植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标，本实验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法。
一、苯酚法测定可溶性糖 【原理】
植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10～100Mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nM波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定时间在160Min以上。
【仪器与用具】
分光光度计；电炉；铝锅；20Ml刻度试管；刻度吸管5Ml 1支，1Ml 2支；记号笔；吸水纸适量。
【试剂】
90％苯酚溶液：称取90g苯酚(AR)，加蒸馏水10Ml溶解，在室温下可保存数月； 9％苯酚溶液：取3Ml 90％苯酚溶液，加蒸馏水至30Ml，现配现用； 浓硫酸(比重1.84)；
1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。加少量水溶解，移入100Ml容量瓶中，加入0.5Ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度；
100μg／L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1Ml加入100Ml容量瓶中，加水定容。 【方法】
1.标准曲线的制作取20Ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表1－1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1Ml 9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5～20s时间加入5Ml浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8Ml，在恒温下放置30Min，显色。然后以空白为对照，在485nM波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
表1-1各试管加入溶液和水的量
试管 水（ml) 苯酚（ml） 浓硫酸（ml） 蔗糖量（μg）
1 2.0 1.0 5.0 0
2 0.2 1.8 1.0 5.0 20
3 0.4 1.6 1.0 5.0 40
4 0.6 1.4 1.0 5.0 60
5 0.8 1.2 1.0 5.0 80
6 1.0 1.0 1.0 5.0 100
100ug/L蔗糖液（ml） 0
2.可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10～0.30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5～10Ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30Min(提取2次)，提取液过滤入25Ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
3.测定吸取0.5Ml样品液于试管中(重复2次)，加蒸馏水1.5Ml，同制作标准曲线的步骤，按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液，显色并测定光密度。由标准线性方程求出糖的量，按式（1－1）计算测试样品中糖含量。
可溶性糖含量(％)＝(C×V／A)／(W×10) ×100 (1－1) 式中C:标准方程求得糖量(μg)；A:吸取样品液体积(Ml)； V：提取液量(Ml)；n：稀释倍数；W：组织重量(g)。
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四、淀粉的测定 【原理】
淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物，利用苯酚或蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应，即可进行比色测定。
【仪器与用具】
电子天平；容量瓶：100Ml 4个，50Ml 2个；漏斗；小试管若干支；电炉；刻度吸管0��5Ml 1支，2.0Ml 3支，5Ml 4支；分光光度计；记号笔。
【试剂】
浓硫酸(比重1.84)； 9.2Mol／LHClO4； 9％苯酚，同方法一
淀粉标准液：准确称取100Mg纯淀粉，放入100Ml容量瓶中，加60～70Ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸0.5H，冷却后加蒸馏水稀释至刻度，则每毫升含淀粉1Mg，吸取此液5.0Ml，加蒸馏水稀释至50Ml，即为每毫升含淀粉100μg的标准液。
【方法】
1.标准曲线制作取小试管6支从1-6编号，按表1-3加入溶液和蒸馏水。 以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可，见方法一或方法二，绘制相应的标准曲线。
表1-3
试管 标淀粉液（ml） 蒸馏水（ml) 苯酚（ml） 浓硫酸（ml） 蔗糖量（μg）
1 0 2.0 1.0 5.0 0
2 0.4 1.6 1.0 5.0 40
3 0.8 1.2 1.0 5.0 80
4 1.2 0.8 1.0 5.0 120
5 1.6 0.4 1.0 5.0 160
6 2.0 0 1.0 5.0 200
2.样品提取将提取可溶性糖以后的残渣，移入50Ml容量瓶中，加20Ml热蒸馏水，放入沸水中煮沸15Min，再用9.2Mol／L高氯酸4Ml提取15Min，冷却后，混匀，用滤纸过滤，并用蒸馏水定容(或以2500r／Min离心10Min)。
3.测定可采用苯酚法或蒽酮显色法测定。
按1－3式计算淀粉的含量。淀粉水解时，在单糖残基上加了1分子水，因而计算时所得的糖量乘以0.9才为扣除加入水后的实际淀粉含量。
淀粉含量(％)＝(C×V／A)(W×10)×100 (1－3) 式中C：标准曲线查得的淀粉含量(μg)； V：提取液总量(Ml)； A：显色时取液量(Ml)； W：样品重(g)。
注：淀粉水解完全度试验：样品测定中可同时作1份用于淀粉水解完全度检验的样品，在酸解过滤后，将其残渣加上2Ml水，搅拌均匀，吸2滴于白瓷盘上，加2滴I2-KI溶液，显微镜下观察，若出现紫蓝色颗粒，证明水解不完全，其正式测试样品需再加高氯酸水解，直至不出现蓝紫色为止。
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