化妆品的检验

1 化妆品的检验规则

1.1．基本术语

（1）常规检验项目。指每批产品必检的项目，包括理化指标、感官指标、卫生指标中 细菌总数、重量指标和外观要求。

（2）非常规检验项目。指非逐批检验的项目，如卫生指标中除细菌总数以外的其它项目。

（3）适当处理。指不破坏销售包装，从整批化妆品中剔除个别不合格品的挑拣过程。 （4）样本。指每批抽样量的全体。

（5）单位产品。指单件化妆品，以瓶、支、袋、盒为计件单位。

1.2．检验分类

（1）交收检验

产品出厂前由生产厂的检验部门按产品标准逐批进行检验，符合标准方可出厂，每批出厂产品都应附有合格证。

收货方可以交货批为批量，按标准规定进行检验。 交收检验项目为常规检验项目。

（2）型式检验

一般情况下，每年不得少于一次。有下列情形之一时，也应进行型式检验。 1）当原料、工艺、配方有重大改变，可能影响产品性能时。 2）产品长期停产后（6个月以上）恢复生产时。 3）出厂检验结果与上次型式检验有较大差异时。 4）国家质量监督机构提出进行型式检验要求时。

型式检验的项目包括常规检验项目和非常规检验项目。

1.3．抽样

工艺条件、品种、生产日期相同的产品为一批。收货方也可按一次交货产品为一批。

（1）交收检验抽样

包装外观检验项目的抽样按GB/T 2828.1-2003的二次抽样方案抽样。其中不合格（缺陷）分类分类检查水平（IL）、合格质量水平（AQL）见表1-1规定。

表1-1 检验水平

不合格（缺陷）分类 B类 （重）不合格 C类 （轻）不合格 检查水平（IL） II II 合格质量水平（AQL） 2.5 10.0

属破坏性试验的项目按GB/T 2828.1-2003二次抽样方案抽样，其中IL＝S－3，AQL＝4.0。

包装外观检验项目的内容见表1-2规定。

表1-2 外观检验项目

检验项目 瓶 盖 袋 盒 软管 喷雾罐 锭管 化妆笔 外盒 商标、说明书、 盒头（贴）、合格证

B类不合格 冷爆、破碎、泄漏、滑牙松脱、（毛口）毛刺 破碎、裂纹、爆裂、漏放内盖 封口开口、漏液、穿孔 毛口、开启松紧不宜、镜面和内容物与盒粘结脱落、严重瘪听 封口开口、漏液、滑牙、破碎 喷头不畅、凸听 松紧不当、旋出推出不灵活 笔杆开胶、漆膜开裂、笔套配合不当 错装、漏装 字迹模糊、漏贴、倒贴、错贴 除B类不合格外的外观缺陷 ①①C类不合格 除B类不合格外的外观缺陷 标志不清晰、表面不光洁 注意： ①该项目为破坏性试验。

感官理化指标和卫生指标检验的抽样，按检验项目随机抽取相应的样本，作各项感官理

化指标和卫生指标的检验。

质量（容量）指标检验，随机抽取10份单位样本，按相应的产品标准试验方法，称取其平均值。

（2）型式检验抽样

型式检验中的常规检验项目以交收检验结果为依据，不再重复抽样。 型检验的非常规检验项目可从任一批产品中抽取2~3单位样品，按产品标准规定的方法检验。

1.4．判定规则

（1）交收检验判定规则

当卫生指标不符合相应标准时，该批产品即判为不合格批，不得出厂。 当感官理化指标中任一项不符合相应的产品标准时，允许对该项目指标进行复验，由供需双方共同抽样，若仍不合格，则判该批产品为不合格批，不得出厂。

当质量（容量）指标不符合相应的产品标准时，允许进行加倍复验，仍不合格时，该批产品判为不合格批。

（2）型式检验判定规则

型式检验中常规检验项目的判定与交收检验判定规则相同。 型式检验中的非常规检验项目中有一项不符合产品标准规定时，即判整批产品为不合格。

（3）仲裁检验

当供需双方对产品质量发生争议时，由双方共同按本标准进行抽样检验，或委托上级质监站进行仲裁检验。

1.5．转移规则

（1）除非另有规定，在检查开始时应使用正常检查。

（2）从正常检查到加严检查。当正常检查时，若在连续5批中有2批经初次检查（不

包括再次提交检查批）不合格，则从下一批转到加严检查。

（3）从加严检查到正常检查。当进行加严检查时，若连续5批经初次检查（不包括再次提交检查批）合格，则从下一批检查转入正常检查。

1.6．检查的停止和恢复

加严检查开始后，若不合格批数（不包括再次提交检查批）累计到5批，则暂时停止产品交收检查。

暂停检查后，若生产方确实采取了措施，使提交检查批达到或超过标准要求，则经主管部门同意后，可恢复检查。一般从加严检查开始。

1.7．检查后处置

质量（容量）不合格批和B类不合格批，允许生产厂经适当处理后再次提交检查。再次提交按加严抽样方案进行检查。

C类不合格批，生产方经适当处理后再次提交检查，按加严抽样方案进行检查或由供需双方协商处理。

2 化妆品稳定性试验法总论

2.1．耐热试验

耐热试验是膏霜、乳液和液状化妆品重要的稳定性试验项目，如发乳、唇膏、润肤乳液、护发素、染发乳液、洗发膏、浴液、洗面奶、发用摩丝、雪花膏、香脂等产品均需进行耐热试验。

因为各类化妆品的外观形态各不相同，所以各类产品的耐热要求和试验操作方法略有不同。但试验的基本原理相近。

步骤：先将电热恒温培养箱调节到（40±1）℃，然后取两份样品，将其中一份置于电热恒温培养箱内保持24 h后，取出，恢复室温后与另一份样品进行比较，观察其是否有变稀、变色、分层及硬度变化等现象，以判断产品的耐热性能。

2.2．耐寒试验

同耐热试验一样，耐寒试验也是膏霜、乳液和液状等类产品的重要的稳定性试验项目。 同样，因为各类化妆品的外观形态各不相同，所以各类产品的耐寒要求和试验操作方法略有不同。但试验的基本原理相近。

步骤：先将电冰箱调节到（-5 ~ -15）℃±1 ℃，然后取两份样品，将其中一份置于电冰箱内保持24 h后，取出，恢复室温后与另一份样品进行比较，观察其是否有变稀、变色、分层及硬度变化等现象，以判断产品的耐寒性能。

2.3．离心试验

离心试验是检验乳液类化妆品货架寿命的试验，是加速分离试验的必要检验法，如洗面奶、润肤乳液、染发乳液等均需作离心试验。

其方法是：将样品置于离心机中，以（2000~4000）r/min的转速试验30 min后，观察产品的分离、分层状况。

2.4．色泽稳定性试验

色泽稳定性试验是检验有颜色化妆品色泽是否稳定的试验。由于各类化妆品的组成、性状等各不相同，所以其检验方法也各不相同。如发乳的色泽稳定性试验采用紫外线照射法，香水、花露水的色泽稳定性试验采用干燥箱加热法。

3 化妆品通用检验方法

3.1 pH值的测定

人体皮肤的pH值一般都在4.5~6.5，偏酸性，这是由于皮肤表面分有皮肤和汗液，其中含有乳酸、游离氨基酸、尿酸和脂肪酸等酸性物质。根据皮肤这一生理特点，制成的膏霜类和乳液类化妆品应有不同的pH值，以满足不同的需要。因此，pH值是化妆品一项重要的性能指标。

称取试样一份（精确至0.1 g）,分数次加入蒸馏水10份，并不断搅拌，加热至40 ℃，使其完全溶解，冷却至此（25±1）℃或室温，待用。

如为含油量较高的产品可加热至（70～80）℃，冷却后去掉油块待用；粉状产品可沉淀过滤后待用。

按照pH计说明书的要求进行pH值测定，具体测定原理和测定步骤……

3.2 粘度的测定

流体受外力作用流动时，在其分子间呈现的阻力称为粘度（或称粘性）。粘度是流体的一个重要的物理特性，是膏霜类和乳液类化妆品的重要质量指标之一。粘度一般用旋转式粘度计测定。

具体测定原理和测定步骤

3.3 浊度的测定

香水、头水类和化妆水类制品或由于静止陈化时间不够部分不溶解的沉淀物尚未析出完全，或由于香精中不溶物如浸胶和净油中的含蜡量度过高，都易使产品变混浊，混浊是这些化妆品的主要质量问题之一。浊度的测定主要用目测法。

