特应性皮炎患者外周血 PPAR-γ、NF-kB 的表达

２１４　Ｊ　Ｄｉａｇｎ　Ｔｈｅｒ　Ｄｅｒｍａｔｏ—Ｖｅｎｅｒｅｏｌ，Ｊｕｎ．２０１５．Ｖｏ１．２２，Ｎｏ．３　・短篇论著・　特应性皮炎患者外周血ＰＰＡＲ一　ＮＦ—ｋＢ的　表达　黎志刚，　吴江，　许志萍，　郑学毅，　孙广政　（广州市第一人民医院皮肤科，广东广州５１０１８０）　［摘要］　目的：研究过氧化物酶体增殖物激活受体一　（ＰＰＡＲ．　）及核因子．ｋａｐｐａ　Ｂ（ＮＦ．ｋＢ）在特应性皮　炎（ＡＤ）患者外周血中的表达水平，探讨其与疾病发病的关系。方法：采用Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ法检测２２　例ＡＤ患者外周血单个核细胞中ＰＰＡＲ—　、ＮＦ—ｋＢ的水平，与ｌ５例健康志愿者进行比较分析。结果：与　正常人对照组相比，ＰＰＡＲ－　、ＮＦ－ｋＢ在ＡＤ患者外周血中过度表达，差异有统计学意义（ｔ值分别为　３．４５、４．５２，Ｐ值均＜０．０５）。结论：ＰＰＡＲ一　、ＮＦ—ｋＢ在ＡＤ患者外周血中的表达水平均升高，其表达上调　可能与ＡＤ发病有关。　［关键词］特应性皮炎；ＰＰＡＲ一　；ＮＦ．ｋＢ　［中图分类号］Ｒ７５８．２　［文献标识码］Ａ　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４—８４６８．２０１５．０３．０１７　特应性皮炎（ａｔｏｐｉｃ　ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ，ＡＤ）是一种与　严重程度分级标准。要求至少１周前未外用过糖　遗传、免疫相关的慢性复发性炎症性皮肤病，常伴　有过敏性哮喘或过敏性鼻炎，其发病机理未完全　明确，目前认为是由Ｔ细胞介导的免疫反应　１］。　过氧化物酶体增殖物激活受体（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ　ｐｒｏｌｉｆ－　ｅｒａｔｏｒ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ＰＰＡＲｓ）是一类由配体激　活的核转录因子，在调控细胞炎症反应中发挥重　要作用，ＰＰＡＲ一　具有调节巨噬细胞和Ｔ细胞炎　皮质激素，４周前未系统使用过糖皮质激素、免疫　抑制剂及光疗，不伴有其他类型皮肤病，不伴有肿　瘤或其他严重疾患。共纳入２２例，其中男ｌ２例，　女１０例，年龄５～３６岁，中位年龄１２岁。同时选　择本院ｌ５例体检健康志愿者为对照，无器质性疾　患及过敏性疾病，年龄ｌ８～３２岁，中位年龄２４　岁。对照组的年龄、性别构成与ＡＤ组相比差异　症的作用，在其作为配体依赖的转录因子的能力　的炎症过程中具有多效性影响【２　Ｊ。核因子一ｋＢ　（ｎｕｃｌｅａｒ　ｆａｃｔｏｒ—ｋＢ，ＮＦ—ｋＢ）是一种重要的核转录　因子，调控多种基因的表达，在机体的炎症反应方　面发挥重要作用，在调节细胞因子、趋化因子、粘　附分子及其他炎性介质的基因转录中起核心作　用　。本实验就ＰＰＡＲ一　ＮＦ—ｋＢ在ＡＤ患者外周　血中的表达进行了检测，并探讨其意义。　无统计学意义（ｔ＝０．２３，　＝０．１０，Ｐ值均＞　０．０５），具可比性。本实验经本院伦理委员会批　准实行，研究对象均签署知情同意书。　１．２方法　１．２．１人外周血单个核细胞的分离抽清晨空　腹肘静脉肝素抗凝血３　ｍＬ，２　０００　ｒ／ｍｉｎ离心　１０　ｍｉｎ；吸取淋巴细胞分离液２～１５　ｍＬ置于离心　管中，将稀释血液缓慢加入到分层液上；将离心管　置水平离心机内，２０℃，２　０００　ｒ／ｍｉｎ，２０　ｍｉｎ；用毛　细吸管吸取单核细胞层置于另一支离心管中，用５　１材料与方法　１．１标本来源和一般资料　收集本院２０１２年９月至２０１４年８月我院皮　肤科门诊及住院中至重度急性或亚急性期ＡＤ患　倍体积的ＰＢＳ洗２次，３　０００　ｒ／ｍｉｎ，５　ｍｉｎ；完成ＰＲ—　ＭＩ一１６４０定容细胞，调整细胞浓度为５×１０　／ｍＬ。　