鉴定细胞活性的实验方法

・４２・　生物学教学２０１０年（第３５卷）第７期　鉴定细胞活性的实验方法　张玉明　（江苏省仪征中学２１１９００）　摘要本文介绍了５种与高中生物学教学有关的鉴定细胞活性的实验方法。　质壁分离法台盼蓝法健那绿法红墨水法１１℃法　关键词ｌ质壁分离法　呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原成为无色　１．１　原理植物活细胞的原生质层具有选择透过性，　状态，因此健那绿染液可以使活细胞中的线粒体呈现　而死细胞则为全透性。原生质层的选择透过性是质壁　蓝绿色，而细胞质接近无色。　分离的先决条件，因此能发生质壁分离的细胞就表示　若细胞已经死亡，则没有上述的现象产生。线粒　是活的，不能发生质壁分离的则说明是死的。　体能在健那绿染液中维持活性数小时，通过染色，可以　１．２仪器药品及材料洋葱及其他植物材料、酒精　在高倍显微镜下观察到生活状态的线粒体的形态和分　灯、显微镜、小刀、镊子、载玻片、盖玻片、质量浓度为　布。　０．３ｇ／ｍＬ蔗糖溶液。　３．２仪器药品及材料①ｌ％健那绿染液的配制：将　１．３　实验步骤①撕取洋葱表皮细胞放在载玻片中　０．５ｇ健那绿溶解于５０ｍＬ生理盐水中，加温到３Ｏ℃一　央，滴加２滴蔗糖溶液，盖上盖玻片制成临时装片，放　４０℃，使其充分溶解，配制质量分数为１％健那绿染　在显微镜下观察。②撕取相同部位的洋葱表皮细胞，　液。②显微镜、载玻片、盖玻片、牙签。　并用冷冻、加热、干燥、酒精浸蘸等办法将细胞杀死，然　３．３　实验步骤①制作人的口腔上皮细胞装片：在洁　后依上述方法制成临时制片，放在显微镜下观察。　净的载玻片中央滴一滴健那绿染液。用消毒的牙签在　１．４现象与结论能发生质壁分离的，表示这些细胞　自己漱净的口腔内侧壁上轻轻地刮几下，把牙签上附　是活的；不能发生质壁分离的，表示这些细胞是死的。　有的碎屑的一端，放在染液中涂抹几下，盖上盖玻片。　２台盼蓝染色法　②观察线粒体：在高倍显微镜下观察经过染色的的人　２．１　原理正常活细胞的细胞膜结构是完整的，能够　的口腔上皮细胞临时装片，观察线粒体的染色情况。　排斥台盼蓝，使之不能够进入细胞内，而丧失活性或细　３．４现象与结论线粒体被染成蓝色而细胞质接近　胞膜不完整的细胞，细胞膜的通透性增加，台盼蓝可进　无色的细胞都为活细胞，线粒体不被染成蓝色的都是　入细胞内，将细胞核染成蓝色。通常认为细胞膜完整　死细胞。　性丧失，即可认为细胞已经死亡。因此，借助台盼蓝染　４红墨水染色法　色可以区分活细胞和死细胞。　４．１　原理此方法一般用来检测种子胚细胞的活性。　２．２仪器药品及材料①配制４％台盼蓝母液：称取　凡有生活力的种子其胚细胞的细胞膜具有选择透过　４ｇ台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至ｌＯＯｍＬ，用　性，某些染料如红墨水不能进入细胞内，用红墨水进行　滤纸过滤，４￣Ｃ保存。使用时，用ＰＢＳ缓冲液稀释至０．　染色，则种子胚部不染色，而丧失活力的种子其胚邪细　４％。②吸管、血球计数板、显微镜。　胞的细胞膜丧失了选择吸收的能力，染料进入细胞内　２．３　实验步骤①制备酵母菌细胞悬液。②染色：取　使胚部染色。所以可根据种子胚部是否染色来判断种　９ｍＬ酵母菌细胞悬液移入试管中，加１ｍＬ　０．４％台盼　子细胞的死活。　’　蓝溶液，混匀，然后用吸管滴加到血球计数板上的盖玻　４．２仪器药品及材料①红墨水溶液的配制：取市售　片的边缘，让溶液自行渗入。③用显微镜进行观察酵　红墨水稀释２０倍（１份红墨水加ｌ９份自来水）作为染　母菌细胞核的染色情况。　色剂。②玉米、小麦等作物的新种子、陈种子，培养皿，　２．４现象与结论细胞核被染成蓝色的都是死细胞，　小刀。　没有被染成蓝色的都是活细胞。　４．３　实验步骤①先将待测种子用水浸泡３—４ｈ，待　２．５注意事项　台盼蓝染细胞时，时间不宜过长，否　充分吸胀后取出一部分种子，在沸水中煮沸３～５ｍｉｎ，　则部分活细胞也会着色，会干扰计数。　作为死种子。②取浸好的新种子、陈种子和死种子各　３健那绿染色法　５０粒，如为小麦和玉米，则用单面刀片沿胚部中线纵　３．１　原理　健那绿染液是专一性染线粒体的活细胞　切成两半，其中一半用于测定。③将备好的种子分别　染料，它可穿过活细胞膜进入细胞内。线粒体中细胞　放在培养皿内，加入红墨水溶液，以浸没种子为度。④　色素氧化酶能够使染料保持氧化状态（即有色状态）　染色１０～２０ｒａｉｎ后倾出溶液，用自来水反复冲洗种子，　物学教学２０１０年（第　５卷）第７　直到所染颜色不再洗脱为止。⑤对比观察冲洗后的新　溶解，可先用少量酒精将其溶解后再加水）。