GC法测定辛伐他汀的残留溶剂

临床医药　ＧＣ法测定辛伐他汀的残留溶剂　辜云燕　北大医药股份有限公司重庆４００７１４　摘要：目的为准确检测辛伐他汀中残留溶剂的量。方法建立顶空进样的气相色谱分析方法。结果本方法选择性好乙醇与二　氟甲烷峰的分离度不低于１．５，各溶剂峰的相对标准偏差均小于１５％；该方法用于辛伐他汀残留溶剂检测精密度好，方法精密　度ＲＳＤ均小于１５％：方法中间精密度好，连续三天ＲＳＤ小于１５％；乙醇在浓度为１．５～６００　ｕ　ｇ／ｍｌ的范围内，乙醇峰面积与浓　度的相关系数是０．９９９７２，回归方程为Ｙ＝５１４７Ｘ－５０４１：二氯甲烷在浓度为３～２４　ｇ／ｍＩ的范围内，二氟甲烷峰面积与浓度的　相关系数是０．９９９４４，回归方程为Ｙ＝Ｉ６７１Ｘ－３５２１：环已烷在浓度为Ｏ．１～６０　ｇ／ｍＩ的范围内，环己烷峰面积与浓度的相关系　数是０．９９９５０．回归方程为Ｙ：２８８２０Ｘ一２３６３８。结论对辛伐他汀残留溶剂检测方法进行验证，证明本方法选择性好、线性关系　良好、检测限和定量限极低，精密度高，能保证产品中残留溶剂被有效检出。　关键词：辛伐他汀：残留溶剂检测　中图分类号：ＴＱ４６０．７　文献标识码：Ａ　生产辛伐他汀中会残留部分有机溶剂，测定残留溶剂的　方法有顶空进样法，溶液直接进样法，而这些溶剂均易于挥　发，采用顶空检验法进行检测，并对这个方法进行验证。　１实验条件　１．１色谱条件　１．１．１气相色谱仪主机条件　色谱柱：ＤＢ—ｗＡＸ，３０ｍ×０．５３ｍｍＸ　１．Ｏｕｍ；　载气（高纯氮）线速度：３５ｃｍ／ｓ（恒压模式）；空气：　４５０ｍｌ／ｍｉｎ；高纯氢（纯度９９．９９９％以上）：４０　ｍｌ／ｍｉｎ；　进样口温度：１４０℃；分流比：５：１　进样量：ｌｍｌ（气体）；　柱温：　初温４０。Ｃ保持１５分钟，以速率为２０＂Ｃ／ｍｉｎ升　温至２００＂Ｃ保持３分钟；　检测器：ＦＩＤ（２５０℃）　１．１．２顶空进样器条件　进样瓶加热温度：８０￣Ｃ；加热平衡时间：３５ｍｉｎ：循环　时间３５ｍｉｎ　进样环温度：９０℃；传温线温度：１００℃；　进样瓶加压：２０．ＯＰｓｉ；顶空载气压力：２Ｏ．ＯＰｓｉ　１．２溶液的配制　１．２．１环己烷贮备液：称取环己烷标准品５０ｍｇ；置于预　先装有适量乙腈ｌＯＯｍｌ容量瓶中，并用乙腈稀释至刻度，摇　匀即得。　１．２．２二氯甲烷贮备液：称取二氯甲烷标准品２０ｍｇ；置　于预先装有适量乙腈ｌＯＯｍｌ容量瓶中，并用乙腈稀释至刻度，　摇匀即得。　１．２．３参比溶液：称取乙醇标准品５０ｍｇ，置于预先装有　适量乙腈ｌＯＯｍｌ容量瓶中，另精密吸取环己烷贮备液及二氯　甲烷贮备液各１０ｍ１于此ｌＯＯｍ１容量瓶中，用乙腈稀释至刻　度，摇匀；吸取此液ｌＯｍｌ于２０ｍｌ顶空进样瓶中，立即密封　瓶盖，即得。　１．２．４样品溶液：称取约１．Ｏｇ辛伐他汀于含ｌＯｍｌ乙腈　的２０ｍｌ项空进样瓶中，立即密封瓶盖，摇溶即得。　