1．基本原理

目测试样在水浴或其它冷冻剂中的清晰度。

2．试剂

冰块或冰水（或其它低于测定温度5 ℃的适当冷冻剂）

3．测定步骤

在烧杯中放入冰块或冰水，或其他低于测定温度5 ℃的适当冷冻剂。

取试样两份，分别倒入两支预先烘干的φ2㎝×13㎝玻璃试管中，样品高度为试管长度的1/3。将其中一份用串联温度计的塞子塞紧试管口，使温度计的水银球位于样品中间部分。试管外部套上另一支φ3㎝×15㎝的试管，使装有样品的试管位于套管的中间，注意不使两支试管的底部相接触。将试管置于加有冷冻剂的烧杯中冷却，使试样温度逐步下降，观察到达规定温度时的试样是否清晰。观察时用另一份样品作对照。

重复测定一次，两次结果应一致。

4．结果的表示

在规定温度时，试样仍与原样的清晰程度相等，则该试样检验结果为清晰，不混浊。

5．注意事项

⑴ 本方法适用于香水、头水类和化妆水类制品的浊度测定。

⑵ 不同的样品规定的指标温度不同。例：香水5 ℃、花露水10 ℃。

3.4 相对密度的测定

相对密度是指一定体积的物料质量与同体积水的质量之比。它是液状化妆品的一项重要性能指标。相对密度的测定方法常用密度计法。

具体测定原理和测定步骤见

3.5 色泽稳定度的测定

色泽是化妆品的一项重要性能指标，色泽的稳定性则是化妆品的主要质量问题之一。色泽稳定度测定的方法主要是目测法。

1．基本原理

比较试样加热一定温度后颜色的变化。

2．测定步骤

取试样两份分别倾入两支φ2×13㎝的试管中，试样高度约为管长的2/3，塞上软木塞，把其中一支放入预先调节到（48±1）℃的恒温箱内，1 h后打开塞子，然后又仍旧塞好，继续放入恒温箱内，经24 h取出和另一份试样进行比较，颜色应无变化。

3．结果表示

在规定温度时，试样仍维持原有色泽不变，则该试样检验结果为色泽稳定，不变色。

4 各类型化妆品的具体检验标准

4.1.面膜的质量检验

表：面膜感官、理化、卫生指标 项目 感官指标 外观 香气 PH﹙25C﹚ 理化指标 耐热 耐寒 菌落总数/﹙CPU/g﹚ 霉菌和酵母菌总数/﹙CPU/g﹚ 粪大肠菌群/g 卫生指标 金黄色葡萄球菌/g 绿脓杆菌/g 铅/﹙mg/kg﹚ 汞/﹙mg/kg﹚ 砷/﹙mg/kg﹚ 甲醇/﹙mg/kg﹚ .要求 膏﹙乳﹚状面膜 均匀膏体或乳液 符合规定香气 3.5～8.5 ﹙40+-1﹚℃保持24h，恢复至室温后于实验前无明显差异 ﹙-5～-10）℃保持24h，恢复至室温后于实验前无明显差异 — — 5.0～10.0 — — 啫哩面膜 面贴膜 粉状面膜 透明或半透湿润的纤维贴膜均匀粉末 明凝胶状 或胶状成形贴膜 ≤1000，眼、唇部、儿童用产品≤500 ≤100 不应检出 不应检出 不应检出 ≤40 ≤1 ≤10 ≤2000﹙乙醇、异丙醇含量之和≥10％时需测甲醇﹚ 4.1.1、PH测定

1）膏﹙乳﹚状面膜、啫喱面膜、粉状面膜

按GB/T13531.1的方法进行﹙稀释法﹚。 2）面贴膜： （1）纤维贴膜

将贴膜中的水或黏稠液挤出，按GB/T13531.1中的规定的方法测定﹙稀释法）。——称取样品1份（精确至0.1g），加入沸水冷却后的实验用水（4.1）10份，加热至40℃，并不断搅拌至均匀，冷却至规定温度，待用。 （2）胶状成形贴膜

称取剪碎成约5mm×5mm试样一份，加入经煮沸并冷却的实验室用水10份，于25℃条件下搅拌10min，取清液按GB/T13531.1规定方法测定。

4.1.2、耐热

1）非透明包装产品

将试样分别装入2支20mm×120mm的试管内，高度约80mm，塞上干净的胶塞，将一支待检的试管置于预先调节至﹙40+-1﹚℃的恒温培养箱内，24h后取出，恢复至室温后与另一支试管的试样进行日测比较。 2）面贴膜和透明包装产品

取2袋﹙瓶﹚包装完整的试样，把一袋﹙瓶﹚试样置于预先调节至﹙40+-1﹚℃的恒温培养箱内，24h后取出，恢复至室温后，剪开面贴膜包装袋与另一袋试样进行日测比较，透明包装产品则直接与另一瓶试样进行日测比较。

4.2.膏霜和乳液类化妆品的质量检验

膏霜和乳液类化妆品包括雪花膏、冷霜、奶液和香粉密、润肤霜、清洁霜等。这些产品主要是由水和水溶性物质、脂质（油脂和蜡）、乳化剂等三类物质组成的乳化体，乳化体的乳化类型主要是水包油型（O/W）和油包水型（W/O），也有油包水水包油型（O/W/O）、水包油油包水型（W/O/W）等多重乳化体系。

4.3．润肤膏霜的质量检验

润肤膏霜有水包油型（O/W型）和油包水型（W/O型）两种类型，为适用于人体皮肤的具有一定稠度的乳化型膏霜，其感官指标及理化指标见下表。

表: 雪花膏感官指标及理化指标

指 标 名 称 感官指标 香 气 外观 pH值 理化指标 耐热 指 标 要 求 符合规定香型 膏体细腻，均匀一致 4.0～8.5（含有粉质雪花膏≤9.0） （40±1）℃，24 h，恢复室温后膏体无油水分离现象 （40±1）℃，24 h，恢复室温后，渗油率≤3％ （－5～－10）℃，24 h，恢复室温后与试验前无明显差异 O/W型 W/O型 耐 寒 以上指标中，pH值、耐寒、耐热等项目已在1.2中进行了介绍，在此仅介绍稳定性检验和乳化体类型检验。

（1）感官检验

色泽检验及膏体检验用目测法在室内无阳光直射处观察。香气凭嗅觉鉴定。

（2）渗油率的检验

先将恒温箱调节至（40±1）℃，在已称量的培养皿中称取样品约10 g（约占培养皿面积1/4），刮平，精密称量。再将培养皿斜放在烘箱内的15º 角架上保持24 h后取出，放入干燥器内冷却后再称重，如有油渗出，则将渗油部分小心揩去，留下膏体部分，然后将培养皿连同剩余的膏体部分进行称量，按式（8-2）计算样品渗油率w。

w＝（m1－m２）／m （8-2）

式中：m——样品质量，g；

m1——24 h失水后样品和培养皿的质量，g；

m２——渗油部分揩去后，培养皿和膏体的质量，g。

（3）乳化体类型检验

对膏霜、乳液等乳化状化妆品，必须进行乳化体类型检验。检验方法有：染料法、溶解法、导电性测定等方法。 1）染料法

将产品涂抹在表面皿上形成约1.6 mm厚、面积为6.5 m2的薄膜，在薄膜的不同部位，

分别洒上少量油溶性染料（如D&C红N0．18）和水溶性染料（如FD&C蓝N0．1），用显微镜观察染料扩展情况。如果油溶性染料扩展，表明乳化体为油包水型；如果水溶性染料扩展，则乳化体为水包油型。 2）溶解法

取少量产品观察，如易与矿物油相混合为油包水型；如易与水相混合为水包油型。 3）导电性测定法

用导线将一只30000 Ω、0.5 W的电阻、供测样品用的电器触点、一只无阻氖灯（1/4 W，104 V ~120 V）和一只按钮开关串联起来，组成测定装置。将样品放在两触点之间并接通电路，如氖灯发亮，表明是水包油型，如氖灯不亮则为油包水型。此外，凡发生灯光暗淡，或在连续通电的情况下，灯才亮起来的现象通常表明是一种复合乳化体，或是乳化体正在逐渐地转化过程中。但是，如果乳化体中含有电解质，特别是当电解质浓度较高时，油包水型乳化体也会导电。

4.4．润肤乳液质量检验

润肤乳液是具有流动性的水包油型化妆品。主要用于滋润人体皮肤。根据乳液的色泽、香型、包装形式的不同，可分为多种规格。润肤液的感官及理化指标见下表。

表: 润肤液感官指标及理化指标

指 标 名 称 色 泽 感官指标 香 气 结 构 pH值 理化指标 耐 热 耐 寒 离心试验 指 标 要 求 符合企业规定 符合企业规定 细 腻 4.5～8.5（果酸类产品除外） 40 ℃，24 h，恢复室温后无油水分离现象 （-5～~ -15）℃，24 h，恢复室温后无油水分离现象 2000 r/min，30 min不分层（含不溶性粉质颗粒沉淀物除外） 以上指标中，pH值、耐寒、耐热等项目已在1.2中进行了介绍，在此仅介绍稳定性检验和离心试验。

