干货|常规病理技术-免疫组化(IHC)
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发布时间：2025-01-02 19:38
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免疫组化技术，全称为免疫组织化学技术（IHC），是应用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究。IHC技术在处理复杂病例、进行诊断和鉴别诊断方面具有显著的意义。其应用广泛，在科研领域中，IHC技术可用于确定组织形态，还可用于检测靶标在细胞和亚细胞水平上的定位，以及观察蛋白质表达的丰度等等。
组织芯片技术（TMA）是近年来发展起来的以形态学为基础的分子生物学新技术，是一种高通量、多样本的分析工具。它将数十个甚至上千个微小组织片整齐排列在一张载玻片上而制成的高通量组织切片，形成微阵列，将标记特定基因的核酸探针或抗体探针与之杂交，以检测该基因在不同组织中的表达情况。因此组织芯片是传统核酸原位杂交或免疫组化实验的集成，免疫组化一次检测一个基因在一种组织中的表达，而组织芯片一次检测一个基因在多种组织中的表达。
免疫组化技术的原理基于抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（ALP或AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。
免疫组化技术的流程包括石蜡切片和冰冻切片两个主要步骤。石蜡切片步骤包括脱蜡与水化、细胞通透与封闭、抗原修复、血清封闭、孵育一抗、孵育二抗、切片显色、复染及封片。冰冻切片步骤包括固定冷冻切片组织、固定后清洗、血清封闭、孵育一抗、孵育二抗、滴加DAB、复染及封片。
样品要求包括包埋、切片和染色。包埋要求包括石蜡包埋和OTC包埋，送样要求包括动物组织的固定、包埋、大小、固定液的使用、运输方式等。切片要求包括石蜡切片和冰冻切片，送样要求包括运输方式。染色要求包括石蜡切片和冰冻切片，送样要求包括运输方式。
免疫组化技术的结果展示可以通过图片或数据报告形式呈现，临床应用广泛，包括恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断、确定原发部位、病理分型、软组织肿瘤分类、微小转移灶的发现以及为临床提供治疗方案的选择等。常见问题包括免疫组化产生组织切片非特异性染色、背景过深、抗体选择、石蜡切片和冰冻切片的比较、免疫组化结果分析等。
