血浆纤维蛋白原Fbg测定
1.实验原理
确定量的血浆样本经过一定时间的加温后,加入纤维蛋白原试剂,采用波长为660nm的光照射样本,凝血过程中血浆的混浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定,从散射光光强度的测定,可以作出凝血曲线,通过PercentageDetectionMethod法求得凝血时间,再通过凝血时间,求出Fbg含量。
2.标本采集
2.1早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血。
2.23.8%(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀。
3.标本存放:1小时内(3000r/min×15min)分离血浆,室温放置不超过2小时,2~8℃保存不超过4小时,长时间保存需在冰冻条件下,(-70℃不超过6个月),只能冻融1次,在37℃迅速解冻,以减低凝血因子的消耗,解冻后立即测试。
4.标本运输:低温条件下运输。
5.标本拒收的标准:抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固,溶血,脂血标本不能作测定。
6.实验材料:
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6.1德国DadeBehringMarburg公司凝血酶试剂,每瓶加1ml蒸馏水溶解(20人份),未开封试剂2~8℃贮存到说明书上有效期.复溶试剂2~8℃保存不超过5天。
6.2Owren′s巴比妥绥冲液(PH7.35±0.1)用于标本的稀释,2~8℃贮存到说明书上有效期。
6.3DadeControl质控血浆。用蒸馏水1ml溶解后放置30分钟,才能使用或分装.复溶后,室温保存2小时,2~8℃4小时。
7.仪器设备:
7.1仪器名称:SysmexCA-1500全自动血液凝固分析仪
7.2仪器厂家:日本Sysmex公司
7.3仪器型号:SysmexCA-1500
7.4仪器技术参数:
7.4.1速度:最快检测速度180测试/小时,组合检测约140测试/小时
7.4.2试剂位:36个,具冷藏功能。
7.4.3样本位:50个,可自动连续添加。
7.5仪器校准程序:
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7.5.1校准频率:当方法改变,试剂厂家或试剂型号改变,仪器维修影响测定结果等情况时,必须进行校准。
7.5.2校准操作:设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)
8.操作步骤:
8.1检查前准备:
8.1.1清空废液瓶,清空反应杯抛弃槽。
8.1.2添加足够反应杯(不能超出警告线)
8.1.3添加清洁液试剂,清洗用蒸馏水等。
8.2开机
先开打印机再开主机,开机后仪器自检,约15分钟,屏幕上方“NotReady”变为“Ready”,表示仪器预热完成,进入系统准备工作状态,可进行测定。
8.3输入工作清单:从主菜单选WorkList→出现第一架样本工作清单输入画面,选IDNOEntry输入第一个样本号→按相应实验项目名称键Fbg,并同时输入此标本的其他测试项目,若选“凝血四项(PT、APTT、Fbg、TT)”,可按Profile#1组合选项选择,选中项目相应位置标记为“○”,选完项目后按ENTER确认,要删除某项目时只需按该项目(按键如PT○变为PT-)即可,→用↑↓键,同样输入其他标本编号项目。(快速输入可用Repeat键,输入重复标本数,复制同样项目的输入.
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8.4放置样本:按8.3所设好的工作清单顺序将离心分离好的样本放置于样本架上,并按顺序把样本架排列于Sampler进样器右边位置(最多同时放5架共50个样本)
8.5按Start键开始测定.
盖好遮光盖,确认仪器为准备状态(显示屏正上方显示“Ready”)按Start键,进样开始,→测定进行,仪器显示为“Analying”(被选择项目背景变为“◎”,此时可重复8.3,8.4,继续输入其他架样本工作清单,按Rigester,继续确认测试任务,添加样本架继续测试,→测定完成,测定项目背景变为“●”,打印机打印出测定结果,所有测定清单完成,系统恢复“Ready”状态.
8.6每日维护:完成每日的测定后,关机前维护.
8.6.1冲冼针RinseProbe
8.6.2清空废液瓶,和已使用过的反应杯.
8.6.3将试剂架连用试剂放入冰箱.
8.7关机:先关主机,再关打印机.