（1）感官检验

色泽：取样品在非阳光直射条件下目测。 香气：用辨香纸蘸取试样，用嗅觉进行辨别。

结构：取试样擦于皮肤上，在室内和非阳光直射条件下观察。

（2）离心试验

在离心管中注入试样约2/3高度并装实，用软木塞塞好。然后，放入调节至（38±1）℃的电热恒温培养箱内，保温1 h后，立即移入离心机中，并将离心机调整到2000 r/min，30 min后观察现象。

4.5．洗面奶质量检验

洗面奶是乳液类化妆品，主要用于清洁面部皮肤，具有去除表皮污物、油脂等功能，同时有利于皮肤的柔软、润滑和生成保护层，尤其适用于干性皮肤的人使用。

根据洗面奶产品结构、添加剂的不同，洗面奶可分普通型、磨砂型和辅助功效型。洗面奶的感官及理化指标见下表。

表: 洗面奶感官指标及理化指标

指 标 名 称 指 标 要 求 色 泽 感官指标 香 气 膏 体 pH值 耐 热 理化指标 耐 寒 离心试验 粘度（25 ℃ Pa.S） 符合规定色泽 符合规定香型，无异味 细腻，有一定的流动性 4.5～8.5 （40±1）℃，24 h，恢复室温无分层、变稀、变色现象 （-10 ± 1）℃，24 h，恢复室温无分层、泛粗、变色现象 2000 r/min，30 min无油水分离（颗粒沉淀除外） 标准值±2.0 以上指标中，pH值、耐热、耐寒、离心试验、粘度等项目的测定方法在本章1.2中已

经介绍，在此仅介绍感官检验和质量（容量）允差测定。

（1）感官检验

1）色泽：取试样与标准样在非阳光直射下，用目测对比，应与规定色泽一致。 2）香气：用辨香纸蘸取样品，用嗅觉辨别，应符合规定香型，且无异味。 3）膏体：取试样与标样在非阳光直射下，用目测对比，应符合规定。

（2）质量（容量）允差

1）质量允差

随机取样10瓶，用分析天平分别称得质量m1、m2、m3••••m10，则总质量为：

m总 = m1+ m2+ m3+••••+ m10

然后将以上样品全部倒出，洗净、烘干，分析天平分别称得空瓶质量m/1、m/2、m/3••••m/10，则空瓶总质量为：

m空 = m/1+ m/2+ m/3+•+ m/10 (8-3)

则样品的平均质量（g）为

m = （ m总—m空）/10 (8-4)

检查m是否在允差范围内。 2）容量允差

随机取样10瓶，用量筒分别加入V1、V2、V3••••V10mL至瓶满为止，则得装满10瓶样品所需蒸馏水体积为：

V=V1+V2+V3+•+V10

然后将以上样品全部到出，，洗净、阴干，用量筒分别加入V/1、V/2、V/3••••V/10mL的蒸馏水，则得装满10瓶空样品瓶所需蒸馏水体积为：

V/=V/1+V/2+V/3+••••+V/10 (8-5)

则样品的平均容量（mL）为：

Vx =（V/—V）/10 (8-6)

检查Vx 是否在允差范围内。

5 化妆品中有害物质含量分析

化妆品卫生指标对砷、汞、铅、甲醇、甲醛等有害物质的含量作了明确规定。其中甲醇的测定方法在第6章中已经进行了介绍，在此主要介绍砷、汞、铅、甲醛的测定方法。

5.1 砷含量的测定

测定砷的方法有斑点比色法、银盐比色法、原子荧光光谱法和原子吸收光谱法等。常用的有银盐比色法和斑点比色法，斑点比色法在第4章中已进行介绍，在此仅介绍二乙氨基二硫代甲酸银分光光度法。

1．测定原理

经灰化或消解后的试样，在碘化钾和氯化亚锡的作用下，样液中五价砷被还原为三价砷。三价砷与新生态氢生成砷化氢气体。通过用乙酸铅溶液浸泡的棉花除去硫化氢干扰，然后与溶于三乙醇胺、氯仿中的二乙氨基二硫代甲酸银作用，生成棕红色的胶态银，可进行比色定量。钴、镍、汞、银、铂、铬和钼可干扰砷化氢的发生，但正常情况下，化妆品中这些物质的含量不会产生干扰。锑对测定有明显干扰。

2．试剂

（1）去离子水或同等纯度的水：将一次蒸馏水经离子交换净水器净化，贮存于全玻璃瓶或聚乙烯瓶中。

（2）硝酸、硫酸、氧化镁、无砷锌粒、氯仿、三乙醇胺。 （3）硫酸：体积比为1∶1。

（4）硫酸：ｃ(1/2 H2SO4)＝l mol／L。 （5）氢氧化钠：ρ(NaOH)＝20 ％。

（6）酚酞指示剂：ρ(酚酞)＝0.1 ％。称取0.1 g酚酞，溶于50 mL 95 ％乙醇，加水至100 mL。

（7）硝酸镁溶液：ρ(MgNO3)＝10 ％。 （8）盐酸：体积比为1∶1。 （9）碘化钾：ρ(KI)＝5 ％。 （10）40％氯化亚锡溶液：ρ(SnCl2)＝40 ％。称取40 g氯化亚锡溶于40 mL浓盐酸中，加水至100 mL，溶液中可放入金属锡粒数颗。 （11）乙酸铅溶液：ρ(CH3COOPb)＝10 ％。 （12）乙酸铅棉花：将脱脂棉浸入10 ％乙酸铅溶液，2 h后取出。晾干，并使膨松。

（13）二乙氨基二硫代甲酸银（DDTC－Ag）溶液：称取0.25 g DDTC－Ag，用少许氯仿溶解，加入1.0 mL三乙醇胺，再用氯仿稀释至100 mL。必要时可过滤。置于棕色瓶内，于冰箱中存放。

（14）砷标准贮备液：称取0.660 0 g经105 ℃干燥2 h的三氧化二砷（As2O3，分析纯），溶于5 mL 20 ％的氢氧化钠溶液中，以酚酞作指示剂，用ｃ(1/2 H2SO4)的硫酸溶液中和至中性后，再加入15 mL ｃ(1/2 H2SO4)

图8-1 砷测定装置

1-125mL锥形瓶；2-导气管；3-乙酸铅棉花； 4-10mL刻度试管；5-DDTC－Ag溶液。

的硫酸溶液，并用水定容至50 mL。此溶液1.00 mL含1.00 mg砷。

（15）砷标准溶液：移取砷标准贮备液1.00 mL置于100 mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，临用时吸取此溶液10.0 mL，加水定容至100 mL，混匀，此溶液1.00 mL含1.00 μg砷。

3．仪器

1）凯氏定氮瓶（250 mL）、锥形瓶（125 mL）。 2）瓷蒸发皿（30 mL）。

3）砷测定装置：如图8-1所示。

4）分光光度计。

4．测定步骤

（1）样品前处理：可任选下列一种处理方法。 1）HNO3-H2SO4湿式消解法

试样如含有乙醇等溶剂，则应预先使溶剂挥发（不得干涸）。如含甘油特别多的试样，消解时应特别注意安全。

称取约（1.00～2.00）g经充分混匀的试样，同时做用试剂做空白试验。置于250 mL定氮消解瓶或125 mL锥形瓶中，加入数颗玻璃珠。然后加5 mL水，（10～15）mL硝酸，放置片刻，小火缓缓加热，待反应作用缓和，放冷。沿瓶壁加入5 mL或10 mL 硫酸继续加热消解，若消解过程中溶液出现棕色，可加少许硝酸继续消解。如此反复，直至溶液澄清或微黄。放置冷却后加20 mL水，继续加热煮沸至产生白烟、如此处理两次，将消解液定量转移至50 mL容量瓶中，加水定容至刻度，备用。此溶液每10 mL相当于体积比为1∶1的硫酸2 mL。

2）干灰化法

称取约（1.00～2.00）g经充分混匀的试样，置于50 mL瓷蒸发皿中，同时做用试剂做空白试验。加入10 mL 10 ％的硝酸镁溶液，1 g氧化镁粉末。将试样及灰化助剂充分混匀，在水浴上蒸干水分，然后在小火上炭化至不冒烟，移入箱形电炉，在600 ℃下灰化4 h，冷却取出，向灰分加水少许，使润湿，然后用20 mL体积比为1∶1的盐酸分数次加入以溶解灰分及洗蒸发皿。并加水定容至50 mL，备用。此溶液每10 mL相当体积比为1∶1的盐酸（已除去中和消耗量）2.0 mL。