１．２．５空白溶液：吸取乙腈ｌＯｍｌ于２０ｍｌ顶空进样瓶中，　立即密封瓶盖，即得。　‘１．３测定方法　１．３．１取待测定溶液，经顶空进样器加热后，进行色谱　分析；　公式：０　２样　中残留溶刭荩臁按下式计算：　Ｘ气：　二＝　　一Ｃｉ（ｐｐｍ）＝ＲＦｉ式中：　”　ＲＦｉ一溶剂ｉ的校正因子；　ｃｉ一样品溶液中溶剂ｉ残留量（ｐｐｍ）　ＡＳｉ一样品中溶剂ｉ的峰面积；　Ｗｓｉ一样品重量；ｇ　Ｋ一样品稀释因子（１０）。　２系统适用性验证　２．１按色谱条件，连续６次注入参比溶液　文章编号：１６７１－５８３７（２０１５）０１－００９４－０２　取第一针参比液得到的色谱图，计算二氯甲烷与乙醇峰　的分离度。计算环己烷、二氯甲烷、乙醇峰面积的相对标准　偏差。　２．２实验结果　二氯甲烷和乙醇峰的分离度３．０；重复进样中，环己烷　峰面积的相对标准偏差２．ｏ％。二氯甲烷峰面积的相对标准偏　差３．６％。乙醇峰面积的相对标准偏差７．３％。　３方法的专属性验证　３．１溶液的配制　３．１．１乙醇标准液：称取乙醇标准品５０ｍｇ置于预先装　有适量乙腈ｌＯＯｍｌ容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀；吸　取此液ｌＯｍｌ于２０ｍｌ顶空进样瓶中，立即密封瓶盖，即得。　３．１．２二氯甲烷标准液：称取二氯甲烷２０ｍｇ置于预先　装有适量乙腈ｌＯＯｍｌ容量瓶中，并用乙腈稀释至刻度，摇匀。　精密吸取ｌＯｍｌ于ｌＯＯｍｌ容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇　匀。吸取此液ｌＯｍｌ于２０ｍｌ顶空进样瓶中，立即密封瓶盖，　即得。　３．１．３环己烷标准液：称取环己烷５０ｍｇ置于预先装有　适量乙腈ｌＯＯｍｌ容量瓶中，并用乙腈稀释至刻度，摇匀。精　密吸取１０ｍｌ于ｌＯＯｍｌ容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀。　吸取此液ｌＯｍｌ于２０ｍｌ顶空进样瓶中，立即密封瓶盖，即得。　３．１．４样品加参比液：称取约ｉ．Ｏｇ辛伐他汀置于预先装　有ｌＯｍｌ参比液的２０ｍｌ顶空进样瓶中，摇溶即得。　３．２色谱分析过程　３．２．１进一针空白溶剂，记录空白溶剂中各溶剂峰的保　留时间；　３．２．２分别进一针乙醇、二氯甲烷、环己烷标准液，记　录各溶剂峰的保留时间；　３．２．３进一针参比液，计算所有相邻色谱峰的分离度，　要求所有分离度均应不低于１．５。　．　３．２．４进一针样品溶液，记录样品中各残留溶剂峰保留　时间：　３．２．５进一针样品加参比溶液，计算相邻峰的分离度，　要求分离度应不低于１．５。　３．３实验结果　空白溶液无与环己烷、二氯甲烷、乙醇相同保留时间的　色谱峰出现；参比液和样品加参比溶液中二氯甲烷与乙醇峰　的分离度均大于１．５。　４定量限、检测限试验　４．１溶液的配制　４．