１．２．２蛋白免疫印迹（ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ）检测外周血　单个核细胞中ＰＰＡＲ一　ＮＦ—ｋＢ蛋白含量小鼠　者，诊断均符合Ｗｉｌｌｉａｍｓ标准　及Ｒａｊｋａ等ＡＤ　基金项目：广东省科技计划项目（编号：２０１２Ｂ０３１８００３４２）　抗人ＰＰＡＲ一　与ＮＦ—ｋＢ单克隆抗体均购自美国　皮肤性病诊疗学杂志２０１５年６月　第２２卷第３期　２１５　Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ公司。取分离出来的中间层白细胞液　０．１　ｍＬ，加入约１　ｍＬ细胞裂解液，冰上充分匀浆，　离心１０　ｍｉｎ后取上清液，一８０℃冰箱保存。分别　取不同组的细胞蛋白０．２５　ｇ，经１０％聚丙烯酰　胺凝胶（ＳＤＳ—ＰＡＧＥ）电泳后，将凝胶中蛋白电泳　转移至硝酸纤维膜上，以５％脱脂奶粉Ｔｒｉｓ缓冲　液封闭后，加入一抗［ＰＰＡＲ一　、ＮＦ—ｋＢ抗体　（１：１　ｏｏｏ）、Ｂ一肌动蛋白抗体（１：２　ｏｏｏ）］摇床孵育　过夜，洗涤后加入二抗（山羊抗小鼠多克隆、山羊　抗兔多克隆抗体，１：４ｏｏｏ）室温孵育８０　ｍｉｎ后，电　化学发光法底物化学发光显色后曝光显影。目标　条带使用图像分析软件进行分析，测定灰度值，计　算各组ＰＰＡＲ一　ＮＦ—ｋＢ相对表达量。目标蛋白　表达量使用Ｂ一肌动蛋白进行校正。　１．３统计学方法　用ＳＰＳＳ　１３．０软件进行统计分析。计量资料　数据以均数±标准差表示，组间比较采用ｔ检验，　相关性采用Ｐｅａｒｓｏｎ相关分析。以Ｐ＜０．０５为差　异有统计学意义。　２　结果　２．１　对照组及ＡＤ患者外周血单个核细胞中　ＰＰＡＲ一　ＮＦ—ｋＢ的表达　ＡＤ患者组ＰＰＡＲ－￣／的阳性表达计数为（０．４５－ｔ－　Ｏ．１３），高于健康对照组的（０．３１±０．１０），两组比　较，差异有统计学意义（ｔ＝３．４５，Ｐ＜０．０５）。ＡＤ　患者组ＮＦ—ｋＢ的阳性表达计数为（０．６３－ｔ－Ｏ．１６），　高于健康对照组的（０．４７±０．１４），两组比较，差　异有统计学意义（ｔ＝４．５２，Ｐ＜０．０５），见表ｌ。　表１　特应性皮炎患者组与对照组ＰＰＡＲ一　、　ＮＦ－ｋＢ蛋白表达（ｉ±ｓ）　２．２　ＡＤ患者外周血单个核细胞中ＰＰＡＲ一＾ｙ和　ＮＦ—ｋＢ表达的相关性分析　对ＡＤ患者外周血单个核细胞中ＰＰＡＲ．　和　ＮＦ—ｋＢ的表达计数进行相关性分析，结果发现　ＰＰＡＲ・＾ｙ水平改变与ＮＦ—ｋＢ呈正相关（ｒ＝０．４３，　Ｐ＜０．０５）。　３讨论　ＡＤ又称异位性皮炎、遗传过敏性皮炎，是一　种常见的慢性、复发性、瘙痒性、炎症性皮肤病，患　者往往有剧烈瘙痒，严重影响生活质量，其发病　与遗传、免疫和环境等因素密切相关　Ｊ，免疫异　常在其发病中起关键作用。常伴有过敏性哮喘、　食物过敏及过敏性鼻炎，是系统性疾病在皮肤的　表现形式。而ＡＤ产生这些表现的关键是局部和　全身免疫反应的相互作用。ＰＰＡＲ．＾ｙ是许多信号　转录的关键因子，在组织中分布广泛，在调控细胞　炎症中起到负性调节作用，抑制促炎因子的产生，　抑制Ｔ细胞增殖　Ｊ，通过参与Ｔｈｌ／Ｔｈ２细胞分化　而发挥免疫调节功能。其结构与配体结合在阻断　炎症中起重要作用ｒ　。ＮＦ—ｋＢ可以调控许多细胞　因子、炎症介质的释放。ＮＦ—ｋＢ的活化产生大量　的前炎症因子，介导天然和获得性免疫。已知在　结构上ＰＰＡＲ一＾ｙ能与ＮＦ．ｋＢ结合，推测ＮＦ—ｋＢ和　ＰＰＡＲ一　在特应性皮炎中的发生发展中可能具有　协同作用。　以往对ＡＤ的研究主要针对皮肤角质形成细　胞的研究，本实验采用蛋白免疫印迹法检测ＡＤ　患者外周血单个核细胞中ＰＰＡＲ一＾ｙ、ＮＦ．ｋＢ蛋白表　达水平，发现ＰＰＡＲ—　、ＮＦ—ｋＢ均明显高于正常对　照组（Ｐ＜０．