(2) 测定

移取0 mL，0.50 mL，1.00 mL，2.00 mL，4.00 mL，6.00 mL，8.00 mL，10.0 mL砷标准溶液，适量样液和空白溶液，分别置于砷化氢发生瓶中，样品采用湿式消解法处理者，加入硫酸使总酸量相当体积比为1∶1的硫酸10 mL；样品采用干灰化法处理者，加入体积比为1∶1的盐酸使总酸含量为10 mL。然后加水至总体积为50 mL。

各加2.5 mL 15 ％的碘化钾溶液及2.0 mL 40 ％氯化亚锡溶液，摇匀。放置10 min后，加入（3～5）g锌粒，立即接上塞有乙酸铅棉的导气管，并将其插入已加有5.0 mL二乙氨基二硫代甲酸银溶液的吸收管，室温（25 ℃）下反应l h。反应完毕，若吸收液体积减少，则用氯仿补至5.0 mL。将部分吸收液移入1 cm比色皿中，以氯仿为参比，在分光光度计上，于波长515 nm处，测量吸光度。

绘制工作曲线，从曲线上查出测试液中砷含量。

5．结果计算

样品中砷的质量分数w按式（8-17）计算，单位为mg/kg。

w(m1m0)V （8-17）

mV1式中：ｍ0——从工作曲线上查得用试剂做空白试验的砷量，μg； ｍ——称样量，g；

Ｖ1——分取样品溶液体积， mL； Ｖ——样品溶液总体积， mL。

6．注意事项

(1) 方法适用于化妆品中总砷的测定，最低检出量为0.5 μg砷，若取1 g样品测定，最低检测浓度为0.5 mg/kg。

(2)如果样品为含油、蜡质高的样品，应加入1 g固体硝酸镁。

5.2 铅含量的测定

测定铅的方法有分光光度法、原子吸收光谱法、极谱法等。常用的有火焰原子吸收分光光度法和双硫腙萃取分光光度法，在此介绍火焰原子吸收分光光度法

1．测定原理

样品经预处理使铅以离子状态存在于样品溶液中，样品溶液中铅离子被原子化后，基态铅原子吸收来自铅空心阴极灯发出的共振线，其吸光度与样品中铅含量成正比。在其它条件不变的情况下，根据测量被吸收后的谱线强度，与标准系列比较进行定量。方法的检出限为0.15mg/L，定量下限为0.50mg/L。若取1g样品测定，定容至10mL，本方法的检出浓度为1.5ug/g，最低定量浓度为5ug/g。

2．仪器

1) 原子吸收分光光度计及其配件。 2) 离心机。

3) 硬质玻璃消解管或小型定氮消解瓶。 4) 具塞比色管，10mL、25mL、5mL。 5) 分液漏斗，100mL。 6) 蒸发皿。

7) 压力自控微波消解系统。 8) 高压密闭消解罐。 9) 聚四氟乙烯溶样杯。

10) 水浴锅（或敞开式电热加热恒温炉）。

3．试剂

1) 2) 3) 4) 5) 6)

硝酸（ρ20=1.42g/mL），优级纯。

高氯酸［ω（HClO4）=70%~72%］,优级纯。 过氧化氢［ω（H2O2）=30%］。 硝酸（1+1）：取硝酸（3.1）100mL，加水100mL，混匀。 混合酸：硝酸（3.1）和高氯酸（3.2）按3+1混合。 辛醇。

7) 盐酸羟铵溶液（120g/L）：取盐酸羟铵12.0g和氯化钠1.20g溶于100mL水中。 8) 铅标准溶液

（1） 铅标准溶液［ρ（Pb）=1g/L］：称取纯度为99.99%的金属铅1.000g，加入硝酸

溶液（3.4）20mL，加热使溶解，移入1L容量瓶中，用水稀释至刻度。

（2） 铅标准溶液［ρ（Pb）=100mg/L］：取铅标准溶液（3.8.1）10.0mL置于100mL

容量瓶中，加硝酸溶液（3.4）2mL，用水稀释至刻度。

（3） 铅标准溶液［ρ（Pb）=10mg/L］：取铅标准溶液（3.8.2）10.0mL置于100mL容

量瓶中，加硝酸溶液（3.4）2mL，用水稀释至刻度。

9) 甲基异丁基酮（MIBK）。 10) 盐酸溶液（7mol/L）：取优级纯浓盐酸（ρ20=1.19g/mL）30mL，加水至50mL。

4．测定步骤

1）样品预处理

下列三种方法可任选一种方法。

（1）湿式消解法

准确称取混匀试样约1.00g~2.00g置于消解管中，同时做试剂空白。样品如含有乙醇等有机溶剂，先在水浴或电热板上低温挥发。若为膏霜型样品，可预先在水浴中加热使瓶壁上样品融化流入瓶的底部。加入数粒玻璃珠，然后加入硝酸（3.1）10mL1+1，由低温至高温加热消解，当消解液体积减少到2mL~3mL，移去热源，冷却。加入高氯酸（3.2）2mL~5mL1+2，继续加热消解，不时缓缓摇动使均匀，消解至冒白烟，消解液呈淡黄色或无色。浓缩消解液至1mL左右。冷至室温后定量转移至10mL（如为粉类样品，则至25mL）具塞比色管中，以水定容至刻度，备用。如样液浑浊，离心沉淀后可取上清液进行测定。

（2） 微波消解法

准确称取混匀试样约0.5g~1g于清洗好的聚四氟乙烯溶样杯内，含乙醇等挥发性原料的化妆品如香水、摩丝、沐浴液、染发剂、精华素、刮胡水、面膜等，先放入温度可调的100℃恒温电加热器或水浴上挥发（不得蒸干）。油脂类和膏粉类等干性物质，如唇膏、睫毛膏、眉笔、胭脂、唇线笔、粉饼、眼影、爽身粉、痱子粉等，取样后先加水0.5mL~1.0mL，润湿摇匀。

根据样品消解难易程度，样品或经预处理的样品，先加入硝酸（3.1）2.0mL~3.0mL，静止过夜，充分作用。然后再依次加入过氧化氢（3.3）1.0mL~2.0mL，将溶样杯晃动几次，使样品充分浸没。放入沸水浴或温度可调的恒温电加热设备中10℃加20min取下，冷却。如溶液的体积不到3mL，则补充水。同时严格按照微波溶样系统操作手册进行操作。

把装有样品的溶样杯放进预先准备好的干净的高压密闭溶样罐中，拧上罐盖（注意：不要拧得过紧）。

表8-19为一般化妆品消解时压力——时间的程序。如果化妆品是油脂类、中草药类、洗涤类。可适当提高防爆系统灵敏度，以增加安全性。

根据样品消解难易程度可在5min~20min内消解完毕，取出冷却，开罐，将消解好的含样品的溶样杯放入沸水浴或温度可调的100℃电加热器中数分钟，驱除样品中多余的氮氧化物，以免干扰测定。

表8-19 消解时压力时间顺序

压力档

压力（Mpa）

保压累加时间（min）

1 0.5 1.5 2 1.0 3.0 3 1.5 5.0

将样品移至10mL具塞比色管中，用水洗涤溶样杯数次，合并洗涤液，加入盐酸羟胺溶液（3.7）0.5mL1+3，用水定容至10mL，备用。

（3） 浸提法

准确称取混匀试样约1.00g，置于50mL具塞比色管中。随同试样做试剂空白。样品如含有乙醇等有机溶剂，先在水浴或电热板上低温挥发。若为膏霜型样品，可预先在水浴中加热使管壁上样品融化流入管底部。加入硝酸（3.1）5.0mL、过氧化氢（3.3）2.0mL，混匀，如出现大量泡沫，可滴加数滴辛醇（3.6）。于沸水浴中加热2h。取出，加入盐酸羟胺溶液（3.7）1.0mL1+3，放置15min~20min，用水定容至25mL。 该法只适用于不含蜡质的化妆品。

2）测定

（1）移取铅标准溶液（3.8.3）0、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00mL，分别置于10mL具塞比色管中，加水至刻度。按仪器操作程序，将仪器的分析条件调至最佳状态。在扣除背景吸收下，分别测定校准曲线系列、空白和样品溶液。如样品溶液中铁含量超过铅含量100倍，不宜采用氘灯扣除背景法，应采用塞曼效应扣除背景法，或按5.2.2预先除去铁。绘制浓度——吸光度曲线，计算样品含量。

（2）将标准、空白和样品溶液转移至蒸发皿中，在水浴上蒸发至干。加入盐酸（3.10）10mL溶解残渣，转移至分液漏斗，用等量的MIBK（3.9）萃取二次，保留盐酸溶液。再用盐酸（3.10）5mL洗MIBK层，合并盐酸溶液，必要时赶酸，定容。按仪器操作程序，进行测定。