１．１取辛伐他汀样品适量干燥至恒重。　４．１．２样品溶液：称取１．２项下的样品约１．Ｏｇ于含ｌＯｍｌ　乙腈的２０ｍｌ项空进样瓶中，立即密封瓶盖，摇溶即得。　４．１．３定量限测试液：从参比液浓度的１２０％开始逐级稀　释，并将每个稀释后的参比液按１．３项的方式进行处理（用　参比液代替其中的乙睛）直到满足信噪比１０±１：１为止。作　为各溶剂定量限测试液。　４．１．４检测限测试液：从定量限测试液浓度开始逐级稀　中国科技期刊数据库医药　释，并将每个稀释后的参比液按１．３项的方式进行处理（用　参比液代替其中的乙睛）直到满足信噪比３±１：１为止。作　为各溶剂检测限测试液。　４．２色谱分析　４．２．１进６针参比液，进行系统适用性试验。　４．２．２进三针空白溶液，取其中较平滑一段计算噪音　（取程序升温前的基线），并计算其噪音平均值（Ｎ）。　４．２．３进一针样品溶液，应无溶剂峰出现。　４．２．４对各定量限溶液进行色谱分析，每个定量限溶液　连续进６针；　４．２．５对各检测限溶液进行色谱分析，每个检测限溶液　连续进３针；　４０ｕｇ／ｍｌ、３ｕｇ／ｍｌ、０．１　ｕｇ／ｍｌ的标准溶液。（浓度根据实际　情况进行调整）　５．２色谱分析　５．２．１进行系统适用性试验　５．２．２对每个标准溶液分别测试三次，计算峰面积平均　值。　５．２．３以浓度为横标，峰面积为纵坐标，作图；　环己烷的线性回归方程：Ｙ＝２８８２０Ｘ－２３６３８　二氯甲烷的线性回归方程：Ｙ＝１６７１Ｘ－３５２１　乙醇的线性回归方程：Ｙ＝５１４７Ｘ－５０４１　环己烷峰面积与浓度的相关系数是０．９９９５０；二氯甲烷　峰面积与浓度的相关系数是‘０．９９９４４；乙醇峰面积与浓度的　４．２．６取信噪比为１０±１：１时，对应的各溶剂浓度，按　相关系数是０．９９９７２。　以下公式　算出各溶剂的定量限（ＬＯＱ）　５．２．４实验结果　Ｌ０Ｑ＝　乙醇在浓度为ｌ＿５￣６００　ｕ　ｇ／ｍ１的范围内，乙醇峰面积　式中　与浓度的相关系数是０．９９９７２，回归方程为Ｙ＝５１４７Ｘ－５０４１；　Ｌ０Ｑ一一各溶剂的定量限；ｐｐｍ　二氯甲烷在浓度为３～２４　ｕ　ｇ／ｍ１的范围内，二氯甲烷峰面积　ＣＱ一一信噪比为１Ｏ±１：ｌ时对应各溶剂浓度；ｕｇ／ｍｌ　与浓度的相关系数是０．９９９４４，回归方程为Ｙ＝１６７１Ｘ－３５２１；　ｃ一一样品的浓度。ｇ／ｍ１　环己烷在浓度为０．１～６０　ｇ／ｍｌ的范围内，环己烷峰面积与　４．２．７取信噪比为３±１：１时，对应的各溶剂浓度，按以　浓度的相关系数是０．９９９５０，回归方程为Ｙ＝２８８２０Ｘ一２３６３８。　下公式计算出各溶剂的检测限（ＬＯＤ）　结果历．３　积与浓度作图应为一条直线验证。　Ｌ０Ｄ　６精密度　式中　６．１重复性试验　ＬＯＱ一一各溶剂的定量限；ｐｐｍ　６．１．１重复性：取中间精密度项下得到的系统适用性色　ＣＤ一一信噪比为３±１：１时对应各溶剂浓度；ｕｇ／ｍｌ　谱图，计算每个测试液得到的各溶剂峰面积相对标准偏差。　