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发表于刚刚出版的《生物学》(Journal of Biology)的一项研究,挑战近代生物学中关于细胞生长的理论。研究人员表示,哺乳细胞并不会*它们的大小,因而驳斥了科学家从70年代以来的假说。
研究人员Conlon 和Raff 做了一系列的试验,使用大鼠坐骨神经的Schwann细胞进行研究,建立哺乳细胞如何控制它们的大小并且决定于何时进行*。这种细胞决定大小、生长和*的过程,已经在酵母中普遍地研究了30年。当酵母和哺乳动物的细胞生长及*时,知道要维护恒定的细胞大小。
因此研究人员长久以来假设,酵母细胞可以确保*及生长时达到正确大小的机制,也适用于哺乳动物的细胞,但这项假说并未进行实验测试,直到这篇研究发表。
使用精确地测量方式,Conlon 和Raff 发现酵母和哺乳细胞生长上的重要区别。酵母细胞成指数地增长,在固定的时期大小加倍,但哺乳细胞则是线性地生长,每天增加的大小是一致的;这意味着,哺乳细胞增长的比率是相同的,但是酵母细胞中,较大的细胞生长得会比小的更为快速。
培养细胞生长过程:潜伏期→指数增生期→停滞期
一、潜伏期(latent phase):
细胞接种后,先经过一个在培养液中呈悬浮状态的悬浮期.此时,细胞质回缩, 胞体呈圆球形.然后细胞贴附于载体表面,称贴壁,悬浮期结束. 细胞贴壁速度与细胞种类, 培养基成分,载体的理化性质等密切相关。一般情况下,原代培养细胞贴壁速度慢,可达10-24 小时或更多, 而传代细胞系贴壁速度快, 通常10-30 分钟即可贴壁。细胞贴壁后还需经过一个潜伏阶段,才进入生长和增殖期.原代培养细胞潜伏期,约24-96 小时或更长, 连续细胞系和肿瘤细胞潜伏期短,仅需6-24 小时。
二、指数增生期(logarithmic growth phase)
这是细胞增殖最旺盛的阶段,*相细胞增多。指数增生期细胞*相数量可作为判定细胞生长是否旺盛的一个重要标志。通常以细胞*相指数(Mitotic index, MI)表示,即细胞群中每1000 个细胞中的*相数。一般细胞的*指数介于0.1%-0.5%,原
代细胞*指数较低,而连续细胞和肿瘤细胞*相指数可高达3%-5%。
指数增生期的细胞是细胞活力最好时期,是进行各种实验最佳时期,也是冻存细胞的最好时机。在接种细胞数量适宜情况下,指数增生期持续3-5 天后,随着细胞数量不断增多、生长空间减少,最后细胞相互接触汇合成片。正常细胞相互接触后能抑制细胞运动,这种现象称接触抑制现象(contact inhibition)。而恶性肿瘤细胞无接触抑制现象,能继续移动和增殖,导致细胞向三维空间扩展,使细胞发生堆积(piled up)。细胞接触汇合成片后,虽然发生接触抑制,但只要营养充分,细胞仍能进行增殖*,因此细胞数仍然在增多。但是,当细胞密度进一步增大,培养液中营养成分减少,代谢产物增多时,细胞因营养枯竭和代谢产物的影响,导致细胞*停止,这种现象称密度抑制现象(Density Inhibition)。
三、停滞期(Stagnate phase)
细胞数量达到饱和密度后,如不及时进行传代,细胞就会停止增殖,进入停止期。此时细胞数持平,故也称平台期(Plateau phase)。停滞期细胞虽不增殖,但仍有代谢活动。如不进行分离传代,细胞会因培养液中营养耗尽、代谢产物积聚、pH 下降等因素中毒,出现形态改变,贴壁细胞会脱落,严重的会发生死亡,因此,应及时传代。
培养细胞基本形态特点
培养细胞随贴附支持物形状不同而形态各异,最常见的是贴附于平面支持物细胞。在一般光镜下生存中的细胞是均质而透明的,结构不明显。细胞在生长期常有1-2 个核仁。
在细胞机能状态不良时,细胞轮廓会增强,反差增大。若胞质中时而出现颗粒、脱滴和腔泡等,表明细胞代谢不良。
体外培养细胞根据它们在培养器皿是否能贴附于支持物上生长特征,可分为贴附型生长和悬浮型生长两大类。贴附型细胞在培养时能贴附在支持物表面生长。如羊水细胞为贴附型细胞,常表现为成纤维型细胞和上皮细胞生长。悬浮型细胞在培养基中悬浮生长。
(1)成纤维型细胞
在培养中的细胞凡形态与成纤维细胞类似时,皆可称之为成纤维细胞。本型细胞由形态与体内成纤维细胞的形态相似而得名,细胞在支持物表面呈梭形或不规则三角形生长,细胞*有卵园形核,胞质向外伸出2-3 厘米个长短不同的突起,除真正的成纤维细胞外,凡由中胚层间质起源的组织细胞常呈本类形态生长。
(2)上皮型细胞
此类型细胞在培养器皿支持物上生长具有扁平不规则多角形特征,细胞*有园形核,细胞紧密相连单层膜样生长。起源于内、外胚层细胞如皮肤、表皮衍生物、消化管上皮等组织细胞培养时,皆呈上皮型形态生长。
(3)游走型细胞
本型细胞在支持物上散在生长,一般不连成片。细胞质经常伸出伪足或突起,呈活跃的游走或变形运动,速度快且不规则。此型细胞不很稳定,有时亦难和其它型细胞区别。在一定的条件下,由于细胞密度增大联成片后,可呈类似多角型或成纤维细腻包形态。常见于羊水细胞培养的早期。