5．结果计算

样品中铅的质量分数w按式（8-18）计算，单位为mg/kg。

ω（Pb）=（ρ1－ρ0）×V/m （8-18） 式中：ω（Pb）——样品中铅的质量分数，ug/g； ρ1——测试溶液中铅的质量浓度，mg/L； ρ0——空白溶液中铅的质量浓度，mg/L； V——样品消化液总体积，mL； m——样品取样量，g。

5.3 汞含量的测定

在化妆品中汞的含量一般都很低，现在常用的测定方法有冷原子吸收分光光度法和汞斑法等，在此主要介绍冷原子吸收分光光度法。

1．测定原理

汞蒸气对波长253.7nm的紫外光具有特征吸收，在一定的浓度范围内，吸收值与汞蒸气浓度成正比。样品经消解、还原处理，将化合态的汞转化为元素汞，再以载气带入测汞仪，测定吸收值。与标准系列比较定量。

2．仪器

（1）比色管：50 mL；锥形瓶：100 mL；250 mL圆底烧瓶：250 mL；玻璃磨口球形冷凝管：40 cm长；水浴锅。 （2）冷原子吸收测汞仪。

3．试剂

（1）去离子水或同等纯度的水：将一次蒸馏水经离子交换净水器净化，贮存于全玻璃瓶或聚乙烯瓶中。

（2）硝酸、硫酸、盐酸：优级纯。

（3）过氧化氢：质量分数为30 %。 （4）五氧化二钒、氯化汞：分析纯。 （5）硫酸：质量分数为10 %。

（6）氯化亚锡溶液：质量分数为20 %。称取20 g氯化亚锡（分析纯）置于250 mL烧杯中，加20 mL浓盐酸，加水稀释至100 mL。

（7）重铬酸钾溶液：质量分数为10 %。称取10g重铬酸钾（分析纯）溶于100 mL水中。

（8）重铬酸钾硝酸溶液：取5 mL重铬酸钾溶液，加入硝酸50 mL，用水稀释至1000 mL。 （9）汞标准溶液：

① 称取0.1354 g氯化汞置于100 mL烧杯中，加入重铬酸钾硝酸溶液溶解。移入1000 mL容量瓶中，再用重铬酸钾硝酸溶液稀释至刻度，此溶液每毫升含汞100 μg。 ② 移取10.0 mL汞标准溶液①置于l00 mL容量瓶中。用重铬酸钾硝酸溶液稀释至刻度。此溶液每毫升含汞10.0 μg。此溶液临用前配制。

③ 移取汞标准溶液②10.0 mL至100 mL容量瓶中，用重铬酸钾硝酸溶液稀释至刻度。此溶液每毫升含汞1.00 μg。

④ 移取10.0 mL汞标准溶液③至100 mL容量瓶中，用重铬酸钾硝酸溶液稀释至刻度。此溶液每毫升含汞0.10 μg。

4．测定步骤

（1） 样品预处理 1）湿式回流消解法 称取约1.00 g试样，置于250 mL圆底烧瓶中，样品如含有乙醇等有机溶剂，先在水浴或电热板上低温挥发（不得干涸）。随同试样做用试剂做空白试验。加入30 mL硝酸（样品中含有碳酸钙等碳酸盐类的粉剂，在加酸时应缓慢加入，以防二氧化碳气体产生过于猛烈）、5 mL水、5 mL硫酸及数粒玻璃珠，置于电炉上，接上球形冷凝管，用冷凝水循环冷凝。加热回流消解2 h，消解液一般呈微黄或黄色。从冷凝管上口注入10 mL水，继续加热回流10 min，放置冷却。用预先用水湿润的滤纸过滤消解液，除去固形物。对于含油脂蜡质多的试样，可预先将消解液冷冻使油脂蜡质凝固。用蒸馏水洗过滤器数次，合并洗涤液于滤液中，定容至50 mL，备用。 2）湿式催化消解法

称取约1.00 g试样，置于100 mL锥形瓶中(样品如含有乙醇等有机溶剂，先在水浴或电热板上低温挥发，不得干涸)。随同试样做用试剂做空白试验。加入50 mg五氧化二钒、7 mL浓硝酸。置水浴或电热板上微火加热至微沸。取下冷却，加5 mL硫酸，于锥形瓶口放一小玻璃漏斗，在（135～140）℃温度下继续消解，并于必要时补加少量硝酸，消解至溶液呈现透明蓝绿色或橘红色。冷却后，加少量水继续加热煮沸约2 min以驱赶二氧化氮。定容至50 mL，备用。

（2）测定

移取0 mL，0.10 mL，0.30 mL，0.50 mL，0.70 mL，1.00 mL，1.50 mL，2.00 mL汞标准溶液、适量样品溶液和空白溶液，置于100 mL锥形瓶中，用10 ％硫酸定容至一定体积。按仪器说明书调整好测汞仪。将标准系列、用试剂做空白试验和样品逐个倒入汞蒸气发生瓶

中，加入2 mL氯化亚锡溶液迅速塞紧瓶塞。开启仪器气阀，待指针至最高读数时，记录其读数。绘制工作曲线，从曲线上查出测试液中汞含量。

5．结果计算

按式（8-19）计算样品中汞的质量分数w，单位为mg/kg。

w(m1m0)V （8-19）

mV1式中：ｍ0——从工作曲线上查得用试剂做空白试验的汞质量，μg； ｍ1——从工作曲线上查得样品测试液中的汞质量，μg； ｍ——称样质量，g；

Ｖ1——分取样品溶液体积， mL；

Ｖ——样品溶液总体积， mL。

6 化妆品微生物检验方法

化妆品中，特别是一些高级的护肤膏等含有蛋白质、氨基酸、维生素以及各种植物的提取液等营养成分较高的物质，为霉菌、细菌等微生物的滋生、繁殖提供了良好的生长条件，影响化妆品的质量和并危害人体健康。在国外，许多国家所制定的化妆品微生物控制标准相当严格。欧美一些国家要求化妆品的杂菌数每克（或每毫升）控制在（100～1000）个，不允许有致病菌。我国药品微生物检验法规定，乳剂或外用液体每克（或每毫升）含杂菌数按品种不同控制在（500～1000）个。

在此，主要讨论化妆品微生物检验时样品的采集，细菌总数测定，粪大肠菌群、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌的测定。

6.1 化妆品微生物标准检验方法总则

化妆品微生物标准检验方法总则按国家标准（GB 7918.1-1987）执行，该总则提供了样品的采集及注意事项，供检样品的制备，不同类型的样品的检样制备的统一标准。

1．样品的采集及注意事项

（1）所采集的样品，应具有代表性，一般视每批化妆品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10 g或10 mL；包装量小的样品，取样量可酌减。

（2）供检样品，应严格保持原有的包装状态。容器不应有破裂，在检验前不得启开，以防再污染。

（3）接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。如不能及时检验，样品应放在室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。

（4）若只有一个样品，而同时需做多种分析，如细菌、毒理、化学等，则宜先取出部分样品作细菌检验，再将剩余样品作其它分析。

（5）如检出粪大肠菌群或其它致病菌，自报告发出起该菌种及被检样品应保存一个月备查。

2．供检样品的制备

（1）培养基和试剂 1）生理盐水：称取8.5 g氯化钠溶解于1000 mL蒸馏水中，分装入加玻璃球的三角瓶中，每瓶90 mL，在0.1 MPa压强下高压灭菌20 min。 2）SCDLP液体培养基：配方如表8-20所示。

表8-20 SCDLP液体培养基配方 物质 用量（g） 酪蛋白胨 17 大豆蛋白胨 3 氯化钠 5 磷酸氢二钾 2.5 物质 用量（g） 葡萄糖 25 卵磷脂 1 吐温80 7 蒸馏水 1000 制备方法：将上述成分混合后，加热溶解，调节pH为7.2～7.3，分装后，在0.1 MPa压强下高压灭菌20 min。注意振荡，使沉淀于底层的吐温80充分混合，冷却至25 ℃左右使用。

3）灭菌液体石蜡和吐温80。

（2）仪器

1）天平、水浴箱、灭菌研钵及灭菌研棒、均质器； 2）灭菌三角瓶：内含玻璃球及90 mL稀释液； 3）灭菌刻度吸管：10 mL、5 mL；

（3）不同类型样品制备

1）水溶性的液体样品：可量取10 mL加到90 mL灭菌生理盐水中，如样品少于10 mL，仍按10倍稀释法进行。如为5 mL，则加45 mL灭菌生理盐水，混匀后，制成（1∶10）的稀释液。

2）油性液体样品：取样品10 mL，先加5 mL灭菌液体石蜡混匀，再加10 mL灭菌吐温80，在（40～44）℃水浴中振荡混合10 min，加入灭菌的生理盐水75 mL（在40～44 ℃水浴中预温），在（40～44）℃水浴中乳化，制成（1∶10）的悬浮液。