Ｃ一一样品的浓度。ｇ／ｍ１　６．２中间精密度　４．３实验结果：　６．２．１进行系统适用性试验，并计算各溶剂峰的校正因　在满足峰高精密度的条件下，浓度为０．１ｕｇ／ｍｌ时是环　子　己烷的定量限：ｌｐｐｍ，浓度为０．０３　ｕｇ／ｍｌ时是环己烷的检　６．２．２对测试液进行色谱分析（进两针），并计算每针测　测限：０．３　ｐｐｍ；浓度为３　ｕｇ／ｍｌ时是二氯甲烷的定量限：　试液中各溶剂的量。　３０ｐｐｍ，浓度为０．９ｕｇ／ｍｌ时是二氯甲烷的检测限：９　ｐｐｍ；　６．２．３计算所有测定结果的相对标准偏差　浓度为１．５　ｕｇ／ｍｌ时是乙醇的定量限：１５　ｐｐｍ，浓度为　６．３实验结果　０．５ｕｇ／ｍｌ时是乙醇的检测限：５ｐｐｍ。　重复性试验中三种溶剂的ＲＳＤ均小于１５％；中间精密度　５线性与范围　试验中，连续三天三种溶剂的ＲＳＤ均小于１５％。　５．１溶液的配制　参考文献　５．１．１配制乙醇浓度均分别为６００ｕｇ／ｍｌ、５００　ｕｇ／ｍｌ、　［１］王巍，等．ＶＩＩＩ　Ｐ残留溶剂测定法．中华人民共和国药典　４００ｕｇ／ｍｌ、１２．５ｕｇ／ｍｌ、１．５　ｕｇ／ｍｌ的标准溶液。（浓度根据　２０１０年版（第九版）：附录６１　实际情况进行调整）　［２］程丽琼，等．气相色谱一质谱联用法测定玩具中的致敏　５．１．２配制二氯甲烷浓度均分别为２４ｕｇ／ｍｌ、２０　ｕｇ／ｍｌ、　性芳香剂．分析实验室，２０１４，３３（１Ｏ）：１１７１　１６ｕｇ／ｍｌ、４ｕｇ／ｍｌ、３ｕｇ／ｍｌ的标准溶液。（浓度根据实际情况　［３］周相娟，等．气相色谱一质谱法测定化妆品中１６种有　进行调整）　机氯农药．分析实验室，２０１３，３２（１２）：７４　５．１．３配制环己烷浓度均分别为６０ｕｇ／ｍｌ、５０　ｕｇ／ｍｌ、　（上接第９３页）　样品峰面积：４．２，４．４，４．３。计算回收率（％）：８３．２，８７．１，　参考文献　８５．２。试验结果符合要求。　［１］刘雪莉，张敏，袁坤．克林霉素磷酸酯注射液细菌内毒　结论与评价　素检查限值的研究［Ｊ］．中国药房，２０１２，（５）：４４３－４４４．　通过对克林霉素磷酸酯残留检测方法进行确认来证明：　［２］Ｋ．Ｍ．Ｊｅｎｋｉｎｓ　ａｎｄ　Ａ．Ｊ．　Ｖａｎｄｅｒｗｅｉ　ｌｅｎ，　“ＣＩｅａ／３ｉｎｇ　该方法对克林霉素磷酸酯残留检测具有良好的专属性；我司　ＶａｌｉｄａｔｉＯＮ　Ａｎ　０ｖｅｒａｌｌ　ＰｅｒｓｐｅｃｔｉＶ６．”　实验条件下的检测限和定量限能满足检测要求；线性回归相　Ｐｈａｒｍ．ＴｅｃｈｎｏＩ．１８（４），６Ｏ一７３（１９９４）．　关系数符合规定；回收试验符合规定。从而证明该方法适用　［３］蔡剑秋．中华人民共和国药典［Ｍ］．北京：化学工业出版　于我司实验条件下对我司生产的克林霉素磷酸酯残留量的　社．１９９５．　检测，能有效控制生产中产品的交叉污染，控制产品质量。　９５