：加入物(ml)氨基酸标准(50μg/ml)去离子水或无氨蒸馏水含氮量(μg)10.0080.9920.420.0160.9840.830.0240.9761.240.0320.9681.650.040.96025、AA加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的氨基酸浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。加入物(ml)去离子水或无氨蒸馏水系列氨基酸标准(1-5号管)待测样品茚三酮工作液维生素C工作液空白管0.8——1.20.4标准管—0.8—1.20.4测定管——0.81.20.4混匀，80℃中加热15min，迅速冷却。6、AA测定：当呈现蓝紫色时，补加60%乙醇至，混匀。立即以空白调零，分光光度计(1cm光径比色杯)测定570nm处吸光度。计算：

以系列氨基酸标准(1-5号管)含氮量为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，制作标准曲线，根据测定管的吸光度进而计算其含氮量。根据如下公式计算具体样品中氨基态氮的含量：植物组织样品AA(μg/g)=C×VT/(W×VS)式中：C=从标准曲线上查得的氨基态氮含量(μg)VT=样品稀释总体积(ml)=80W=样品鲜重(g)VS=测定时加入样品体积(ml)=0.8血清、尿液等样品AA(μg/ml)=C×N/VS

北京雷根生物技术有限公司注意事项：

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1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于4℃。2、氨基酸与茚三酮产生蓝紫色的二酮茚胺(又称Ruhemans紫)在1-1.5h内能保持稳定，故稀释后应尽快检测。3、AAAssaybuffer应密闭保存，防止挥发。4、空气中的氧气有可能干扰显色步骤，但维生素C不易加多，否则导致吸光度人为偏大。5、在80℃水浴中孵育加热，可使显色更为稳定。6、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，但应考虑酶标仪的最大检测体积。7、所测样本的浓度过高，应用AALysisbuffer稀释样品后重新测定。有效期：6个月有效。相关：

编号DF0135NR0001PS0013TO1013名称多聚甲醛溶液(4%PFA)DEPC处理水(0.1%)RIPA裂解液(强)丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)