3）亲水性半固体样品：称取10 g样品，加到已加有90 mL灭菌生理盐水并带玻璃球的经过灭菌的三角瓶中，充分振荡混匀，放入32 ℃水浴静置15 min。用其上清液作为（1∶10）的稀释液。

4）疏水性半固体样品：称取10 g样品，放到经灭菌的研钵中，加10 mL灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状，再加10 mL灭菌吐温80，研磨，等溶解后，加70 mL灭菌生理盐水，在（40～44）℃水浴中充分混合，制成（1∶10）的稀释液。

如有均质器，上述水溶性膏霜、半固体样品、粉剂固体样品，可称取10 g加90 mL灭菌生理盐水，均质（1～2）min；疏水性膏霜及眉笔、口红笔等，称取10 g加90 mL SCDLP液体培养基或1 g样品加l mL灭菌液体石蜡、l mL灭菌吐温80、7 mL灭菌生理盐水，均质（3～5）min。

6.2 细菌总数测定

细菌总数系指1 g或1 mL化妆品中所含的活菌数量。测定细菌总数可用来判断化妆品被细菌污染的程度，以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、操作者的卫生状况，是对化妆品进行卫生学评价的综合依据。这里主要介绍标准平板计数法。

1．测定原理

化妆品中污染的细菌种类不同，每种细菌都有它一定的生理特性。培养时对营养要求、培养温度、培养时间、pH、需氧性质等均有所不同。在实际工作中，不可能做到满足所有菌

的要求。因此测定的结果，只包括在本方法所使用的条件下（在卵磷脂、吐温80营养琼脂上，于37 ℃培养48 h）生长的一群嗜中温的需氧及兼性厌氧的细菌总数。

2．仪器

（1）三角烧瓶、量筒、高压消毒锅、试管、酒精灯、恒温培养箱、放大镜、pH计或精密pH试纸。

（2）灭菌平皿：直径9 cm；灭菌刻度吸管：10 mL。

3．培养基和试剂

（1）生理盐水：见供检样品的制备。

（2）卵磷脂、吐温80-营养琼脂培养基：配方见表8-21所示。

表8-21 卵磷脂、吐温80-营养琼脂培养基配方 物质 质量 /g 蛋白胨 20 牛肉膏 3 NaCl 5 蒸馏水 1000 物质 质量 /g 卵磷脂 1 吐温80 7 琼脂 15

制备方法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其它成分（除琼脂外）加到其余的蒸馏水中溶解，将已溶解的卵磷脂和吐温80混匀，调pH为7.1～7.4，加入琼脂在0.1 MPa压强下高压灭菌20 min，储存于冷暗处备用。

4．测定步骤

用灭菌吸管，吸取按1∶10稀释的检样2 mL分别注入到两个灭菌平皿内，每皿l mL，另取l mL注入到9 mL灭菌生理盐水试管中（注意勿使吸管接触液面），更换一支吸管，并充分混匀，使成1∶100的稀释液，吸取2 mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿l mL。如样品含菌量高，还可再稀释成1∶1000、1∶10000……等，每种稀释度应换1支吸管。 将熔化并冷至（45～50）℃的卵磷脂、吐温80、营养琼脂培养基倾注平皿内，每皿约15 mL，另倾注一个不加样品的灭菌空平皿，作空白对照，随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平皿，置37 ℃培养箱内培养48 h。

5．菌落计数方法

先用肉眼观察，对菌落数进行计数，然后再用放大5～10倍的放大镜检查，以防遗漏。记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数，若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌蔓延生长时，该平皿不宜计数。若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘2，以代表全皿菌落数。

6．菌落计数及报告方法

（1）首先选取平均菌落数为30～300的平皿，作为菌落总数测定的范围。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数（见表8-22，例1）。 （2）若有两个稀释度，其平均菌落数均为30～300个，则应求出两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数，若大于2则报告其中较小的菌数（见表8-22，例2及例3）。

（3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300个，则应按稀释度高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表8-22，例4） （4）若所有稀释度的平均菌落数均少于30个，则应按稀释度的最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表8-22，例5）。

（5）若所有稀释度的平均菌落数均不是30～300个，其中一个稀释度大于300个，而相邻的另一稀释度小于30时，则以接近30或300平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表8-22，例6）。

（6）若所有的稀释均无菌生长，报告数为每克或每毫升小于10个。

（7）菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告之；大于100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，应以四舍五入法计算。为缩短数字后面零的个数，可用10的指数来表示（见表8-22报告方式栏）。在报告菌落数为“不可计”时，应注明样品的稀释度。

表8-22 细菌计数结果及报告方式

例次 1 2 3 4 5 6 不同稀释度的平均菌落数 10-1 / 2760 2890 不可计 27 不可计 10-2 164 295 271 4650 11 305 10-3 20 46 60 513 5 12 两稀释度菌数之比 / 1.6 2.2 / / / 菌落总数 (个/g或个/ mL) 16400 38000 27100 513000 270 30500 报告方式 （个/g或个/ mL） 16000或1.6×104 38000或3.8×104 27000或2.7×104 510000或5.1×105 270或2.7×102 31000或3.1×104 6.3 粪大肠菌群的检验

粪大肠菌细菌来源于人和温血动物的粪便。检出粪大肠菌群表明该化妆品已被粪便污染，有可能存在其它肠道致病菌或寄生虫等病原体的危险。因此粪大肠菌被列为重要的卫生指标菌。

1．测定原理

检验方法是根据粪大肠菌群所具有的生物特征，如革兰氏阴性无芽孢杆菌在44 ℃培养（24～48）h能发酵乳糖产酸并产气，能在选择性培养基上产生典型菌落，能分解色氨酸产生靛基质。

2．仪器

恒温水浴、温度计、显微镜、载玻片、接种环、电炉、三角瓶、试管、小倒管、pH计或pH试纸、高温消毒锅、灭菌吸管、灭菌平皿。 3．培养基和试剂

（1）乳糖胆盐培养基：配方见表8-23所示。

表8-23 乳糖胆盐培养基配方 物质 用量 蛋白胨 20 g 猪胆盐 5 g 蒸馏水 1000 mL 物质 用量 0．4 ％溴甲酚紫水溶液 2.5 mL 乳糖 5 g 制备方法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于蒸馏水中，调pH到7.4，加入指示剂，混匀、分装试管（每支试管中加一个小倒管），在69 kPa压力下灭菌20 min。 （2）双倍浓度乳糖胆盐培养基

按上述乳糖胆盐培养基成分，蒸馏水量不变，其它成分加倍。 （3）伊红美兰（EMB）琼脂：配方见表8-24所示。

表8-24 伊红美兰（EMB）琼脂配方

物质 用量 蛋白胨 10 g 乳糖 10 g 磷酸氢二钾 10 g 蒸馏水 1000 mL 物质 用量 2 ％伊红水溶液 20 mL 0.5 ％美红水溶液 13 mL 琼脂 20 g 制备方法：先将琼脂加到900 mL蒸馏水中，加热溶解，然后加磷酸氢二钾、乳糖及蛋白胨混匀，使之溶解。再以蒸馏水补足至1000 mL，校正pH为7.2～7.4。分装于烧瓶内。在0.1 MPa压力下高压灭菌15 min，备用。临用时加入乳糖并加热熔化琼脂。冷却至60 ℃左右，以无菌方式加入经灭菌的伊红美兰溶液，摇匀，倾注平皿备用。

（4）蛋白胨水（作靛基质试验用）：配方见表8-25所示。

表8-25 蛋白胨水配方 物质 用量 蛋白胨（或胰蛋白胨） 20 g 蒸馏水 1000 mL 物质 用量 氯化钠 5 g 制备方法：将上述成分加热熔化，调pH为7.0～7.2，分装小试管，在0.1 MPa压力下高压灭菌15 min。

（5）靛基质试剂 柯凡克试剂：将5 g对二甲氨基苯甲醛溶解到75 mL戊醇中，然后缓缓加入浓盐酸25 mL。 试验方法：接种细菌于蛋白胨水中，于44 ℃培养（24～48）h。沿管壁加柯凡克试剂（0.3～O.5）mL，轻摇试管。阳性者于试剂层显深玫瑰红色。