9.检验结果的判断与分析:
9.1仪器测定Fbg线性范围在0.25g/L-10g/L,测定完成仪器将显示每个参数的计算结果(包括凝固时间与Fbg含量g/L),若不能对参数进行正确计算,将出现下列信息:
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﹡﹡﹡,﹡出现错误,不能得到分析数据
ˉˉˉ,ˉ不能计算参数
+++,+数值超出线性范围.
9.2仪器设定Fbg参考范围在1.7-4.5g/L,如果得到一个不正常数值,在数据的左侧将出现下列标记:
﹡出现错误信息
<数据低于可报告的低限
>数据高于可报告的高限
10.质量控制:每批样本同时测定两个浓度水平(高值和正常值)的质控品,以2S为警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控.质控规则详见室内质控作业指导书.
11.临床意义:Fbg是用于判定血栓前状态或血栓性疾病的必查项目.
11.1参考范围:1.7-4.5g/L
11.2Fbg含量增高:高凝状态(如糖尿病伴血管病变,急性心肌梗塞,脑血管病变,口服避孕药,妊娠及其中毒症,深静脉血栓形成,动脉粥样硬化,高血脂症等);亦见于急性传染病,急性感染,肾小球疾病活动期,放射治疗后,烧伤,休克,外科手术后,恶性肿瘤,多发性骨髓瘤等.
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11.3Fbg含量减少:肝脏疾病(重症肝炎,慢性肝炎,肝硬化等);DIC消耗性低凝血期及纤溶期,溶栓治疗的监测,原发性纤维蛋白原缺乏症,原发性纤溶活性亢进,恶性贫血及肺、甲状腺、子宫、前列腺手术等.
11.4纤维蛋白原异常:纤维蛋白原异常是一种遗传疾病,是常染色体显性遗传.患者Fbg含量可能在正常范围,但纤维蛋白原有质的异常.主要是Fbg分子的一个多态上出现一个异常氨基酸,临床上可无症状或有轻度出血倾向.
12.变异的潜在来源
12.1抗凝剂:草酸盐、EDTA、肝素不能用于Fbg测定项目,抗凝比例不当也将
影响结果的准确性。
12.2样本采集处理不当,如血与抗凝剂未充分混匀,出现小凝块;混匀时过分用力,使红细胞破坏出现溶血,均会造成结果变异。
12.3纤溶药物的影响:如双香豆素、链激酶、尿酶等
12.4妊娠与急性炎症的影响
13.操作注意事项:干粉试剂及质控血浆溶解
13.1确认溶剂类型,一般溶解液包括:蒸馏水、生理盐水、缓冲液、厂家特定溶解液,必须按说明书要求使用。
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13.2溶解时,轻轻转动容器,保证干粉完全溶解,避免剧烈振荡。
13.3复溶后,室温放置5-10分钟方可使用。
14.仪器维护与保养
14.1日常维护(见8.6)
14.2每周维护
14.2.1液路冲洗:仪器在“Ready”状态下,从主菜单按SpecialMenu→按Maintain→按Rinse﹠Prepare→按Execute键运行此程序→完成后按Return返回。
14.2.2清洁仪器:定期用擦布擦干净仪器内外,包括试剂槽。
14.3需要时维护:
14.3.1调整压力:仪器在“Ready”状态下,以主菜单按SpecialMenu→按Maintain→按PressureAdjust键,显示压力是否在其调整范围内?若不在,则打开仪器右侧相应压力调整旋钮,旋动调整好压力,再锁紧旋钮。
14.3.2更换灯泡:关机→从仪器右侧取下灯泡外盖及内盖→换上好的灯泡→装上内外盖→从主菜单按SpecialMenu→再按Maintain→按Caliblamp→确认关上遮光盖,按Execute运行调整程序。
14.3.3更换保险管:关机→从仪器左侧旋下保险盖→更换上好的保险管→装上保险管
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盖。
15.参考文献
15.1叶应妩.王毓三等《全国临床检验操作规程》第三版,东南大学出版社.
15.2Sysmex公司《SysmexCA-1500操作手册》1998.6修订本.
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