０５），表明ＰＰＡＲ一　ＮＦ—ｋＢ参与了ＡＤ　的发病过程，可能与ＰＰＡＲ一　激活后通过诱导机　体天然免疫系统的成熟而促进Ｔｈ２反应相关，　ＰＰＡＲ一　在皮肤炎症反应中具有抗炎作用的同　时，是否有促炎作用有待进一步研究。以往有研　究表明ＰＰＡＲ一＾ｙ在ＡＤ患者皮损中的表达低于正　常组织，而ＮＦ—ｋＢ高于正常组织　Ｊ。本实验ＡＤ　患者外周血中ＰＰＡＲ．＾ｙ、ＮＦ．ｋＢ的表达同样高于正　常对照组，ＰＰＡＲ．　、ＮＦ．ｋＢ在皮损与血液中的变　化情况有待进一步研究。　综上所述，ＡＤ患者外周血中ＰＰＡＲ一　ＮＦ—ｋＢ　的表达增高与ＡＤ的发生、发展密切相关，并可　能存在协同作用。随着临床研究的不断深入和内　在机制的阐明，ＡＤ发病机制正在不断地完善，为　以后的治疗提供了新的方向及思路。　［参考文献］　［１］曾波，陈金．特应性皮炎研究进展［Ｊ］．实用医院临床　２１６　］ｊ］Ｊ］●ｊ］●　］ｊ　杂志，２０１２，９（２）：１７８—１８１．　Ｇｌａｓｓ　ＣＫ，Ｓａｉｊｏ　Ｋ．Ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｔｒａｎｓｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｐａｔｈ—　ｗａｙｓ　ｔｈａｔ　ｒｅｇｕｌａｔｅ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ　ａｎｄ　Ｔ　ｇａｍｍａ　ａｇｏｎｉｓｔｓ　ｒｏｓｉｌｉｔａｚｏｎｅ　ａｎｄ　ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ　ｉｎ　ｅｘｐｅｒｉ—　ｍｅｎｔａｌ　ｃｏｌｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｐｈｙｓｉｏｌ　Ｐｈａｍａｃｏｌ，２０１２，６３（６）：６３１—　６４０．　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｎａｔ　Ｒａｖ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１０，１０（５）：３６５—３７６．　Ｚｉｎｇａｒｅｌｌｉ　Ｂ，Ｃｏｏｋ　ＪＡ．Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ—ｇａｍｍａ　ｉｓ　ａ　ｎｅｗ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｔａｒｇｅｔ　ｉｎ　ｓｅｐｓｉｓ　ａｎｄ　［７］Ｊｕｎｇ　Ｙ，Ｓｏｎｙ　Ｓ，Ｃｈｏｉ　Ｃ．Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ　ａｃｔｉｖａｌｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｇａｍｍａ　ａｇｏｎｉｓｌｓ　ＴＮＦ　ａｌｐｈａ－－ｉｎｄｕｃｅｄ　ＩＣＡＭ－－１　ｅｘ－－　ｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｂｙ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ａ　ｍａｎｎｅｒ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ　ｄｅ—　ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｓｈｏｃｋ，２００５，２３（５）：３９３—３９９．　Ｗｉｌｌｉａｍｓ　ＨＣ，Ｂｕｒｎｅｙ　ＰＧ，Ｈａｙ　ＲＪ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ＵＫ　Ｗｏｒｋ—　ｉｎｇ　ｐａｒｔｙ　Ｓ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　Ｃｒｉｔｅｒｉａ　ｆｏｒ　Ａｔｏｐｉｃ　Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ．Ｉ．　Ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｍｉｎｉｍｕｍ　ｓｅｔ　ｏｆ　ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｏｒｓ　ｆｏｒ　ａｔｏｐｉｅ　ｐｅｎｄｅｎｔ　ｏｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅａｃｔｉｖｅ　ｏｘｙｇｅｎ　ｓｐｅｃｉｅｓ［Ｊ］．Ｉｍ—　ｍｕｎｏｌ　Ｌｅｔｔ，２００８，１１７（１）：６３—６９．　［８］黎志刚，吴江，刘衍彬，等．过氧化物酶体增殖物激活　受体叫及核因子一ＫＢ在特应性皮炎患者皮损中的表　达及意义［Ｊ］．实用皮肤病学杂志，２０１３，６（３）：１３８—　１３９，１４２．　ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｂｒ　Ｊ　Ｄｅｒｍａｔｏｌ，１９９４，１３１（３）：３８３—３９６．　Ｂｒｏｗｎ　Ｓ，Ｒｅｙｎｏｌｄｓ　ＮＪ．Ａｔｏｐｉｃ　ａｎｄ　ｎｏｎ—ａｔｏｐｉｃ　ｅｃｚｅｍａ　［Ｊ］．ＢＭＪ，２００６，３３２（７５４１）：５８４—５８８．　Ｃｅｌｉｎｓｋｉ　ｋ，Ｄｗｏｒｚａｎｓｋｉ　Ｔ，Ｆｏｒｎａｌ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｎｔｉ・・ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ａｎｄ　ｔｈｅｒａｐｅｎｔｉｃ　ａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ＰＰＡＲ－－　［收稿日期］２０１５—０３—２０　［修回日期］２０１５—０５—０５　・会议纪要・　２０１５年全球真菌感染论坛在西雅图举办　席丽艳　（中山大学孙逸仙纪念医院皮肤科，广东广州５１０１２０）　２０１５年２月２１～２２日，全球真菌感染论坛在美国华盛顿州西雅图市系统生物研究所召开，全球真菌感　染基金会（Ｔｈｅ　Ｇｌｏｂａｌ　Ａｃｔｉｏｎ　Ｆｕｎｄ　ｆｏｒ　Ｆｕｎｇａｌ　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ，ＧＡＦＩ￣’Ｉ）协助举办了这次会议。来自２１个国家的医　学真菌学工作者参会，包括研究人员、临床医生以及来自世界卫生组织（ＷＨＯ）、美国疾病预防控制中心　（ＣＤＣ）、美国全球ＡＩＤＳ协调员办公室、生物技术产业组织全球卫生事业机构等政府机构、基金会组织、生物　制药和诊断公司代表等。参会代表着重讨论了隐球菌性脑膜炎、组织胞浆菌病、卡氏肺孢子虫病及慢性肺曲　霉病等的患病率、诊断方法及治疗前景等，并准备建立全球真菌感染防治网络。　我国医学真菌学家、中山大学孙逸仙纪念医院皮肤科席丽艳教授、吉林大学病原生物学部王丽教授受邀　出席会议，并在会上特别提出我国作为发展中国家，真菌感染发病率及死亡率高，感染人群数量多，应引起国　际组织的广泛重视和大力支持，希望能将亚太地区的艾滋病相关的地域性真菌感染如马尔尼菲青霉病等写　入诊疗指南。　据悉，全球每年死于真菌感染的人高达１３５万，和结核病引起的死亡率一样高。严重的真菌感染主要累　及免疫受损人群，尤其是ＨＩＶ携带者／艾滋病和肿瘤患者，其次是结核病人。尽管真菌感染发生率高且预后　很差，但是很少被人们甚至医疗机构所关注。这次会议旨在减少全球真菌感染的发生，降低其死亡率，开发　有效、廉价的新型抗真菌药物和诊断试剂，更重要的是为下一个十年降低真菌感染的死亡率制定措施和诊疗　指南。大会对今后在全球范围内有效控制真菌感染起到了推动作用。