蛋白胨应含有丰富的色氨酸，每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。 （6）革兰氏染色法

1） 染液制备：按表8-26制备染液。

表8-26 染液的制备方法

成分 A、结晶紫染色液 B、革兰氏碘液 C、脱色液 D、复染液 a．沙黄复染液 制备方法 将结晶紫1 g溶于20 mL 95 %的乙醇中，然后与80 mL 1 %的草酸铵溶液混合 先将1 g碘和2 g碘化钾进行混合，加入少许蒸馏水，充分振荡。待完全溶解后，再加蒸馏水至300 mL。 95%乙醇 将0.25 g沙黄溶于10 mL 95 %的乙醇，然后用90 mL蒸馏水稀释。 称取碱性复红10 g，研细，加95 %乙醇100 mL，放置过夜，滤纸过滤。b．稀石炭酸复红液 取滤液10 mL，加5 %石炭酸水溶液90 mL，即为石炭酸复红液。再取此液10 mL，加水90 mL，即为稀石炭酸复红液。

2）染色法

① 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染l min，水洗。 ② 滴加革兰氏碘液，作用l min，水洗。

③ 滴加95 ％酒精脱色，约30 s，或将酒精滴满整个涂片，立即倾去，再用酒精滴满整个涂片，10 s后水洗。

④ 滴加复染液，复染l min，水洗。待干，镜检。 3）染色结果

革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。如用1∶10稀释石碳酸复红染色液作复染液，复染时间仅需10 s。 4．测定步骤

（1）取10 mL 1∶10稀释的样品，加到10 mL双倍浓度的乳糖胆盐培养基中，置44 ℃培养箱中培养（24～480h。如不产酸也不产气，则报告为粪大肠菌群阴性。

（2）如产酸产气，则划线接种到伊红美兰琼脂平板上，在37 ℃培养（18～24）h，同时取该培养液（1～2）滴接种到蛋白胨水中，在44 ℃培养24 h。经培养后，在上述平板上观察有无典型菌落生长，大肠菌群在伊红美兰琼脂培养基上的典型菌落呈深紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉紫色，中心较深的菌落，亦常为大肠菌群，均应注意挑选。 （3）挑选上述可疑菌落，涂片做革兰氏染色镜检。 （4）在蛋白胨水培养液中，加入靛基质试剂约0.5 mL，观察靛基质反应，阳性者液面呈玫瑰红色；阴性反应液面呈试剂本色。 5．检验结果

平板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阳性短杆菌，靛基质试剂验阳性，则可报告被检样品中检出粪大肠菌群。

6.4 绿脓杆菌的检验方法

绿脓杆菌在自然界分布甚广，空气、水、土壤中均有存在。它对人体致病，常引起人皮肤化脓感染，特别是烧伤、烫伤、眼部疾病者被感染后，常使病情恶化，并可引起败血症。因此，在化妆品标准中规定不得检出绿脓杆菌。

1．检验原理

其检查方法是根据绿脓杆菌生物学特征：革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外，还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在42 ℃下生长等。可与类似菌相区别。 2．

仪器

培养箱、三角烧瓶、试管、灭菌平皿、灭菌刻度吸管、显微镜、载玻片、接种针或接种环、电炉、高压消毒锅。 3．培养基和试剂

（1） SCDLP液体培养基

制备方法与前述SCDLP液体培养基制备一致。

（2） 十六烷基三甲基溴化铵培养基：配方见表8-27所示。

表8-27 十六烷基三甲基溴化铵培养基配方 物质 用量 牛肉膏 3 g 蛋白胨 10 g NaCl 5 g 物质 用量 十六烷三甲基溴化铵 0.3 g 琼脂 20 g 蒸馏水 1000 mL 制备方法：除琼脂外，将上述物质混合加热溶解，调pH为 7.4～7.6，加入琼脂，在69 kPa压力下灭菌20 min后，制成平板，备用。。

（3）乙酰胺培养基：配方见表8-28所示。

表8-28 乙酰胺培养基配方

物质 用量 乙酰胺 10.0 g K2HPO4 1.39 g KH2PO4 0.73 g 琼脂 20 g 物质 用量 NaCl 15.0 g 酚红 0.012 g MgSO4·7H2O 0.5 g 蒸馏水 1000 g 制备方法：除琼脂和酚红外，将其它成分加到蒸馏水中，加热溶解，调pH为7.2，加入琼脂、酚红，在0.1 MPa压力下高压灭菌20 min后，制成平板，备用。

（4）绿脓菌色素测定用培养基：配方见表8-29所示。

表8-29 绿脓菌色素测定用培养基配方

物质 用量 蛋白胨 20 g MgCl2 1.4 g K2SO4 10 g 物质 用量 琼脂 18 g 甘油（化学纯） 10 g 蒸馏水 1000 mL 制备方法：将蛋白胨、氯化镁和硫酸钾加到蒸馏水中，加温使之溶解，调pH至7.4，加入琼脂和甘油，加热溶解，分装于试管内，在69 kPa压力下高压灭菌20 min后，制成斜面，备用。

（5）明胶培养基：配方见表8-30所示。

表8-30 明胶培养基配方

物质 用量 牛肉膏 3 g 明胶 120 g 物质 用量 蛋白胨 5 g 蒸馏水 1000 mL 制备方法：取各成分加在蒸馏水中浸泡20 min，随时搅拌加温使溶解，调pH至7.4，分装于试管内，经在69 kPa压力下灭菌20 min后，直立制成高层，备用。

（6）硝酸盐蛋白胨水培养基：配方见表8-31所示。

表8-31 硝酸盐蛋白胨水培养基配方

物质 用量 蛋白胨 10 g 酵母浸膏 3 g 蒸馏水 1000 g 物质 用量 亚硝酸钠 0.5 g 硝酸钾 2 g 制备方法：将蛋白胨和酵母浸膏加到蒸馏水中，加温使溶解，调pH值为7.2。煮沸过滤后补足液量，加入硝酸钾和亚硝酸钠，溶解混匀，分装到加有小倒管的试管中，在69 kPa压力下灭菌20 min后，备用。

（7）普通琼脂斜面培养基：配方见表8-32所示。

表8-32 普通琼脂斜面培养基配方

物质 用量 蛋白胨 10 g 琼脂 15 g 牛肉膏 3 g 物质 用量 NaCl 5 g 蒸馏水 1000 mL 制备方法：除琼脂外，其余成分溶解于蒸馏水中，调pH为7.2～7.4，加入琼脂，加热溶解，分装试管，在0.1 MPa压力下高压灭菌15 min后，制成斜面,备用。

4．检验步骤

（1）增菌培养：取1∶10样品稀释液10 mL加到90 mL SCDLP液体培养基中，置42 ℃培养箱中，培养（18～24）h，如有绿脓杆菌生长，培养液面会有一层薄菌膜，培养液呈黄绿色或蓝绿色。如无SCDLP液体培养基时，可用普通肉汤培养基。检验含防腐剂的化妆品时，在每1000 mL普通肉汤中加1 g卵磷脂，7 g吐温80。

（2）分离培养：从培养液的薄菌膜处挑取培养物，划线接种在十六烷三甲基溴化铵琼脂平板上。置37 ℃培养（18～24）h。凡绿脓杆菌在此培养基上，其菌落为扁平无定型，向周边扩散或略有蔓延。表面湿润，菌落呈灰白色。菌落周围培养基常有水溶性色素扩散。此培养基选择性强，大肠艾希氏菌不能生长，革兰氏阳性菌生长较差。也可以用乙酰胺培养基进行分离，将菌液划线接种于平皿中，放37 ℃培养24 h，绿脓杆菌在此培养基上生长良好，菌落扁平，边缘不整，菌落周围培养基略带粉红色，其它菌不生长。

（3）染色镜检：挑取可疑的菌落，涂片，革兰氏染色，镜检为革兰氏阳性者进行氧化酶试验。

（4）氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内，用无菌玻璃棒挑取绿脓杆菌可疑菌落涂在滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的10 g／L二甲基对苯二胺试液，在（15～30）s内出现粉红色或紫红色，为氧化酶试验阳性；若培养物不变色，氧化酶试验阴性。

（5）绿脓菌素试验：取可疑菌落（2～3）个，分别接种在绿脓菌素测定用培养基上，37 ℃培养24 h，加入氯仿（3～5）mL，充分振荡，使培养物中的绿脓菌素溶解于氯仿液内，待氯仿提取液呈蓝色时，用吸管将氯仿移到另一试管中，并加入l mol／L的盐酸 l mL左右，振荡后，静置片刻。如上层盐酸液内出现粉红色到紫红色时为阳性，表示被检物中有绿脓菌素存在。

（6）硝酸盐还原产气试验：挑取被检的纯培养物，接种在硝酸盐胨水中，于37 ℃培养24 h，观察结果。凡在硝酸盐胨水培养基内的小倒管中有气体者，即为阳性，表明该菌能还原硝酸盐，并将亚硝酸分解产生氮气。