②玉米、　种子、陈种子和死种子胚部着色情况。　小麦等作物的新种子、陈种子，培养皿，小刀。　４．４现象与结论凡胚部不着色或略带浅红色者，即　５．３　实验步骤①将玉米、小麦等作物的新种子、陈　具有生活力的种子，其胚部的细胞是活的；凡胚部染成　种子或死种子，用温水（３０℃）浸泡２～６ｈ，使种子充分　与胚乳相同的红色，则为死种子，其胚部的细胞是死的。　吸胀。②随机取种子２份，每份５０粒，沿种胚中央准　５　ＴＦＣ染色法　确切开，取每粒种子的一半备用。③把切好的种子分　５．１　原理ｒＩＴＣ方法通常也是用来检测种子胚细胞　别放在培养皿中，加ＴＴＣ溶液，以浸没种子为度。④放　活性的。凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都　入３０℃～３５℃的恒温箱内保温３０ｍｉｎ．也可在２Ｏ℃左　能产生还原剂氢，而无生活力的种胚则不能。当无色　右的室温下放置４０—６０ｒａｉｎ．⑤保温后，倾出药液，用自　的ＴＩ＇Ｃ（氯化三苯基四氮唑）溶液渗入种胚的活细胞　来水冲洗２～３次，立即观察种胚着色情况。　内，并作为氢受体被氢还原时，可产生红色的三苯基甲　５．４现象与结论胚部被染上红色的，表示种子细胞　腙（ＴＴＦ），胚便染成红色。当种胚细胞生活力下降或　是活的，胚部没有被染上红色而呈无色的，表示种子细　死亡时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下　胞是死的。　降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子　５．５注意事项①ｒＩ’Ｉ＇ｃ溶液最好现配现用，如需贮藏　细胞的死活。　则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不　５．２仪器药品及材料①ＴＴｃ溶液的配制：取ｌｇ　ＴＴＣ　可再用。②染色温度一般以２５℃～３５ｑＣ为宜。③不同　溶于ｌＬ蒸馏水或冷开水中，配制成０．１％的ＴＩ＇Ｃ溶　作物种子胚细胞活性的测定，所需试剂浓度、浸泡时　液。药液ｐＨ应在６．５—７．５，以ｐＨ试纸试之（如不易　间、染色时间不同。　一类单项选择题的特殊解法　刘林军　（广东省梅州市五华县萃文中学５１４４５９）　有一类单项选择题，由题干提供相关的数据最后　Ａ　￣ｙ＝９Ｏａｘ＋１０ｘ　９０ａｘ　１０ｘ虫　得出的答案是一个公式，然后从四个选项中的四个公　式选出正确的答案。据笔者对这类题型解法的了解，　都是采用“正解法”，即从题干寻找有效信息做出结　果，然后从四个选项中找出一个与做出结果相同的一　囊ＤＣ　．Ｙ　＝　＋　＋２１０　ａ０ｘａｘ　　＋５　ｘ１　０ｘ　Ｙ蕈　／＼　／　、／　＼　鸟Ｘ　Ｉ　项就为答案。其实对这类题型可用“设数检验法”，即　设ａ＝１，ｘ＝１；则由食物网变成食物链：草一虫一　根据题意设立相应的数据（能简便算出答案即可）代　鸟。所以，鸟要增加１，则虫的消耗至少为５，草的最终　入四个选项的公式计算出结果，计算出的结果符合题　消耗至少为２５；现在把ａ：１、Ｘ＝１代人四个选项中去，　意的一个选项即为答案。　能得出２５的为正确答案，故知ｃ为答案。　例１．若某种群有成鼠ａ只（计算时为亲本），每只　例３．在营养和生存空间等没有限制的理想条件　雌鼠一胎产子ｌ６只，各代性别比例均为ｌ：１，子代幼鼠　下，某细菌每２０分钟就分裂繁殖一次。现将该细菌种　发育为成鼠，所有个体的繁殖力都相等，则从理论上计　群（ｍ个个体）接种到培养基（资源、空间无限），Ｔｈ后，　算，第ｎ代产生的子代数为（　）？　该种群的个体总数是（　）。　Ａ．ａ　Ｘ　８ｎ一１　Ｂ．ａ×８ｎ＋１　Ｃ．ａ×８ｎ　Ｄ．ａ×８“一２　Ａ．ｍ　ｘ２Ｔ　Ｂ．Ｍ　ｘ２２０　Ｃ．２Ｔ／２０　Ｄｍ　ｘ２３Ｔ　．设ａ为２（一雌一雄），ｎ为ｌ，依题意知第一代数　这道题本意是考查种群数量“Ｊ”型增长的知识内　量为ｌ６，把ａ＝２，ｎ＝ｌ代人４个选项，只有ｃ项的计算　容，可以通过“Ｊ’，型的种群数量增长公式Ｎ。＝Ｎ０　‘得　结果为１６，故ｃ为正确答案的。如采用“设数检验法”　出答案。如果这道题走在还没有学到种群数量增长公　解题快且对，若采用“正解法”则耗时且难得出正确答　式时出现，也可采用“设数检验法”来做，设Ｔ＝１、Ｉｎ＝　案。　１，则ｌ小时可分裂３次（１×６０÷２０：３），１个细菌分　例２．在右图食物网中ａ表示动物性食物所占比　裂３次可产生８个个体；把Ｔ＝ｌ、ｍ＝１代人四个选项　例，若要使鸟体重增加ｘ，至少需要生产者量为Ｙ，那么　中去，只有Ｄ选项的结果为８，故Ｄ为答案。　ｘ与ｙ的关系可表示为（　）。