（7）明胶液化试验：取绿脓杆菌可疑菌落的纯培养物，穿刺接种在明胶培养基中，于37 ℃培养24 h，取出放入冰箱（10～30）min，如仍是溶解状即为明胶液化试验阳性，如凝固不溶者为阴性。 （8）42 ℃生长试验：提取纯培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，放在（41～42） ℃培养箱中，培养（34～48）h，绿脓杆菌能生长，为阳性。近似的荧光假单胞菌则不能生长。 （9）检验结果报告：被检样品经增菌分离培养后，经证实为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性者，即可报告被检样品中检出有绿脓杆菌；如绿脓菌素试验阴性而液化明胶，硝酸盐还原产气和42 ℃生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中有绿脓杆菌。

6.5 金黄色葡萄球菌检验

金黄色葡萄球菌在外界分布较广，抵抗力也较强，能引起人体局部化脓性病灶，严重时可导致败血症，因此化妆品中检验金黄色葡萄菌有重要意义。

1．检验原理

美国CTFA和FDA检验化妆品中的金黄色葡萄球菌时，不经增菌直接接种到Vogel-Johnoson琼脂培养基上；日本方法则先用SCDLP或SCD液体培养基增菌后，再接种Vogel-Johnoson琼脂培养基。经试验证明增菌后检出效果好。故我国采用先增再分离方法。

分离金黄色葡萄球菌的培养基很多，如Vogel-Johnoson琼脂、Baird-Parker琼脂、血琼脂、卵黄高盐琼脂、TMP琼脂等。考虑到国内的习惯应用，可采用Baird-Parker琼脂或血琼脂。下一步的检验各国都相同。

根据本菌特有的形态及培养特性，用Baird-Parker平板进行分离，该平板中的氯化锂可抑制革兰氏阴性细菌生长，丙酮酸钠可刺激金黄色葡萄球菌生长，以提高检出率，并利用分解甘露醇和血浆凝固酶等特征来鉴别。

2．培养基和试剂

（1）SCDLP液体培养基 制备方法与前述SCDLP液体培养基制备一致。 （2）7.5 %氯化钠肉汤培养基：配方见表8-33所示。

表8-33 7.5 %氯化钠肉汤培养基配方

成分 组成 成分 组成 蛋白胨 牛肉膏 10g 3% 氯化钠 蒸馏水 75% 1000mL 制备方法：将上述成分加热溶解，调pH为7.4，分装，121 ℃，1.5 min高压灭菌 （3）Baird-Parker平板：配方见表8-34所示。

表8-34 Baird-Parker平板配方 成分 胰蛋白胨 牛肉膏 酵母浸膏 甘氨酸 组成 10 g 5 g 1 g 12 g 成分 氯化锂（LiCl·6H2O） 琼脂 蒸馏水（pH 7.0±0.2） 组成 5 g 20 g 950 mL 增菌剂的配制：30 %卵黄盐水50 mL与除菌过滤的1 %亚碲酸钾溶液10 mL混合，保存于冰箱内。

Baird-Parker平板制备方法：将各成分中到蒸馏水中，加热煮佛完全溶解，冷至25 ℃校正pH。分装每瓶95 mL高压灭菌15 min。临用时热溶化琼脂，每95 mL加入预热至50 ℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂5 mL，摇匀后倾注于平板。培养基应的致密不透明的。使用前在冰箱贮存不得超过48 h。

（4）血琼脂培养基：配方见表8-35所示。

表8-35 血琼脂培养基配方

成分 营养琼脂 组成 100 mL 成分 脱纤维羊血（兔血） 组成 10 mL 制备方法：将营养琼脂加热溶化，待冷至50 ℃左右以无菌操作加入脱纤维羊血，摇匀，制成平板，置冰箱内备用。

（5）甘露醇发酵培养基：配方见表8-36所示。

表8-36 血琼脂培养基配方 成分 组成 成分 组成 蛋白胨 氯化钠 甘露醇 10 g 5 g 10 g 牛肉膏 0.2 %溴香草酚蓝溶液 蒸馏水 5g 10mL 1000 mL 制备方法：将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏加到蒸馏水中，加热溶解，调pH至7.4，加入甘露醇和指示剂，混匀后分装试管中，115 ℃灭菌20 min，备用。

（6）兔（人）血浆制备

取3.8柠檬钠溶液（121 ℃灭菌30 min）1份加兔（人）全血4分，混匀静置，（2000～

3000）r/ min离心（3～5）min。血球下沉，取上面血浆。

3．仪器

（1）显微镜、培养箱、离心机、灭菌试管、载玻片。 （2）灭菌吸管：1 mL，5 mL，10 mL

4．测定步骤

(1)增菌

取1∶10稀释的的样品10 mL接种到90 mL SCDLP液体培养基中（如无此培养基也可用7.5 %氯化钠肉汤培养基），置37 ℃培养箱，培养24 h。

注：如无此培养基地也可用7.5 %氯化钠肉汤培养基，检验含防腐剂的化妆品时，可在1000 mL此培养基中加1 g卵磷脂，7 g吐80。

(2)分离

自上述增菌培养液中，取（1～2）接种环，划线接种在Baird-Parker氏培养基，如无此培养基地也可划线接种到血琼脂平板，置37 ℃培养（24～48）h。在血琼脂平板上菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。在Baird-Parker氏培养基上为圆形，光滑，凸起，湿润，直径为（2～3）mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明带。用接种针接触菌落似有奶油树胶的软度。偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无混浊带及透明带。挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置37 ℃培养24 h。

(3)染色镜检

挑取分纯菌落，涂片，进行革兰氏染色，镜检。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，排列成葡萄状，无芽孢，无夹膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为（0.5～1）μm。

(4)甘露醇发酵试验

取上述分纯菌落接种到甘露醇发酵培养基中，置37 ℃培养24 h。，金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇产酸。

(5)血浆凝固酶试验

玻片法：到清洁干燥载玻片，一端滴加一滴灭菌生理盐水，另一端滴加一滴血浆，用接种环挑取待检菌落，分别在生理盐水及血浆中充分研磨混合。血浆与菌苔混悬液在5 min内出现团块或颗粒状凝块时，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固现象者为阳性，如两者均无凝固现象则为阴性，主玻片试验呈阴性反应或盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验。

试管法：吸取1∶4的新鲜血浆0.5 mL。混匀，放37 ℃温箱或水浴中，每半小时观察一次，24 h之内如于现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各0.5 mL，分别加入灭菌小试管内0.5 mL 1∶4的血浆混匀，做为对照。

5．检验结果

凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸。血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。

6.6 霉菌和酵母菌的检验 1、检验原理

霉菌和酵母菌数测定（Determination of molds and yeast count）是指化妆品检样在一定

条件下培养后，1g或1ml化妆品中所污染的活的霉菌和酵母菌数量，籍以判明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般卫生状况。

本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性，在虎红培养基上，置28℃±2℃培养72h，计算所生长的霉菌和酵母菌数。

2、 仪器和设备

培养箱：28℃±2℃；振荡器；天平；三角瓶：250ml；试管：15×150mm；平皿:直径9cm；吸管：1ml、10ml；量筒：200ml；酒精灯； 高压灭菌器

3、 培养基和试剂℃

1）生理盐水

与细菌总数测定用的生理盐水一致。 2）虎红﹙孟加拉红﹚培养基

表37 虎红培养基

成分 蛋白脓 葡萄糖 磷酸二氢钾 硫酸镁﹙含7H2O﹚ 用量 5g 10g 1g 0.5g 成分 涼脂 1/3000虎红溶液﹙四氯四碘荧光素﹚ 氯霉素 蒸馏水 用量 20g 100ml 100mg 1000ml 制法：将上述各成分﹙除虎红外﹚加入蒸馏水中溶解后，再加入虎红溶液分装后，

℃

103.43kpa﹙121151b﹚20min高压灭菌，另用少量乙醇溶解氯霉素，过滤溶解后加入培养基中，若无氯霉素，使用时每1000ml加链霉素30mg

4、操作步骤

1）样品稀释

与细菌菌落总数测定稀释方法一致。 2）培养

取1：10、1：100、1：1000的检液各1ml分别注入灭菌平皿内，每个稀释各用2个平皿，注入融化并冷至45℃±1℃左右的虎红培养基，充分摇匀。凝固后，翻转平板，置28℃±1℃培养72h±2h，计数平板内生长的霉菌和酵母菌数。若有霉菌蔓延生长，为避免影响其它霉菌和酵母菌的计数时，于48h±2h应及时将此平板取出计数。

3）计算方法

先点数每个平板上生长的霉菌和酵母菌菌落数，求出每个稀释度的平均菌落。判定结果时，应选取菌落数在5个～50个范围之内的平皿计数，乘以稀释倍数后，即为每g﹙或每ml﹚检样中所含的霉菌和酵母菌数。其它范围内的菌落数报告应参照菌落总数的报告方法报告之。

5．检验结果

每g﹙或每ml﹚化妆品含霉菌和酵母菌数以CFU/g﹙ml﹚表示。